毛细管区带电泳法测定中药金银花中绿原酸的含量
作者：王德先 赵敬湘 杨更亮 张婷
单位：河北大学化学系 保定071002
关键词：
中草药000616 金银花又名忍冬花，为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thump.的干 燥花蕾。其中绿原酸 为主要成分[1～3]，目前金银花的分析方法主要为气相色谱-质谱法、高效液相 色谱法、薄层色谱法等[4～6]，这些方法在应用上有一定局限。CE是近年来快速 发 展的一种重要分离分析技术，应用于中药分析具有广阔的前景。本实验采用毛细管区带电泳 (CZE)法测定金银花中有效成分绿原酸含量，实验结果较好。
1 实验部分
1.1 仪器和药品：美国Waters Quanta 4000E毛细管电 泳仪，毛细管内径75 μm，柱长60 cm，有效柱长52 cm(河北永年光纤厂)。NaH2PO4，N a3PO4，NaB2O7，95%乙醇均为分析纯。金银花购于河北安国药材市场。绿原酸对照 品由中国药品生物制品检定所提供。
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1.2 实验方法：进样前，毛细管首先在室温下，用0.5 mol/L的KOH溶液冲洗10 min，然 后用蒸馏水冲洗5 min，再用背景缓冲液冲洗10 min，最后施加16 kV电压，预平衡10 min， 每进样5次后需清洗毛细管，清洗步骤同上，样品采用重力真空进样，214 nm紫外检测，实 验前缓冲液用微滤膜过滤。
2 结果与讨论
2.1 缓冲液的组成及pH值对分离的影响：毛细管电泳中缓冲溶液的组成直接影响粒子的迁 移和最后分离，本实验分别考察了磷酸盐和硼酸盐对分离的影响，结果表明，当缓冲溶液的 组成为10 mmol/L的硼酸盐+19 mmol/L的磷酸盐时，可以获得较好的结果。在此基础上，改 变NaH2PO4的比例分别配置pH值为8.40，8.86，9.32，9.51，9.73的系列缓冲液考 察pH值对分离的影响。由实验结果可知，绿原酸的迁移时间随pH值的增大而呈增大趋势，这 是因为较高pH值下绿原酸的电离增大，从而与电渗流反向迁移的原故。但pH值过大，造成 电流、温度升高，热扩散增加，重现性差。实验证明，pH值在8.86左右时可获得较为满意 的分离。
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2.2 有机溶剂对分离的影响：在CE中，有机溶剂作为一种改性剂，常加到缓冲液中，以改 善分离。本实验考察了缓冲溶液中乙醇的含量从5%到30%对分离的影响。实验结果表明， 随着缓冲溶液中乙醇浓度的增加，绿原酸的迁移时间呈现增长。这是因为有机溶剂乙醇的加 入，使得电渗流降低的原故。另外从实验中还可看出，有机溶剂的加入增加了金银花样品中 某些峰的吸收。但当缓冲溶液中乙醇含量高于20%时，绿原酸的迁移时间达20 min以上，这 对于快速分析不利，因此本实验采用含有10%乙醇的缓冲溶液(即10 mmol/L的硼酸盐+19 mm ol/L的磷盐+10%的乙醇)作为最佳分析条件。
2.3 标准曲线的绘制：精密称取适量的绿原酸对照品，制成不同浓度的标准溶液，在最佳 分离条件下进行测定，以绿原酸的校正峰面积对浓度作图，结果绿原酸在0.236～2.008 m g/mL范围内呈线型性关系，线性回归方程为Y=0.95+25.175X[ WTBZ〗，r=0.998。
2.4 样品的测定：精密称取金银花1 g，索氏提取2.5 h，得提取液50 mL。将制得的样品 试液在最佳运行条件下测定，测得样品中绿原酸含量(g/g)为2.32 %，RSD=2.98 %(n=5)。
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3 结论
采用毛细管区带电泳法测定中药金银花中的有效成分绿原酸的含量，具有样品预处理简单、 方法简便、定量准确的优点。毛细管电泳应用于中药分析和质量控制具有广阔的前景。
河北省自然科学基金资助项目
王德先 河北职工医学院
王德先 女，讲师，1991年毕业于兰州大学生物系，现于河北大学化学系攻读硕士研究生，主攻中草药分析化学。所参加的河北省自然科学基金项目“高效毛细管电泳分析鉴定中药材”已通过鉴定。
参 考 文 献
1，江苏新医学院.中药大辞典.上册.上海：上海科技出版社，1977：2893
2，孙延波，等.中国中药杂志，1996，21(4)：242
3，黄丽瑛，等.中草药，1996，27(11)：645
4，丁一上，等.石河子医学院学报，1997，19(1)：1
5，张 玲，等.中国药学杂志，1995，30(11)：651
6，陈永林，等.基层中药杂志，1996，10(3)：11
(1999-06-25 收稿), 百拇医药
单位：河北大学化学系 保定071002
关键词：
中草药000616 金银花又名忍冬花，为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thump.的干 燥花蕾。其中绿原酸 为主要成分[1～3]，目前金银花的分析方法主要为气相色谱-质谱法、高效液相 色谱法、薄层色谱法等[4～6]，这些方法在应用上有一定局限。CE是近年来快速 发 展的一种重要分离分析技术，应用于中药分析具有广阔的前景。本实验采用毛细管区带电泳 (CZE)法测定金银花中有效成分绿原酸含量，实验结果较好。
1 实验部分
1.1 仪器和药品：美国Waters Quanta 4000E毛细管电 泳仪，毛细管内径75 μm，柱长60 cm，有效柱长52 cm(河北永年光纤厂)。NaH2PO4，N a3PO4，NaB2O7，95%乙醇均为分析纯。金银花购于河北安国药材市场。绿原酸对照 品由中国药品生物制品检定所提供。
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1.2 实验方法：进样前，毛细管首先在室温下，用0.5 mol/L的KOH溶液冲洗10 min，然 后用蒸馏水冲洗5 min，再用背景缓冲液冲洗10 min，最后施加16 kV电压，预平衡10 min， 每进样5次后需清洗毛细管，清洗步骤同上，样品采用重力真空进样，214 nm紫外检测，实 验前缓冲液用微滤膜过滤。
2 结果与讨论
2.1 缓冲液的组成及pH值对分离的影响：毛细管电泳中缓冲溶液的组成直接影响粒子的迁 移和最后分离，本实验分别考察了磷酸盐和硼酸盐对分离的影响，结果表明，当缓冲溶液的 组成为10 mmol/L的硼酸盐+19 mmol/L的磷酸盐时，可以获得较好的结果。在此基础上，改 变NaH2PO4的比例分别配置pH值为8.40，8.86，9.32，9.51，9.73的系列缓冲液考 察pH值对分离的影响。由实验结果可知，绿原酸的迁移时间随pH值的增大而呈增大趋势，这 是因为较高pH值下绿原酸的电离增大，从而与电渗流反向迁移的原故。但pH值过大，造成 电流、温度升高，热扩散增加，重现性差。实验证明，pH值在8.86左右时可获得较为满意 的分离。
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2.2 有机溶剂对分离的影响：在CE中，有机溶剂作为一种改性剂，常加到缓冲液中，以改 善分离。本实验考察了缓冲溶液中乙醇的含量从5%到30%对分离的影响。实验结果表明， 随着缓冲溶液中乙醇浓度的增加，绿原酸的迁移时间呈现增长。这是因为有机溶剂乙醇的加 入，使得电渗流降低的原故。另外从实验中还可看出，有机溶剂的加入增加了金银花样品中 某些峰的吸收。但当缓冲溶液中乙醇含量高于20%时，绿原酸的迁移时间达20 min以上，这 对于快速分析不利，因此本实验采用含有10%乙醇的缓冲溶液(即10 mmol/L的硼酸盐+19 mm ol/L的磷盐+10%的乙醇)作为最佳分析条件。
2.3 标准曲线的绘制：精密称取适量的绿原酸对照品，制成不同浓度的标准溶液，在最佳 分离条件下进行测定，以绿原酸的校正峰面积对浓度作图，结果绿原酸在0.236～2.008 m g/mL范围内呈线型性关系，线性回归方程为Y=0.95+25.175X[ WTBZ〗，r=0.998。
2.4 样品的测定：精密称取金银花1 g，索氏提取2.5 h，得提取液50 mL。将制得的样品 试液在最佳运行条件下测定，测得样品中绿原酸含量(g/g)为2.32 %，RSD=2.98 %(n=5)。
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3 结论
采用毛细管区带电泳法测定中药金银花中的有效成分绿原酸的含量，具有样品预处理简单、 方法简便、定量准确的优点。毛细管电泳应用于中药分析和质量控制具有广阔的前景。
河北省自然科学基金资助项目
王德先 河北职工医学院
王德先 女，讲师，1991年毕业于兰州大学生物系，现于河北大学化学系攻读硕士研究生，主攻中草药分析化学。所参加的河北省自然科学基金项目“高效毛细管电泳分析鉴定中药材”已通过鉴定。
参 考 文 献
1，江苏新医学院.中药大辞典.上册.上海：上海科技出版社，1977：2893
2，孙延波，等.中国中药杂志，1996，21(4)：242
3，黄丽瑛，等.中草药，1996，27(11)：645
4，丁一上，等.石河子医学院学报，1997，19(1)：1
5，张 玲，等.中国药学杂志，1995，30(11)：651
6，陈永林，等.基层中药杂志，1996，10(3)：11
(1999-06-25 收稿), 百拇医药