套管拭子法在孕妇生殖道滋养细胞采集中的应用
作者：高玉莲 崔满华
单位：长春，白求恩医科大学第二临床学院妇产科 130041
关键词：
中华医学杂志000619 随着医学遗传学及分子生物学技术的发展及应用，产前诊断由损伤性技术向无损伤或微损伤技术方向发展。从生殖道获取胎儿胎落细胞技术具有易操作、费用低、获取细胞率高、对母儿损伤小及能在孕早期进行等优点[1]，为产前诊断工作提供了新的发展前景。我们探索了用套管拭子经孕妇生殖道获取胎儿细胞这一新的取样方法，报道如下。
一、对象与方法
1.对象：我院门诊要求终止妊娠的早孕妇109例，无生殖器官炎症及内科合并症者。年龄21～43岁。将孕妇分成3组：人工流产套管拭子取样组(Ⅰ组)46例，孕期35～79 d；人工流产普通拭子取样组(Ⅱ组)38例，孕期35～79 d；药物流产套管拭子取样组(Ⅲ组)25例，孕期32～49 d。
, 百拇医药
2.早孕诊断标准：有停经史及早孕反应，并根据妇科检查辅以B型超声及尿妊娠试验确诊妊娠者。除外合并阴道炎及宫颈炎者，以减少干扰因素。
3.实验方法：(1)套管拭子制备：一端有螺纹的钢棒，直径0.25 cm，长23 cm。在螺纹端缠少许面棉纤维，用尼龙线固定。备一端较钝的塑料套管，直径0.45 cm，外有一划动钮，以控制拭子进入宫腔深度。将拭子与套管组合(图1)消毒备用。(2)取样方法：孕妇排空膀胱，取截石位，消毒外阴，上窥器。分3个部位取样：①阴道穹窿细胞收集法：用普通拭子在阴道后穹窿擦拭涂片，面积约5 cm×2.4 cm，相当于
长盖片面积。②宫颈管细胞收集法：消毒后用长柄拭子探入宫颈管2.5～3 cm，不超越宫颈内口，旋转，取出涂片。③子宫下段细胞收集法：套管拭子收集，用于第Ⅰ、Ⅲ组孕妇。固定宫颈，将套管拭子探入宫颈管约3 cm，达宫颈内口，将管芯推入约1 cm，捻转，再退于塑料套管内，取出涂片。普通拭子取样，用于第Ⅱ组孕妇。取样时改用普通拭子，操作同上。(3)染色及观察：将涂片置于体积分数为95%酒精中固定15 min以上，巴氏染色，计数每张玻片的合体滋养细胞数。合体滋养细胞核小深染，染色质聚集在核的周围。胞质呈毛玻璃样，细颗粒状或空泡状，嗜酸性，胞核之间无细胞界限呈多核合体状[2](图2)。本实验中未对细胞滋养细胞进行计数。因为细胞滋养细胞同子宫内膜的蜕膜细胞类似，需特殊染色方可区别[3]。
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图1 套管拭子示意图
图2 用套管拭子在子宫腔下段取样的
合体滋养细胞，孕妇妊娠53 d。巴氏染色 ×400
4.统计学处理：差异显著性检验采用χ2检验。
二、结果
1.阴道穹窿、宫颈管及子宫腔下段胎儿脱落滋养细胞收集情况：由表1可见，胎儿滋养细胞阳性例数在子宫下段高于阴道穹窿及宫颈管部位(P<0.05)。
表1 不同部位胎儿合体滋养细胞的收集情况 部位
总例数
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阳性例数
阴性例数
阴道穹窿
109
0
109
子宫颈管
109
1
108
子宫下段*
109
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59
50
注：每位孕妇可1次在3个部位先后取样，故3个取样位置的例数相同；与子宫颈管比较*P<0.05 2.用套管拭子与用普通拭子在子宫下段取样获取阳性细胞情况：由表2可见，套管拭子法采集细胞的阳性率较普通拭子法高，P<0.05。
3.经生殖道取样对母儿的近期影响：第Ⅲ组孕妇从就诊第2 d开始服用米菲司酮，共3 d，第4 d服米索后复诊观察近期副作用。1例取样当天阴道有少量血性分泌物，2例有下腹轻度不适，均自行缓解。经阴道分泌物常规检查证实无感染，也无其他不适。
表2 3组孕妇子宫下段采集胎儿合体滋养细胞阳性情况 组别
总例数
阳性例数
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阴性例数
Ⅰ
46
32(70)
14
Ⅱ*
38
14(37)
24
Ⅲ
25
13(52)
, http://www.100md.com 12
注：与Ⅰ、Ⅲ组比较*P<0.05
三、讨论
在孕早期胚泡经历了表面完全被三级绒毛覆盖到仅剩下叶状绒毛膜的过程。退化的绒毛细胞可被冲散到子宫腔下部、宫颈管或阴道内并可回收用于遗传病的产前诊断[4，5]。前人已进行了一些研究，但由于阳性例数低及精液污染等问题使应用受到阻碍。本试验改进了取样工具，用套管拭子在孕妇生殖道中3个部位取样，形态学观察显示，子宫下段较其他部位获得阳性细胞率高，同Griffith-Jones等[5]用聚合酶链方法检测3个部位的Y小体阳性率情况相符。
在子宫腔下部取样有两种方式，冲洗法和拭子法。冲洗法液体回收率低，反复冲洗又增加感染及损伤胚胎的机会。Griffith-Jones采用普通棉拭子在子宫腔下部取材，拭子与宫颈粘液直接接触，受到母体细胞和精液污染的机会较多。套管拭子同普通拭子相比较，其取样成功率分别为69.6%和37%，表明，前者不仅取材成功率较高，而且还能将精液污染问题降至最低，甚至没有。因为套管拭子的拭子芯受到套管保护，出入宫颈管时不与宫颈粘液接触，减免了精液污染机会及阳性细胞的丢失，所以是一种良好的取样工具，通过短期观察表明，套管拭子能控制取材深度，外径小，不会对母儿产生明显损伤。
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总之，采用套管拭子，在孕早期行子宫腔下段取样是一种安全获取细胞率高的产前诊断技术。如能做到胎儿细胞的分离和纯化，无疑将推动产前诊断技术的进一步发展。
参考文献
1，Bahado-singh RO, Kliman H, Yeng feng T, et al. First-trimester endocervical irrigation: feasibility of obtaining trophoblast cells for prenatal diagnosis. Obstet Gynecol, 1995,85:461-464.
2，唐敏一，编著.胎盘病理学.北京：人民卫生出版社，1987.11.
3，Daya D, Sabet L. The use of cytokeratin as a sensitive and reliable marker for trophoblastic tissue. Am J Clin Pathol, 1991,95:137-141.
, http://www.100md.com
4，Coleman DV. Endocervical lavage in early pregnancy. Am J Obstet Gynecol, 1982,142:118-119.
5，Griffith-Jones MD, Miller D, Lilford RJ, et al. Detection of featal DAN in transcervical swabs from first trimester pregnancies by gene amplification: a new route to prenatal diagnosis? Br J Obstet Gynaecol, 1992,99:508-511.
(收稿日期：1999-08-10), 百拇医药
单位：长春，白求恩医科大学第二临床学院妇产科 130041
关键词：
中华医学杂志000619 随着医学遗传学及分子生物学技术的发展及应用，产前诊断由损伤性技术向无损伤或微损伤技术方向发展。从生殖道获取胎儿胎落细胞技术具有易操作、费用低、获取细胞率高、对母儿损伤小及能在孕早期进行等优点[1]，为产前诊断工作提供了新的发展前景。我们探索了用套管拭子经孕妇生殖道获取胎儿细胞这一新的取样方法，报道如下。
一、对象与方法
1.对象：我院门诊要求终止妊娠的早孕妇109例，无生殖器官炎症及内科合并症者。年龄21～43岁。将孕妇分成3组：人工流产套管拭子取样组(Ⅰ组)46例，孕期35～79 d；人工流产普通拭子取样组(Ⅱ组)38例，孕期35～79 d；药物流产套管拭子取样组(Ⅲ组)25例，孕期32～49 d。
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2.早孕诊断标准：有停经史及早孕反应，并根据妇科检查辅以B型超声及尿妊娠试验确诊妊娠者。除外合并阴道炎及宫颈炎者，以减少干扰因素。
3.实验方法：(1)套管拭子制备：一端有螺纹的钢棒，直径0.25 cm，长23 cm。在螺纹端缠少许面棉纤维，用尼龙线固定。备一端较钝的塑料套管，直径0.45 cm，外有一划动钮，以控制拭子进入宫腔深度。将拭子与套管组合(图1)消毒备用。(2)取样方法：孕妇排空膀胱，取截石位，消毒外阴，上窥器。分3个部位取样：①阴道穹窿细胞收集法：用普通拭子在阴道后穹窿擦拭涂片，面积约5 cm×2.4 cm，相当于
长盖片面积。②宫颈管细胞收集法：消毒后用长柄拭子探入宫颈管2.5～3 cm，不超越宫颈内口，旋转，取出涂片。③子宫下段细胞收集法：套管拭子收集，用于第Ⅰ、Ⅲ组孕妇。固定宫颈，将套管拭子探入宫颈管约3 cm，达宫颈内口，将管芯推入约1 cm，捻转，再退于塑料套管内，取出涂片。普通拭子取样，用于第Ⅱ组孕妇。取样时改用普通拭子，操作同上。(3)染色及观察：将涂片置于体积分数为95%酒精中固定15 min以上，巴氏染色，计数每张玻片的合体滋养细胞数。合体滋养细胞核小深染，染色质聚集在核的周围。胞质呈毛玻璃样，细颗粒状或空泡状，嗜酸性，胞核之间无细胞界限呈多核合体状[2](图2)。本实验中未对细胞滋养细胞进行计数。因为细胞滋养细胞同子宫内膜的蜕膜细胞类似，需特殊染色方可区别[3]。
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图1 套管拭子示意图
图2 用套管拭子在子宫腔下段取样的
合体滋养细胞，孕妇妊娠53 d。巴氏染色 ×400
4.统计学处理：差异显著性检验采用χ2检验。
二、结果
1.阴道穹窿、宫颈管及子宫腔下段胎儿脱落滋养细胞收集情况：由表1可见，胎儿滋养细胞阳性例数在子宫下段高于阴道穹窿及宫颈管部位(P<0.05)。
表1 不同部位胎儿合体滋养细胞的收集情况 部位
总例数
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阳性例数
阴性例数
阴道穹窿
109
0
109
子宫颈管
109
1
108
子宫下段*
109
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50
注：每位孕妇可1次在3个部位先后取样，故3个取样位置的例数相同；与子宫颈管比较*P<0.05 2.用套管拭子与用普通拭子在子宫下段取样获取阳性细胞情况：由表2可见，套管拭子法采集细胞的阳性率较普通拭子法高，P<0.05。
3.经生殖道取样对母儿的近期影响：第Ⅲ组孕妇从就诊第2 d开始服用米菲司酮，共3 d，第4 d服米索后复诊观察近期副作用。1例取样当天阴道有少量血性分泌物，2例有下腹轻度不适，均自行缓解。经阴道分泌物常规检查证实无感染，也无其他不适。
表2 3组孕妇子宫下段采集胎儿合体滋养细胞阳性情况 组别
总例数
阳性例数
, 百拇医药
阴性例数
Ⅰ
46
32(70)
14
Ⅱ*
38
14(37)
24
Ⅲ
25
13(52)
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注：与Ⅰ、Ⅲ组比较*P<0.05
三、讨论
在孕早期胚泡经历了表面完全被三级绒毛覆盖到仅剩下叶状绒毛膜的过程。退化的绒毛细胞可被冲散到子宫腔下部、宫颈管或阴道内并可回收用于遗传病的产前诊断[4，5]。前人已进行了一些研究，但由于阳性例数低及精液污染等问题使应用受到阻碍。本试验改进了取样工具，用套管拭子在孕妇生殖道中3个部位取样，形态学观察显示，子宫下段较其他部位获得阳性细胞率高，同Griffith-Jones等[5]用聚合酶链方法检测3个部位的Y小体阳性率情况相符。
在子宫腔下部取样有两种方式，冲洗法和拭子法。冲洗法液体回收率低，反复冲洗又增加感染及损伤胚胎的机会。Griffith-Jones采用普通棉拭子在子宫腔下部取材，拭子与宫颈粘液直接接触，受到母体细胞和精液污染的机会较多。套管拭子同普通拭子相比较，其取样成功率分别为69.6%和37%，表明，前者不仅取材成功率较高，而且还能将精液污染问题降至最低，甚至没有。因为套管拭子的拭子芯受到套管保护，出入宫颈管时不与宫颈粘液接触，减免了精液污染机会及阳性细胞的丢失，所以是一种良好的取样工具，通过短期观察表明，套管拭子能控制取材深度，外径小，不会对母儿产生明显损伤。
, http://www.100md.com
总之，采用套管拭子，在孕早期行子宫腔下段取样是一种安全获取细胞率高的产前诊断技术。如能做到胎儿细胞的分离和纯化，无疑将推动产前诊断技术的进一步发展。
参考文献
1，Bahado-singh RO, Kliman H, Yeng feng T, et al. First-trimester endocervical irrigation: feasibility of obtaining trophoblast cells for prenatal diagnosis. Obstet Gynecol, 1995,85:461-464.
2，唐敏一，编著.胎盘病理学.北京：人民卫生出版社，1987.11.
3，Daya D, Sabet L. The use of cytokeratin as a sensitive and reliable marker for trophoblastic tissue. Am J Clin Pathol, 1991,95:137-141.
, http://www.100md.com
4，Coleman DV. Endocervical lavage in early pregnancy. Am J Obstet Gynecol, 1982,142:118-119.
5，Griffith-Jones MD, Miller D, Lilford RJ, et al. Detection of featal DAN in transcervical swabs from first trimester pregnancies by gene amplification: a new route to prenatal diagnosis? Br J Obstet Gynaecol, 1992,99:508-511.
(收稿日期：1999-08-10), 百拇医药