nm23-H1和CD44V6在肺鳞癌组织中的表达及预后意义的探讨
作者：姜汉芳 袁明 姜汉国
单位：姜汉芳(山东省青岛市李沧区医院肿瘤科，山东 青岛 266041)；袁明(宁夏地质工程勘察院医院，宁夏 银川 750021)；姜汉国(湛江市广东医学院病理教研室，广东 湛江 524000)
关键词：肺；肿瘤；糖蛋白分子；免疫组织化学；预后
宁夏医学杂志000607 【摘要】 目的 探讨nm23-H1和CD44V6在肺鳞癌组织中表达及预后意义。方法 应用免疫组化S-P法，对96例肺鳞癌组织进行nm23-H1和CD44V6检测并对其中66位患者进行了5年随访。结果 96例肺鳞癌的nm23-H1、CD44V6阳性表达率分别为46.9%和42.7%。nm23-H1蛋白表达同病理分期和淋巴结转移呈负相关，其预后佳。CD44V6表达与肺鳞癌大小、病理分期和淋巴结转移呈正相关，其预后差。结论 nm23-H1和CD44V6可作为检测肺鳞癌临床特征及预后参考指标。
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【中图分类号】 R734.2 【文献标识码】 A
文章编号：1001-5949(2000)06-0334-02
Expressions of nm23-H1 protein and CD44V6 in human squamous-cell carcinoma of lung and their significance in prognosis
Jiang Han-fang， Yuan Ming，JANG Han-guo
(Dept.of oncology， Licang Hosp. of Qingdao， shandong 266041，China)
【Abstract】 Objectives To study the expressions of nm23-H1 protein and CD44V6 in human squamous-cell carcinoma of lung and their significance in prognosis.Methods 66 cases who have been followed up for five years were investigated to detect the expression of nm23-H1 protein and CD44V6 by immunohistochemistry.Results The positive expression rates of nm23-H1 protein and CD44V6 were 46.9% and 42.7% respectively. nm23-H1 protein positive expression was inverse correlation to clinical stages、lymphnode metastasis and good prognosis .CD44V6 overexpression was positive correlated with tumor size、clinical stages、 lympnode metastasis and poor prognosis.Conclusions The result suggests that nm23-H1 and CD44V6 positive expression are considered as one of the indiators for evaluation the.clinical features and the prognosis of lung carcinoma.
, 百拇医药
【Key words】 Lung；Neplasms；Immunohistochemistry；Prognosis▲
肺癌的发生和发展是一个非常复杂的生物学现象。近年来，大量的研究证实肺癌的发生发展涉及到多基因、多因素及多分子水平阶段过程。在其转移机制的研究中，尤以促进转移发生的转移基因和控制转移发生的转移抑制基因最令人感兴趣。本研究通过免疫组化法，对96例肺鳞癌组织nm23-H1和CD44V6的表达进行了检测，探讨他们的表达特征及与淋巴结转移和预后之间的关系。
1 材料和方法
1.1 材料：选取宁夏银川市医院和广东医学院附属医院1990～1994年手术切除的96例肺原发性鳞癌标本，其中男性75例，女性21例，平均年龄65.5岁。所有的肺鳞癌术前均未经过任何抗癌治疗，对其中的66位患者进行了5年随访。
1.2 方法：所有标本常规中性福尔马林固定，石蜡包埋，5μm厚连续切片，HE染色，进行分级和临床分期。免疫组化染色nm23-H1和CD44V6鼠抗人单克卫隆抗体及S-P试剂盒均购自北京中山生物试剂公司，免疫组化染色按S-P试剂盒说明书进行。以PBS代替—抗作为阴性对照，已知的阳性组织切片作为阳性对照。
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1.3 结果判断：nm23-H1以细胞浆内棕黄色颗粒为阳性细胞；CD44V6以细胞膜棕黄色为阳性细胞。阳性切片以阳性细胞>5%为标准，5%～25%为“+”，26%～50%为“
”，>50%“
”。
1.4 统计学方法：χ2检验。
2 结果
2.1 nm23-H1、CD44V6在肺鳞癌中的表达及同其临床病理特征的关系见表1。
在96例鳞癌中，nm23-H1蛋白过度表达与肿瘤大小和分化无关，同其病理分期和淋巴结转移呈负相关。CD44V6过表达与肿瘤分化无关，而与肿瘤大小、病理分期及淋巴结转移呈正相关，在统计学上有显著性差异(P<0.05)。
, 百拇医药
2.2 nm23-H1、CD44V6与肺鳞癌患者预后关系见表2。
表1 nm23-H1、CD44V6与肺鳞癌病理特征关系 组别
例数
nm23-H1
+～%
CD44V6
+～%
肿瘤大小
≤4cm
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62
30
48.4
21
33.9*
>4cm
34
15
44.1
20
58.8
分化程度
高分化
, http://www.100md.com
21
11
52.4
9
42.9
中分化
33
15
45.5
15
45.5
低分化
42
, 百拇医药 19
45.2
17
40.5
淋巴结转移
阳性
52
19
36.5**
27
51.9*
阴性
44
, http://www.100md.com
26
59.1
14
31.8
临床病理分期
Ⅰ～Ⅱ期
41
25
60.9*
12
29.3*
Ⅲ～Ⅳ期
55
, 百拇医药
20
36.4
29
52.7
*P<0.05，**P<0.01 表2 nm23-H1、CD44V6与肺鳞癌患者预后关系 术后生存时间
(年)
例数
nm23-H1
+ %
CD44V6
+ %
<80.01
, http://www.100md.com
15
2
13.3
12
～548.9
41
18
43.9
<0.05
18
>10.05
10
8
, 百拇医药
80.0
1
在随访的66例肺鳞癌者中，nm23-H1蛋白阳性表达率与患者生存期呈正相关，即阳性者预后佳；而CD44V6阳性表达者5年生存率明显下降，在统计学上有显著差异(P<0.05)。
3 讨论
nm23-H1是Steeg[1]等在1988年首次发现的。同年，Stahl分离出两种人nm23-H1和nm23-H2，通过研究发现nm23-H1同肿瘤的转移关系密切。多数文献报道它同一些肿瘤高分化、低浸润及低转移有关。其机制一般认为其编码的蛋白与核苷二磷酸激酶具有高度同源性，而细胞微管的聚合和解聚需此酶的参与，nm23-H1可能通过改变了这种功能而影响肿瘤细胞的运动能力。有关nm23-H1和肺癌转移的存在两种不同意见，Yasuaki等认为nm23基因表达与淋巴结转移呈负相关[2]，而Engel等则持相反的意见[3]。本研究发现nm23-H1蛋白表达同患者临床病理分期和淋巴结转移呈负相关，其阳性表达者预后佳，这支持了nm23-H1是抑癌基因的观点。有关报道相矛盾的原因可能由于：①多数文献是针对nm23检测，而nm23-H2同肿瘤转移无关，这样就会造成统计学偏差；②免疫组化阳性标准的尺度不一；③应用不同统计学方法。
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人类CD44基因定位11号染色体短臂，它是由Dalchace等在1980年用单克隆技术检测发现。1991年，Stamenkovic[4]等按照CD44 20个外显子转录方式不同分成标准型(CD44H)和变异型(CD44V)。CD44主要参与了细胞—细胞、细胞—基质之间的特异性粘连过程。自Gunthert[5]等发现CD44V与肿瘤转移关系密切以来，有关CD44V6同肿瘤转移的研究成为当今研究的热点。Tran[6]等揭示CD44V6在非小细胞肺鳞癌的局部淋巴结转移中起着重要作用。本研究发现CD44V6与肺癌大小、病理分期和淋巴结转移呈正相关，其阳性病人预后差，5年生存期明显下降(P<0.01)。
总之，在肺鳞癌发生发展、浸润和转移过程中，在不同的阶段，不同时间和不同空间存在多种癌基因的共同调控，nm23-H1及CD44V6基因的表达与肺癌的发展及转移密切相关。同样，nm23-H1和CD44V6可看做检测肺鳞癌临床病理特征及预后的参考指标。
, 百拇医药
作者简介：姜汉芳，女(1954年～)，山东籍，学士学位，副主任医师，从事肿瘤化疗专业。
参考文献
[1] Steeg PS，Bevilacgua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene associate with low metastatic potential[J].J Natl Cancer Inst，1988，80：200
[2] Yasuaki K，Yuichi S， Takashi K， et al. Expression of nm23 protein in pulmonary adenocarcinomas： inverse correlation to tumor progression[J].Lung Cancer， 1997，17：103
[3] Engel M， Theisinger B，Seitz G， et al. Hight levels of nm23-H1 and nm23-H2 messenger RNA in human squamous cell lung careinoma are associated with poor differention and advanced tumor stages[J].Int J Cancer，1993，55：375
, http://www.100md.com
[4] Stamenkovic J， Aruffo I， Aminot A. The hematopoietic and epithelial forms of CD44 are distinct polypeptides with different adhesion potential for hyaluronate-bear cells[J]. Em Bo J，1991，10：343
[5] Gunthert U，Hofmann M， Rudy W， et al. A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells[J].Cell，1991，65：13
[6] Tran A，Kallakury BVS， Sheehan BS， et al.Expression of CD44 standard from and variant isoforms in non-small cell lung carcinoma[J]. Hum Pathol，1997，28：809
收稿：1999—12—06
修回：2000—03—07, 百拇医药
单位：姜汉芳(山东省青岛市李沧区医院肿瘤科，山东 青岛 266041)；袁明(宁夏地质工程勘察院医院，宁夏 银川 750021)；姜汉国(湛江市广东医学院病理教研室，广东 湛江 524000)
关键词：肺；肿瘤；糖蛋白分子；免疫组织化学；预后
宁夏医学杂志000607 【摘要】 目的 探讨nm23-H1和CD44V6在肺鳞癌组织中表达及预后意义。方法 应用免疫组化S-P法，对96例肺鳞癌组织进行nm23-H1和CD44V6检测并对其中66位患者进行了5年随访。结果 96例肺鳞癌的nm23-H1、CD44V6阳性表达率分别为46.9%和42.7%。nm23-H1蛋白表达同病理分期和淋巴结转移呈负相关，其预后佳。CD44V6表达与肺鳞癌大小、病理分期和淋巴结转移呈正相关，其预后差。结论 nm23-H1和CD44V6可作为检测肺鳞癌临床特征及预后参考指标。
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【中图分类号】 R734.2 【文献标识码】 A
文章编号：1001-5949(2000)06-0334-02
Expressions of nm23-H1 protein and CD44V6 in human squamous-cell carcinoma of lung and their significance in prognosis
Jiang Han-fang， Yuan Ming，JANG Han-guo
(Dept.of oncology， Licang Hosp. of Qingdao， shandong 266041，China)
【Abstract】 Objectives To study the expressions of nm23-H1 protein and CD44V6 in human squamous-cell carcinoma of lung and their significance in prognosis.Methods 66 cases who have been followed up for five years were investigated to detect the expression of nm23-H1 protein and CD44V6 by immunohistochemistry.Results The positive expression rates of nm23-H1 protein and CD44V6 were 46.9% and 42.7% respectively. nm23-H1 protein positive expression was inverse correlation to clinical stages、lymphnode metastasis and good prognosis .CD44V6 overexpression was positive correlated with tumor size、clinical stages、 lympnode metastasis and poor prognosis.Conclusions The result suggests that nm23-H1 and CD44V6 positive expression are considered as one of the indiators for evaluation the.clinical features and the prognosis of lung carcinoma.
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【Key words】 Lung；Neplasms；Immunohistochemistry；Prognosis▲
肺癌的发生和发展是一个非常复杂的生物学现象。近年来，大量的研究证实肺癌的发生发展涉及到多基因、多因素及多分子水平阶段过程。在其转移机制的研究中，尤以促进转移发生的转移基因和控制转移发生的转移抑制基因最令人感兴趣。本研究通过免疫组化法，对96例肺鳞癌组织nm23-H1和CD44V6的表达进行了检测，探讨他们的表达特征及与淋巴结转移和预后之间的关系。
1 材料和方法
1.1 材料：选取宁夏银川市医院和广东医学院附属医院1990～1994年手术切除的96例肺原发性鳞癌标本，其中男性75例，女性21例，平均年龄65.5岁。所有的肺鳞癌术前均未经过任何抗癌治疗，对其中的66位患者进行了5年随访。
1.2 方法：所有标本常规中性福尔马林固定，石蜡包埋，5μm厚连续切片，HE染色，进行分级和临床分期。免疫组化染色nm23-H1和CD44V6鼠抗人单克卫隆抗体及S-P试剂盒均购自北京中山生物试剂公司，免疫组化染色按S-P试剂盒说明书进行。以PBS代替—抗作为阴性对照，已知的阳性组织切片作为阳性对照。
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1.3 结果判断：nm23-H1以细胞浆内棕黄色颗粒为阳性细胞；CD44V6以细胞膜棕黄色为阳性细胞。阳性切片以阳性细胞>5%为标准，5%～25%为“+”，26%～50%为“
”，>50%“”。1.4 统计学方法：χ2检验。
2 结果
2.1 nm23-H1、CD44V6在肺鳞癌中的表达及同其临床病理特征的关系见表1。
在96例鳞癌中，nm23-H1蛋白过度表达与肿瘤大小和分化无关，同其病理分期和淋巴结转移呈负相关。CD44V6过表达与肿瘤分化无关，而与肿瘤大小、病理分期及淋巴结转移呈正相关，在统计学上有显著性差异(P<0.05)。
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2.2 nm23-H1、CD44V6与肺鳞癌患者预后关系见表2。
表1 nm23-H1、CD44V6与肺鳞癌病理特征关系 组别
例数
nm23-H1
+～
%CD44V6
+～
%肿瘤大小
≤4cm
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62
30
48.4
21
33.9*
>4cm
34
15
44.1
20
58.8
分化程度
高分化
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21
11
52.4
9
42.9
中分化
33
15
45.5
15
45.5
低分化
42
, 百拇医药 19
45.2
17
40.5
淋巴结转移
阳性
52
19
36.5**
27
51.9*
阴性
44
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59.1
14
31.8
临床病理分期
Ⅰ～Ⅱ期
41
25
60.9*
12
29.3*
Ⅲ～Ⅳ期
55
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20
36.4
29
52.7
*P<0.05，**P<0.01 表2 nm23-H1、CD44V6与肺鳞癌患者预后关系 术后生存时间
(年)
例数
nm23-H1
+ %
CD44V6
+ %
<80.01
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15
2
13.3
12
～548.9
41
18
43.9
<0.05
18
>10.05
10
8
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80.0
1
在随访的66例肺鳞癌者中，nm23-H1蛋白阳性表达率与患者生存期呈正相关，即阳性者预后佳；而CD44V6阳性表达者5年生存率明显下降，在统计学上有显著差异(P<0.05)。
3 讨论
nm23-H1是Steeg[1]等在1988年首次发现的。同年，Stahl分离出两种人nm23-H1和nm23-H2，通过研究发现nm23-H1同肿瘤的转移关系密切。多数文献报道它同一些肿瘤高分化、低浸润及低转移有关。其机制一般认为其编码的蛋白与核苷二磷酸激酶具有高度同源性，而细胞微管的聚合和解聚需此酶的参与，nm23-H1可能通过改变了这种功能而影响肿瘤细胞的运动能力。有关nm23-H1和肺癌转移的存在两种不同意见，Yasuaki等认为nm23基因表达与淋巴结转移呈负相关[2]，而Engel等则持相反的意见[3]。本研究发现nm23-H1蛋白表达同患者临床病理分期和淋巴结转移呈负相关，其阳性表达者预后佳，这支持了nm23-H1是抑癌基因的观点。有关报道相矛盾的原因可能由于：①多数文献是针对nm23检测，而nm23-H2同肿瘤转移无关，这样就会造成统计学偏差；②免疫组化阳性标准的尺度不一；③应用不同统计学方法。
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人类CD44基因定位11号染色体短臂，它是由Dalchace等在1980年用单克隆技术检测发现。1991年，Stamenkovic[4]等按照CD44 20个外显子转录方式不同分成标准型(CD44H)和变异型(CD44V)。CD44主要参与了细胞—细胞、细胞—基质之间的特异性粘连过程。自Gunthert[5]等发现CD44V与肿瘤转移关系密切以来，有关CD44V6同肿瘤转移的研究成为当今研究的热点。Tran[6]等揭示CD44V6在非小细胞肺鳞癌的局部淋巴结转移中起着重要作用。本研究发现CD44V6与肺癌大小、病理分期和淋巴结转移呈正相关，其阳性病人预后差，5年生存期明显下降(P<0.01)。
总之，在肺鳞癌发生发展、浸润和转移过程中，在不同的阶段，不同时间和不同空间存在多种癌基因的共同调控，nm23-H1及CD44V6基因的表达与肺癌的发展及转移密切相关。同样，nm23-H1和CD44V6可看做检测肺鳞癌临床病理特征及预后的参考指标。
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作者简介：姜汉芳，女(1954年～)，山东籍，学士学位，副主任医师，从事肿瘤化疗专业。
参考文献
[1] Steeg PS，Bevilacgua G，Kopper L，et al.Evidence for a novel gene associate with low metastatic potential[J].J Natl Cancer Inst，1988，80：200
[2] Yasuaki K，Yuichi S， Takashi K， et al. Expression of nm23 protein in pulmonary adenocarcinomas： inverse correlation to tumor progression[J].Lung Cancer， 1997，17：103
[3] Engel M， Theisinger B，Seitz G， et al. Hight levels of nm23-H1 and nm23-H2 messenger RNA in human squamous cell lung careinoma are associated with poor differention and advanced tumor stages[J].Int J Cancer，1993，55：375
, http://www.100md.com
[4] Stamenkovic J， Aruffo I， Aminot A. The hematopoietic and epithelial forms of CD44 are distinct polypeptides with different adhesion potential for hyaluronate-bear cells[J]. Em Bo J，1991，10：343
[5] Gunthert U，Hofmann M， Rudy W， et al. A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells[J].Cell，1991，65：13
[6] Tran A，Kallakury BVS， Sheehan BS， et al.Expression of CD44 standard from and variant isoforms in non-small cell lung carcinoma[J]. Hum Pathol，1997，28：809
收稿：1999—12—06
修回：2000—03—07, 百拇医药