丙型肝炎病毒标志物测定的临床应用
作者：李保仝 宗永兰 齐名 邵海枫
单位：南京军区南京总医院解放军医学检验中心 微生物学实验室，江苏南京 210002
关键词：丙型肝炎病毒；IgM；GOR；标志物；测定方法
医学研究生学报000608摘要：目的：探讨丙型肝炎病毒(HCV)感染者血清及初乳中该病毒标志物存在状况。 方法：对244份HCV感染者、33份对照血清和35份HCV特异性IgG抗体阳性的产妇、41份健康产妇的初乳进行HCV四种标志物测定。抗HCV-IgG、IgM和GOR抗体采用间接ELISA法，HCV C33抗原采用双抗体夹心ELISA法。 结果：抗 HCV-IgG、抗HCV-IgM、HCV C33和 抗GOR抗体四种标志物在慢性活动性丙型肝炎组检出率最高，分别为100.0%、85.7%、46.4%和64.3%;急性输血后丙型肝炎组检出率为66.7%、100.0%、22.9%和42.9%；慢性稳定性丙型肝炎组为94.1%、26.5%、17.6%和52.9%；血透患者组为62.6%、31.3%、4.8%和45.6%。血清抗HCV IgG阳性组初乳为17.1%、2.9%、8.5%和37.1%。血清和初乳对照组除1例献血员血清抗HCV-IgG阳性外，其余均为阴性结果。 结论：除抗HCV-IgG外，抗HCV-IgM、HCV C33和GOR抗体三种标志物在HCV感染的相关疾病组中，有一定的阳性检出率，均可作为HCV感染的标志，可用于HCV感染后的实验室诊断。
, 百拇医药
中图分类号：R512.6 文献标识码： A
文章编号： 1008-8199(2000)06-0375-02
The clinical preliminary application of determination of hepatitis C virus markers
LI Bao-tong ,ZONG Yong-lan, QI Ming, Shao Hai-feng
(Center of Medical Laboratory Science, Jinling Hospital, Nanjing 210002,Jiangsu,China)
Abstract：Objectives:To explore the existence of hepatitis C(HCV) markers in sera and colostrum from HCV infected subjects. Methods: Two hundred and forty-four sera from HCV infected subjects and 35 colostrum from puerperants with anti-HCV specific IgG-positive were examined, and 33 sera from health donors and 41 colostrum from health puerperants (anti-HCV specific IgG -negative) were as controls. Anti-HCV IgG and IgM and anti-GOR antibodies were determined by indirect ELISA and HCV C33 antigen were determined by sandwich ELISA. Results: The 4 highest markers of prevalence in chronic active hepatitis C patients were: anti-HCV IgG 100%, IgM 85.7%, anti-GOR antibodies 46.4% and HCV C33 64.3% respectively. In different groups, the prevalence of the 4 HCV markers were in turn as follows: In acute posttransfusion hepatitis C: 66.7%,100%,22.9% and 42.9%, in chronic persistent hepatitis C: 94.1%, 26.5%,17.6% and 52.9%,in patients receiving hemodialysis:62.6%,31.3%,4.8% and 45.6%, the colostrums from puerperants with anti-HCV IgG-positive sera: 17.1%,2.9%,8.5% and 37.1%. All the sera and colostrums from controls were negative for the 4 HCV markers except one donor who was found with anti-HCV IgG positive. Conclusions: In patients with HCV infection, certain serum markers could be positive, including anti-HCV IgG, anti-HCV IgM, anti-GOR antibodies and HCV C33, all of them can be used for the diagnosis of HCV infection in laboratory.
, 百拇医药
Key words:HCV； IgM； GOR； Marker； Methodology
0 引 言
丙型肝炎病毒(HCV)基因于1989年被克隆成功后，对该病毒的本质才有较明确的认识。该病毒为 RNA病毒，主要传播途径为血液传播。患者感染HCV后，病毒的标志物在血清中有多种存在形式，如病毒的RNA、病毒基因编码的抗原肽(包括结构区、非结构区抗原肽)、患者自身针对HCV抗原肽而产生的抗体(主要有IgG和 IgM类抗体)。为了解HCV感染者体内该病毒标志物的存在形式和对临床应用价值，我们建立了测定HCV 特异性IgM抗体的ELISA技术、HCV 感染相关抗体-GOR抗体测定的ELISA技术和用于血清中HCV核心抗原测定的ELISA技术，并进行初步临床应用，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 试剂 HCV特异性IgG抗体测定试剂盒购于上海科华公司；HCV特异性IgM抗体[1]、HCV核心抗原C33的测定[2]和GOR抗体[3]的测定试剂均为本室自制。操作方法均按试剂盒说明书进行。
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1.2 标本
1.2.1 血清 获自临床确诊的急性输血后丙型
肝炎患者35例、慢性活动性丙型肝炎患者28例、慢性稳定性丙型肝炎患者34例(以上标本由解放军第123医院传染科提供)、血液透析者147例、供血员33例(分别由本院肾脏病研究所和输血科提供)。所有受试对象均取空腹静脉血3 ml，分离血清后-20℃保存备用。
1.2.2 初乳 采自35例HCV特异性IgG抗体阳性的初诊或确诊为HCV肝炎的产妇(标本由南京市传染病医院提供)，此组患者均有明显的肝炎临床表现，如厌食、乏力、黄疸、血清ALT升高，多数有输血史，且排除甲型、乙型肝炎病毒感染。产后1～3天收集。另外41例健康产妇初乳(获自本院产科)为对照。4℃过夜后吸取乳清层，2 500 r/min 离心30 min，取上清液-20℃保存备用。
1.3 HCV标志物 HCV特异性IgG抗体、HCV特异性IgM抗体和GOR抗体的测定采用间接ELISA法，HCV核心抗原C33的测定[2]采用双抗体夹心ELISA法。
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2 结 果
277份血清、76份初乳中HCV四种标志物检测结果见表1。
表1 277 份血清、76份初乳中HCV四种标志物检测结果
Table 1 Results of detections of four marker of HCV in 277 sera and 76 colostrum Disease
n
Positive number in
anti-HCV IgG(%)
Positive number in
anti-HCV IgM(%)
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Positive number in
HCV C33(%)
Positive number in
anti GOR (%)
Serum
Post-transfusion acute HC patients
35
24 (66.7)
35(100.0)
8(22.9)
15(42.9)
, 百拇医药
Post-transfusion active HC patients
28
28(100.0)
24 (85.7)
13(46.4)
18(64.3)
Post-transfusion stability HC patients
34
32 (94.1)
9(26.5)
6(17.6)
, 百拇医药
18(52.9)
Patients of hemodialysis
147
92(62.6)
46(31.3)
7(4.8)
67(45.6)
Blood donors
33
1(3.0)
0
0
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0
Colostrum
Positive of anti-HCV IgG in serum
35
6 (17.1)
1 (2.9)
3(8.5)
13(37.1)
Negative of anti-HCV IgG in serum
41
0
, 百拇医药
0
0
0
3 讨 论
常用的丙型肝炎病毒的实验室诊断方法有HCV RNA的RT-PCR技术和HCV特异性IgG抗体测定。PCR技术由于其技术复杂、仪器及试剂价格昂贵等原因，难以在常规工作中应用。HCV 特异性IgG抗体测定的ELISA技术不能预示急性感染或慢性感染是否处于活动状态。HCV核心抗原C33的测定，采用针对HCV核心抗原C33肽的单克隆抗体建立的双抗体夹心ELISA方法，直接测定血清和初乳中的HCV 核心抗原，方法简便，特异性高，给予现有的实验诊断方法以补充和加强。在观察的几组患者中，以慢性活动性丙型肝炎组检出率最高(46.4%),急性输血后丙型肝炎次之(22.9%)，另三组与HCV感染密切相关的疾病组检出率在4.8%～17.6%之间，但血清及初乳对照组均未检出此种抗原。表1表明，35例输血后丙型肝炎患者血清HCV IgM抗体在ALT升高后全部转为阳性，其中11例在血清HCV特异性IgG阴性时, IgM抗体即为阳性，表明检测血清HCV特异性IgM对HCV急性感染是一个有价值的早期诊断指标。对于慢性活动性丙型肝炎患者，活动期的IgM抗体阳性检出率为100.0%,而稳定期仅为25.0%,提示此项指标可反映慢性丙型肝炎有无活动性。也可将其作为判定丙型肝炎治疗效果的指标之一。1990年，日本学者Mishiro等[4]从感染了HCV的黑猩猩血浆中克隆出与HCV基因无同源性的cDNA，命名为GOR47-1，可编码一个具有15个氨基酸序列(GRRGDAKSNPNRPLYC)的抗原表位,其对应的抗体为抗GOR。GOR产生的机制尚不完全清楚，研究发现，感染HCV后，大部分患者在产生抗HCV抗体之前，还可产生抗GOR抗体[5，6]。本观察的五组与HCV感染相关的患者，以慢性活动性丙型肝炎组抗GOR抗体阳性率最高(64.3%)，慢性稳定性丙型肝炎组次之(52.9%)，尔后依次为血透组(45.6%)、急性输血后丙型肝炎组(42.9%)、 血清HCV IgG阳
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性的产妇初乳组(37.1%),供血员和血清HCV IgG阴性的产妇初乳组中均未检出GOR抗体，提示GOR抗体与HCV感染密切相关，可作为HCV感染的标志物之一。
HCV的主要传播途径为经血液(或血液制品)或性传播。母婴间的垂直传播除分娩时经产道感染外，其他感染方式如通过哺乳而传播HCV尚有待证实。Kuroki等[7]报道，13例母亲为血清抗HCV抗体阳性的婴儿在母乳喂养3个月后，有11例血清HCV RNA阳性，这些母婴间的HCV传播是经初乳还是密切接触而发生尚不清楚，因为血清抗HCV阳性者，其唾液中HCV RNA也常为阳性。本研究表明，35份血清HCV IgG阳性产妇初乳6份HCV IgG阳性，1份 HCV IgM阳性，3份HCV C33抗原阳性，13份GOR抗体阳性。表明部分受HCV感染的母亲的初乳中可能有HCV存在。是否由哺乳而使婴儿感染HCV，值得进一步观察。在提倡母乳喂养和创建爱婴医院的同时，对血清抗HCV阳性的产妇尤其是初乳HCV-IgA阳性者的哺乳问题，似应进一步进行深入研究，并应引起高度重视。
, 百拇医药
作者简介：李保仝(1949-)，男，安徽泗县人，副主任技师，医学专科，从事医学微生物检验专业。
参考文献：
[1] 马 勇,李保仝,杨毓华, 等.慢性及输血后肝炎抗HCV-IgM检测及临床意义[J].中华肝脏病杂志1996,4(2):117.
[2] 李保仝，杨毓华，马 勇,等.丙型肝炎病毒核心抗原C33的测定[J].中华实验和临床病毒学杂志，1999，13(1)：68.
[3] 赵 艳，李保仝，余小忠，等.GOR抗体与HCV感染的相关性研究[J].标记免疫分析与临床，1997,4(3):125.
[4] Michel G,Ritter A,Gerken L， et al. Anti-GOR and hepatitis C virus in autoimmune liver disease[J].Lancet，1992:339:267.
, http://www.100md.com
[5] Lan J Y N,Davis G L,Orto E，et al. Significance of antibody to the cellular gene derived epitope GOR in chrinic hepatitis C virus infection[J].J Hepatol,1993，17:253.
[6] Mishiro S,Hoshi Y,Takeda K，et al. Non-A,Non-B hepatitis specific antibodies directed at bostderived epitope:Implication for an auto-immune process[J]. Lancet，1990,336:1400.
[7] Kuroki T,Nishiquchi S,Fukuda K et al: Mother-to-child transmission of hepatitis C virus[J].J Infect Dis,1991,164:427.
收稿日期： 2000-01-10； 修订日期： 2000-05-04, 百拇医药
单位：南京军区南京总医院解放军医学检验中心 微生物学实验室，江苏南京 210002
关键词：丙型肝炎病毒；IgM；GOR；标志物；测定方法
医学研究生学报000608摘要：目的：探讨丙型肝炎病毒(HCV)感染者血清及初乳中该病毒标志物存在状况。 方法：对244份HCV感染者、33份对照血清和35份HCV特异性IgG抗体阳性的产妇、41份健康产妇的初乳进行HCV四种标志物测定。抗HCV-IgG、IgM和GOR抗体采用间接ELISA法，HCV C33抗原采用双抗体夹心ELISA法。 结果：抗 HCV-IgG、抗HCV-IgM、HCV C33和 抗GOR抗体四种标志物在慢性活动性丙型肝炎组检出率最高，分别为100.0%、85.7%、46.4%和64.3%;急性输血后丙型肝炎组检出率为66.7%、100.0%、22.9%和42.9%；慢性稳定性丙型肝炎组为94.1%、26.5%、17.6%和52.9%；血透患者组为62.6%、31.3%、4.8%和45.6%。血清抗HCV IgG阳性组初乳为17.1%、2.9%、8.5%和37.1%。血清和初乳对照组除1例献血员血清抗HCV-IgG阳性外，其余均为阴性结果。 结论：除抗HCV-IgG外，抗HCV-IgM、HCV C33和GOR抗体三种标志物在HCV感染的相关疾病组中，有一定的阳性检出率，均可作为HCV感染的标志，可用于HCV感染后的实验室诊断。
, 百拇医药
中图分类号：R512.6 文献标识码： A
文章编号： 1008-8199(2000)06-0375-02
The clinical preliminary application of determination of hepatitis C virus markers
LI Bao-tong ,ZONG Yong-lan, QI Ming, Shao Hai-feng
(Center of Medical Laboratory Science, Jinling Hospital, Nanjing 210002,Jiangsu,China)
Abstract：Objectives:To explore the existence of hepatitis C(HCV) markers in sera and colostrum from HCV infected subjects. Methods: Two hundred and forty-four sera from HCV infected subjects and 35 colostrum from puerperants with anti-HCV specific IgG-positive were examined, and 33 sera from health donors and 41 colostrum from health puerperants (anti-HCV specific IgG -negative) were as controls. Anti-HCV IgG and IgM and anti-GOR antibodies were determined by indirect ELISA and HCV C33 antigen were determined by sandwich ELISA. Results: The 4 highest markers of prevalence in chronic active hepatitis C patients were: anti-HCV IgG 100%, IgM 85.7%, anti-GOR antibodies 46.4% and HCV C33 64.3% respectively. In different groups, the prevalence of the 4 HCV markers were in turn as follows: In acute posttransfusion hepatitis C: 66.7%,100%,22.9% and 42.9%, in chronic persistent hepatitis C: 94.1%, 26.5%,17.6% and 52.9%,in patients receiving hemodialysis:62.6%,31.3%,4.8% and 45.6%, the colostrums from puerperants with anti-HCV IgG-positive sera: 17.1%,2.9%,8.5% and 37.1%. All the sera and colostrums from controls were negative for the 4 HCV markers except one donor who was found with anti-HCV IgG positive. Conclusions: In patients with HCV infection, certain serum markers could be positive, including anti-HCV IgG, anti-HCV IgM, anti-GOR antibodies and HCV C33, all of them can be used for the diagnosis of HCV infection in laboratory.
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Key words:HCV； IgM； GOR； Marker； Methodology
0 引 言
丙型肝炎病毒(HCV)基因于1989年被克隆成功后，对该病毒的本质才有较明确的认识。该病毒为 RNA病毒，主要传播途径为血液传播。患者感染HCV后，病毒的标志物在血清中有多种存在形式，如病毒的RNA、病毒基因编码的抗原肽(包括结构区、非结构区抗原肽)、患者自身针对HCV抗原肽而产生的抗体(主要有IgG和 IgM类抗体)。为了解HCV感染者体内该病毒标志物的存在形式和对临床应用价值，我们建立了测定HCV 特异性IgM抗体的ELISA技术、HCV 感染相关抗体-GOR抗体测定的ELISA技术和用于血清中HCV核心抗原测定的ELISA技术，并进行初步临床应用，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 试剂 HCV特异性IgG抗体测定试剂盒购于上海科华公司；HCV特异性IgM抗体[1]、HCV核心抗原C33的测定[2]和GOR抗体[3]的测定试剂均为本室自制。操作方法均按试剂盒说明书进行。
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1.2 标本
1.2.1 血清 获自临床确诊的急性输血后丙型
肝炎患者35例、慢性活动性丙型肝炎患者28例、慢性稳定性丙型肝炎患者34例(以上标本由解放军第123医院传染科提供)、血液透析者147例、供血员33例(分别由本院肾脏病研究所和输血科提供)。所有受试对象均取空腹静脉血3 ml，分离血清后-20℃保存备用。
1.2.2 初乳 采自35例HCV特异性IgG抗体阳性的初诊或确诊为HCV肝炎的产妇(标本由南京市传染病医院提供)，此组患者均有明显的肝炎临床表现，如厌食、乏力、黄疸、血清ALT升高，多数有输血史，且排除甲型、乙型肝炎病毒感染。产后1～3天收集。另外41例健康产妇初乳(获自本院产科)为对照。4℃过夜后吸取乳清层，2 500 r/min 离心30 min，取上清液-20℃保存备用。
1.3 HCV标志物 HCV特异性IgG抗体、HCV特异性IgM抗体和GOR抗体的测定采用间接ELISA法，HCV核心抗原C33的测定[2]采用双抗体夹心ELISA法。
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2 结 果
277份血清、76份初乳中HCV四种标志物检测结果见表1。
表1 277 份血清、76份初乳中HCV四种标志物检测结果
Table 1 Results of detections of four marker of HCV in 277 sera and 76 colostrum Disease
n
Positive number in
anti-HCV IgG(%)
Positive number in
anti-HCV IgM(%)
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Positive number in
HCV C33(%)
Positive number in
anti GOR (%)
Serum
Post-transfusion acute HC patients
35
24 (66.7)
35(100.0)
8(22.9)
15(42.9)
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Post-transfusion active HC patients
28
28(100.0)
24 (85.7)
13(46.4)
18(64.3)
Post-transfusion stability HC patients
34
32 (94.1)
9(26.5)
6(17.6)
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18(52.9)
Patients of hemodialysis
147
92(62.6)
46(31.3)
7(4.8)
67(45.6)
Blood donors
33
1(3.0)
0
0
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0
Colostrum
Positive of anti-HCV IgG in serum
35
6 (17.1)
1 (2.9)
3(8.5)
13(37.1)
Negative of anti-HCV IgG in serum
41
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3 讨 论
常用的丙型肝炎病毒的实验室诊断方法有HCV RNA的RT-PCR技术和HCV特异性IgG抗体测定。PCR技术由于其技术复杂、仪器及试剂价格昂贵等原因，难以在常规工作中应用。HCV 特异性IgG抗体测定的ELISA技术不能预示急性感染或慢性感染是否处于活动状态。HCV核心抗原C33的测定，采用针对HCV核心抗原C33肽的单克隆抗体建立的双抗体夹心ELISA方法，直接测定血清和初乳中的HCV 核心抗原，方法简便，特异性高，给予现有的实验诊断方法以补充和加强。在观察的几组患者中，以慢性活动性丙型肝炎组检出率最高(46.4%),急性输血后丙型肝炎次之(22.9%)，另三组与HCV感染密切相关的疾病组检出率在4.8%～17.6%之间，但血清及初乳对照组均未检出此种抗原。表1表明，35例输血后丙型肝炎患者血清HCV IgM抗体在ALT升高后全部转为阳性，其中11例在血清HCV特异性IgG阴性时, IgM抗体即为阳性，表明检测血清HCV特异性IgM对HCV急性感染是一个有价值的早期诊断指标。对于慢性活动性丙型肝炎患者，活动期的IgM抗体阳性检出率为100.0%,而稳定期仅为25.0%,提示此项指标可反映慢性丙型肝炎有无活动性。也可将其作为判定丙型肝炎治疗效果的指标之一。1990年，日本学者Mishiro等[4]从感染了HCV的黑猩猩血浆中克隆出与HCV基因无同源性的cDNA，命名为GOR47-1，可编码一个具有15个氨基酸序列(GRRGDAKSNPNRPLYC)的抗原表位,其对应的抗体为抗GOR。GOR产生的机制尚不完全清楚，研究发现，感染HCV后，大部分患者在产生抗HCV抗体之前，还可产生抗GOR抗体[5，6]。本观察的五组与HCV感染相关的患者，以慢性活动性丙型肝炎组抗GOR抗体阳性率最高(64.3%)，慢性稳定性丙型肝炎组次之(52.9%)，尔后依次为血透组(45.6%)、急性输血后丙型肝炎组(42.9%)、 血清HCV IgG阳
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性的产妇初乳组(37.1%),供血员和血清HCV IgG阴性的产妇初乳组中均未检出GOR抗体，提示GOR抗体与HCV感染密切相关，可作为HCV感染的标志物之一。
HCV的主要传播途径为经血液(或血液制品)或性传播。母婴间的垂直传播除分娩时经产道感染外，其他感染方式如通过哺乳而传播HCV尚有待证实。Kuroki等[7]报道，13例母亲为血清抗HCV抗体阳性的婴儿在母乳喂养3个月后，有11例血清HCV RNA阳性，这些母婴间的HCV传播是经初乳还是密切接触而发生尚不清楚，因为血清抗HCV阳性者，其唾液中HCV RNA也常为阳性。本研究表明，35份血清HCV IgG阳性产妇初乳6份HCV IgG阳性，1份 HCV IgM阳性，3份HCV C33抗原阳性，13份GOR抗体阳性。表明部分受HCV感染的母亲的初乳中可能有HCV存在。是否由哺乳而使婴儿感染HCV，值得进一步观察。在提倡母乳喂养和创建爱婴医院的同时，对血清抗HCV阳性的产妇尤其是初乳HCV-IgA阳性者的哺乳问题，似应进一步进行深入研究，并应引起高度重视。
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作者简介：李保仝(1949-)，男，安徽泗县人，副主任技师，医学专科，从事医学微生物检验专业。
参考文献：
[1] 马 勇,李保仝,杨毓华, 等.慢性及输血后肝炎抗HCV-IgM检测及临床意义[J].中华肝脏病杂志1996,4(2):117.
[2] 李保仝，杨毓华，马 勇,等.丙型肝炎病毒核心抗原C33的测定[J].中华实验和临床病毒学杂志，1999，13(1)：68.
[3] 赵 艳，李保仝，余小忠，等.GOR抗体与HCV感染的相关性研究[J].标记免疫分析与临床，1997,4(3):125.
[4] Michel G,Ritter A,Gerken L， et al. Anti-GOR and hepatitis C virus in autoimmune liver disease[J].Lancet，1992:339:267.
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[5] Lan J Y N,Davis G L,Orto E，et al. Significance of antibody to the cellular gene derived epitope GOR in chrinic hepatitis C virus infection[J].J Hepatol,1993，17:253.
[6] Mishiro S,Hoshi Y,Takeda K，et al. Non-A,Non-B hepatitis specific antibodies directed at bostderived epitope:Implication for an auto-immune process[J]. Lancet，1990,336:1400.
[7] Kuroki T,Nishiquchi S,Fukuda K et al: Mother-to-child transmission of hepatitis C virus[J].J Infect Dis,1991,164:427.
收稿日期： 2000-01-10； 修订日期： 2000-05-04, 百拇医药