黄芪对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生的影响
作者：邱世翠 李波清 彭新国 阮月芹
单位：邱世翠 李波清(山东滨州医学院免疫学教研室 256603)；彭新国 阮月芹(山东滨州医学院附属医院检验科 256603)
关键词：黄芪；淋巴细胞增殖；IL-2；小鼠
中国现代医学杂志000603
目的：从免疫功能方面探讨中药黄芪的强身健体作用。方法：用100%黄氏水浸出液定期给小白鼠灌胃，然后检测小白鼠淋巴细胞增殖和IL-2的产生。结果：用药组小白鼠对脾淋巴细胞增殖和IL-2产生有显著增强作用，与对照组相比有非常显著性差异(P<0.001)，未见有副作用。结论：口服黄芪可明显增强机体免疫功能。
分类号 R96
EFFECT OF ASTRAGALUS MEMBRANACEOUS (AM) ON
, http://www.100md.com
LYMPHOCYTE PROLIFERATION AND INTER
LEUKIN-2 (IL-2) PRODUCTION OF MICE
Qiu Shicui，Li Boqing，Peng Xinguo
(Department of Immunology, Binzhou Medical College, Binzhou, Shandong 256603)
[Abstract] Objective: To research the health promotion effect of AM. Methods: Fi lled the stomaches of mice with 100% water extract of AM regularly and tested ly mphocyte proliferation and Interleukin-2 (IL-2) production. Results: Compared wi th control group, the lymphocyte proliferation and IL-2 production increased sig nificantly in AM group (p<0.001) and no side effect appeared. Conclusion s: These results indicated that taking AM orally could enhance immune function obviously .
, 百拇医药
Key words: Astragalus membranaceous (AM); Lymphocyte proliferation; IL-2 ; Mouse
黄芪是经典的补气药之一，具有利尿、强身、降压、提高机体免疫功能等作用[1，2]，本研究通过细胞培养观察黄芪对小鼠脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生，以研究黄芪提高机体免疫功能的机理，为临床应用黄芪预防或治疗某些疾病提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 试剂和仪器
黄芪(购于附属医院中药房)50g加水500ml，温火煎煮2h，去渣浓缩为50ml备用。美国产Multiskan全自动酶标仪；CO2培养箱由美国Forma公司生产；美国产(IE.USA)冷冻离心机；超净工作台由苏州净化设备厂生产；ConA为美国Sigma产品；MTT为FLUKA公司产品；二甲基亚砜(DMSO)为苏州化工研究所生产；RPMI1640为美国GIBCO公司产品。
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1.2 动物分组与给药
Balb/c小鼠，体重18～22g，雌雄不限，购于北京医科大学实验动物中心。将动物随机分为两组，每组8只。Ⅰ组为生理盐水对照组；Ⅱ组为药物实验组。Ⅰ组用生理盐水灌胃，0.5ml/次/只，1次/d；Ⅱ组用黄芪液灌胃，0.5ml/次/只，1次/d，共10次。
1.3 检测指标及方法
1.3.1 淋巴细胞增殖反应[3] 无菌制备小鼠脾细胞悬液，用RPMI-1640不完全培养液洗涤2次，每次1?000r/min，离心10min，然后用完全培养液配成5×106/ml，取100μl加入96孔细胞培养板内(每孔含5×106/ml个细胞)，加入终浓度为5μg/ml的ConA，置37℃，5%CO2培养箱中培养48h后，每孔加入10μl MTT溶液(5mg/ml)，再继续培养12h，然后加入DMSO 100μl，充分振荡后静置20min，全自动酶标仪用560nm波长进行比色分析。
, 百拇医药
1.3.2 IL-2的诱生 取上述已制备的脾细胞悬液5×106/ml，放培养瓶中，置37℃，5%CO2培养箱中培养40h，离心收集上清液，置-20℃冰箱保存备用。
制备活化的脾淋巴细胞：按上法无菌取正常Ba1b/c小鼠脾脏[4]，制成5×106/ml细胞悬液，加入ConA使其终浓度为5μg/ml，置37℃，5%CO2培养箱中培养48h，收集细胞，离心洗涤2次，用完全RPMI 1640配成5×105/ml细胞悬液，作为检测IL-2的反应细胞。
1.3.3 IL-2活性检测[4] 取-20℃保存的IL-2上清液，并做1/2和1/4的稀释，在96孔平底培养板中，每孔加入IL-2上清液或不同稀释度的IL-2上清液100μl以及上述反应细胞100μl；阳性对照不加IL-2上清，加100μl1640培养液，各设4个复孔。于37℃，5%CO2培养箱中培养48h，每孔加MTT(5mg/ml)10μl，继续培养4h，吸弃100μl上清液，加入酸化异丙醇100μl(0.04mol/L HCl-异丙醇)[5]，充分振荡后静置20min，全自动酶标仪用560nm波长进行比色分析。
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1.4 结果处理
实验结果采用组间均数差异t检验的方法进行统计学分析。
2 结果
附表 黄芪对小鼠淋巴细胞增殖反应和
IL-2产生的影响 (
±s) 组别
n
胸淋巴细胞增殖
IL-2
对照组
9
0.116±0.004
, 百拇医药
0.140±0.005
药物组
8
0.0402±0.021
0.313±0.014
注：与对照组相比均P<0.001
附表显示：用药组对脾脏淋巴细胞增殖反应明显，IL-2的产生明显增强，与对照组相比有非常显著性差异(P<0.001)。3 讨论
黄芪可通过增加抗体产生，促进IL-2、IL-3等细胞因子的分泌[7]，明显提高机体的细胞免疫功能。本实验研究了黄芪对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生的影响，结果表明黄芪可使ConA激发的T淋巴细胞增殖反应明显增强，表明黄芪对T淋巴细胞功能具有增强作用，同时对B细胞免疫功能也具有明显增强作用。已知T细胞是机体免疫系统赖以实现细胞免疫调节的重要细胞，在机体特异性免疫应答中起核心作用，T细胞功能障碍会直接影响机体的细胞免疫应答和免疫调节。本文研究还发现黄芪对细胞因子IL-2有促进作用。IL-2主要是由辅助T细胞产生的非特异性细胞因子，作用于已活化的T细胞促进其增殖，并对B细胞有调节作用。黄芪可明显促进小鼠脾细胞产生IL-2的水平，间接增强体液免疫应答。分析上述免疫指标改变的原因可能是黄芪对T淋巴细胞的直接促进作用，或作用于巨噬细胞促进IL-1产生，从而促进了T淋巴细胞产生淋巴因子，进而促进了T淋巴细胞增殖及IL-2的产生。以上两项免疫学指标均明显改变，组间相比有非常显著性差异(P<0.001)。提示如肌体免疫功能下降者或肿瘤辅助治疗者可长期口服黄芪以增强免疫功能。本实验为黄芪的临床应用提供了实验依据。
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参考文献
1，吴华仆，陆国椿.黄芪注射液对小鼠整体氧耗的动态观察.时珍国医国药，1999；10(7)：490～491
2，雷正一，王硕仁.黄芪对心血管系统的作用.中国中西医结合杂志，1993；13(7)：443～446
3，高 梅，贾 镭，陈 芬，等.虎尿对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生的影响.中国实验临床免疫学杂志，1999；11(3)：39
4，王运平，李波清，丁桂华，等.大黄对IL-1和IL-2产生的影响.山东滨州医学院学报，1998；21(3)：222
5，武建国主编.实用临床免疫学检验.南京：江苏科学技术出版社，1989：160
6，龙振洲主编.医学免疫学.第2版.北京：北京人民出版社，1996：219, http://www.100md.com
单位：邱世翠 李波清(山东滨州医学院免疫学教研室 256603)；彭新国 阮月芹(山东滨州医学院附属医院检验科 256603)
关键词：黄芪；淋巴细胞增殖；IL-2；小鼠
中国现代医学杂志000603
目的：从免疫功能方面探讨中药黄芪的强身健体作用。方法：用100%黄氏水浸出液定期给小白鼠灌胃，然后检测小白鼠淋巴细胞增殖和IL-2的产生。结果：用药组小白鼠对脾淋巴细胞增殖和IL-2产生有显著增强作用，与对照组相比有非常显著性差异(P<0.001)，未见有副作用。结论：口服黄芪可明显增强机体免疫功能。
分类号 R96
EFFECT OF ASTRAGALUS MEMBRANACEOUS (AM) ON
, http://www.100md.com
LYMPHOCYTE PROLIFERATION AND INTER
LEUKIN-2 (IL-2) PRODUCTION OF MICE
Qiu Shicui，Li Boqing，Peng Xinguo
(Department of Immunology, Binzhou Medical College, Binzhou, Shandong 256603)
[Abstract] Objective: To research the health promotion effect of AM. Methods: Fi lled the stomaches of mice with 100% water extract of AM regularly and tested ly mphocyte proliferation and Interleukin-2 (IL-2) production. Results: Compared wi th control group, the lymphocyte proliferation and IL-2 production increased sig nificantly in AM group (p<0.001) and no side effect appeared. Conclusion s: These results indicated that taking AM orally could enhance immune function obviously .
, 百拇医药
Key words: Astragalus membranaceous (AM); Lymphocyte proliferation; IL-2 ; Mouse
黄芪是经典的补气药之一，具有利尿、强身、降压、提高机体免疫功能等作用[1，2]，本研究通过细胞培养观察黄芪对小鼠脾淋巴细胞增殖反应和IL-2的产生，以研究黄芪提高机体免疫功能的机理，为临床应用黄芪预防或治疗某些疾病提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 试剂和仪器
黄芪(购于附属医院中药房)50g加水500ml，温火煎煮2h，去渣浓缩为50ml备用。美国产Multiskan全自动酶标仪；CO2培养箱由美国Forma公司生产；美国产(IE.USA)冷冻离心机；超净工作台由苏州净化设备厂生产；ConA为美国Sigma产品；MTT为FLUKA公司产品；二甲基亚砜(DMSO)为苏州化工研究所生产；RPMI1640为美国GIBCO公司产品。
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1.2 动物分组与给药
Balb/c小鼠，体重18～22g，雌雄不限，购于北京医科大学实验动物中心。将动物随机分为两组，每组8只。Ⅰ组为生理盐水对照组；Ⅱ组为药物实验组。Ⅰ组用生理盐水灌胃，0.5ml/次/只，1次/d；Ⅱ组用黄芪液灌胃，0.5ml/次/只，1次/d，共10次。
1.3 检测指标及方法
1.3.1 淋巴细胞增殖反应[3] 无菌制备小鼠脾细胞悬液，用RPMI-1640不完全培养液洗涤2次，每次1?000r/min，离心10min，然后用完全培养液配成5×106/ml，取100μl加入96孔细胞培养板内(每孔含5×106/ml个细胞)，加入终浓度为5μg/ml的ConA，置37℃，5%CO2培养箱中培养48h后，每孔加入10μl MTT溶液(5mg/ml)，再继续培养12h，然后加入DMSO 100μl，充分振荡后静置20min，全自动酶标仪用560nm波长进行比色分析。
, 百拇医药
1.3.2 IL-2的诱生 取上述已制备的脾细胞悬液5×106/ml，放培养瓶中，置37℃，5%CO2培养箱中培养40h，离心收集上清液，置-20℃冰箱保存备用。
制备活化的脾淋巴细胞：按上法无菌取正常Ba1b/c小鼠脾脏[4]，制成5×106/ml细胞悬液，加入ConA使其终浓度为5μg/ml，置37℃，5%CO2培养箱中培养48h，收集细胞，离心洗涤2次，用完全RPMI 1640配成5×105/ml细胞悬液，作为检测IL-2的反应细胞。
1.3.3 IL-2活性检测[4] 取-20℃保存的IL-2上清液，并做1/2和1/4的稀释，在96孔平底培养板中，每孔加入IL-2上清液或不同稀释度的IL-2上清液100μl以及上述反应细胞100μl；阳性对照不加IL-2上清，加100μl1640培养液，各设4个复孔。于37℃，5%CO2培养箱中培养48h，每孔加MTT(5mg/ml)10μl，继续培养4h，吸弃100μl上清液，加入酸化异丙醇100μl(0.04mol/L HCl-异丙醇)[5]，充分振荡后静置20min，全自动酶标仪用560nm波长进行比色分析。
, http://www.100md.com
1.4 结果处理
实验结果采用组间均数差异t检验的方法进行统计学分析。
2 结果
附表 黄芪对小鼠淋巴细胞增殖反应和
IL-2产生的影响 (
±s) 组别n
胸淋巴细胞增殖
IL-2
对照组
9
0.116±0.004
, 百拇医药
0.140±0.005
药物组
8
0.0402±0.021
0.313±0.014
注：与对照组相比均P<0.001
附表显示：用药组对脾脏淋巴细胞增殖反应明显，IL-2的产生明显增强，与对照组相比有非常显著性差异(P<0.001)。3 讨论
黄芪可通过增加抗体产生，促进IL-2、IL-3等细胞因子的分泌[7]，明显提高机体的细胞免疫功能。本实验研究了黄芪对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生的影响，结果表明黄芪可使ConA激发的T淋巴细胞增殖反应明显增强，表明黄芪对T淋巴细胞功能具有增强作用，同时对B细胞免疫功能也具有明显增强作用。已知T细胞是机体免疫系统赖以实现细胞免疫调节的重要细胞，在机体特异性免疫应答中起核心作用，T细胞功能障碍会直接影响机体的细胞免疫应答和免疫调节。本文研究还发现黄芪对细胞因子IL-2有促进作用。IL-2主要是由辅助T细胞产生的非特异性细胞因子，作用于已活化的T细胞促进其增殖，并对B细胞有调节作用。黄芪可明显促进小鼠脾细胞产生IL-2的水平，间接增强体液免疫应答。分析上述免疫指标改变的原因可能是黄芪对T淋巴细胞的直接促进作用，或作用于巨噬细胞促进IL-1产生，从而促进了T淋巴细胞产生淋巴因子，进而促进了T淋巴细胞增殖及IL-2的产生。以上两项免疫学指标均明显改变，组间相比有非常显著性差异(P<0.001)。提示如肌体免疫功能下降者或肿瘤辅助治疗者可长期口服黄芪以增强免疫功能。本实验为黄芪的临床应用提供了实验依据。
, http://www.100md.com
参考文献
1，吴华仆，陆国椿.黄芪注射液对小鼠整体氧耗的动态观察.时珍国医国药，1999；10(7)：490～491
2，雷正一，王硕仁.黄芪对心血管系统的作用.中国中西医结合杂志，1993；13(7)：443～446
3，高 梅，贾 镭，陈 芬，等.虎尿对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生的影响.中国实验临床免疫学杂志，1999；11(3)：39
4，王运平，李波清，丁桂华，等.大黄对IL-1和IL-2产生的影响.山东滨州医学院学报，1998；21(3)：222
5，武建国主编.实用临床免疫学检验.南京：江苏科学技术出版社，1989：160
6，龙振洲主编.医学免疫学.第2版.北京：北京人民出版社，1996：219, http://www.100md.com