干化学法尿液分析仪原理及临床应用
作者：刘柘 陈勇 杨治录 孙香萍
单位：(武警宁夏总队医院，宁夏 银川 750004)
关键词：
宁夏医学杂志000654 文章编号：1001-5949(2000)06-0382-02▲
干化学尿液分析仪，是由微电脑控制，根据球面积分仪和双波长测定试剂带上的颜色变化，得出实验结果。具有简单、快速、灵敏、准确等优点，并把传统的“+”、“-”号这一模糊的表示方法，改进成半定量的报告方式，大大提高了检验结果的精密性和敏感性。为临床快速诊断提供了可靠的实验依据，同时也把检验工作者从大量繁杂的手工操作中解放出来。但在试验过程中，有许多中间环节和干扰因素都直接影响尿液干化学分析，不合理的应用也会带来实验结果的误差，甚至延误诊断。据此笔者查阅了国内外有关文献和工作中的体会，对当前国内在应用尿液自动化检测中的有关问题，将提出以下意见供同道参考。
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1 在判断等级标准上要更新观念
首先要全面了解尿液分析仪的设计思想及其功能特点。该仪器的设计思想是提高灵敏度，以达到对病人早发现、早确诊、早治疗的预防为主思想，它在一些检测项目的生理和病理临界线上定的较严，如尿糖班氏法测得的“+”号尿糖浓度为5.51～27.76mmol/L[1]，而干化学法测得的“+”的尿糖浓度仅为3.89～5.51mmol/L，从理论上就提高了30%，干化学法测出的“”、“”号的尿糖浓度也都在班氏法尿糖浓度“+”号范围内。这就要求我们不能沿用传统手工法的定性分级观念来衡量解释和判断临床诊断。
2 尿糖(GLU)测定
干化学试剂带法测定尿糖的膜块中主要含有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和色源及其它物质。在测定中应注意：(1)干化学法与班氏法的特异性不同，干化学法的特异性强，只与葡萄糖反应；而班氏法与尿内所有还原性糖(葡萄糖、乳糖和半乳糖等)和所有还原性物质都反应。(2)维生素C、抗生素对班氏法测定结果有不同程度的影响[2]，这可能与维生素C、抗生素同班氏试剂中铜离子反应有关，而干化学法没有影响。(3)干化学法测定尿葡萄糖只是一般半定量的过筛实验，它所设计的档次与传统班氏定性法的档次存在着差异，因此对于动态观察的糖尿病病人，最好使用湿化学定量分析。
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3 尿蛋白(PRO)测定
干化学法是根据试剂带指示剂蛋白误差原理，膜块中主要含有酸碱指示剂——溴酚蓝(pH值为3.0～4.6)，枸橼酸缓冲系统和表面活性剂。在pH值为3.2时，溴酚蓝产生阴离子，与带阳离子的蛋白质(白蛋白)结合后发生颜色变化。在测定中应注意：(1)尿液应新鲜，陈旧尿液会使pH变化影响实验结果。(2)病人服用奎宁、奎宁丁等药物时，引起尿液呈强碱尿(pH≥9.0)，使干化学法出现假阳性结果；而用磺基水杨酸法和加热乙酸法作尿蛋白定性时出现假阴性结果[3]。(3)大量的青霉素族药物治疗后对干化学法产生假阴性，而对磺基水杨酸法产生假阳性[3]。(4)要注意不同测定方法对病人尿液内不同类型的蛋白质检测的敏感性不同，磺基水杨酸、双缩脲定量，可以对白蛋白、球蛋白显示同样的敏感性；而干化学法测量球蛋白的敏感性仅是白蛋白的1/100～1/50[3]，因此对于肾病患者，特别是在疾病发展过程中需要系统观察尿蛋白含量的病例最好使用磺柳酸法(或加热乙酸法)和双缩脲法进行定性、定量实验。
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4 尿亚硝酸盐(NIT)测定
大多数尿路感染是由大肠埃希氏菌引起的，正常人尿液中含有来自食物或蛋白质正常代谢产物的硝酸盐，当尿液中有大肠埃希氏菌增殖时，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，使膜块中对氨基苯砷酸重氮化而成重氮盐，后者与1，2，3，4—四氢并喹啉—3酚偶联使膜块产生红色，借以诊断患者是否被大肠埃希氏菌感染，其检出敏感度为0.03～0.06mg/dl[3]。尿液中亚硝酸盐检出率受感染细菌是否含有硝酸盐还原酶、食物中是否含有适量的硝酸盐和尿液在膀胱是否停留间隔4小时三个方面的影响，若符合上述三个条件，此实验的检出率为80%；反之呈阴性结果[3]。因此本实验阴性并不能排除菌尿的可能；同样亚硝酸盐试验阳性也不能完全肯定泌尿系感染，标本放置过久或污染可呈假阳性，应结合其它尿液检查结果，综合分析，得出正确判断。
5 尿酮体(KET)测定
尿酮体膜块中主要含有亚硝基铁氰化钠，可与尿液中乙酰乙酸、丙酮产生紫色反应。其对乙酰乙酸的敏感性为50～100mg/L，对丙酮仅为400～700mg/L，不与β-羟丁酸发生作用[2]。测定中应注意：(1)尿液必须新鲜，及时送检，以免酮体的挥发或分解，出现假阴性结果。(2)干化学法与酮体粉法的灵敏度的差异[2]。同一病理标本两种方法可能出现截然不同的结果，结果分析时应特别注意。(3)不同病程酮体成分的变化会给检测结果带来差异。不同病因引起的酮症，酮体的成分不同，即使同一病人在不同病程也可有差异，在糖尿病酮症酸中毒早期，酮体的主要成分是β-羟丁酸，乙酰乙酸很少或缺乏[3]，此时测量可导致对总酮体量估计不足；在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，乙酰乙酸含量反而比急性期初始含量高。因此检验人员必须注意病程发展，与临床医生共同分析实验结果的可靠性。
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6 尿胆红质(BIL) 尿胆原(UBG)测定
胆红质测定原理是直接胆红质在强酸介质中，与2，4-二氯苯胺重氮盐起偶联反应呈紫红色。尿胆原的原理与改良Ehrlich 相同。在实验中应注意：(1)标本必须新鲜。(2)尿液中含高浓度维生素C和亚硝酸盐时，抑制偶氮反应使尿胆红质呈假阴性[3]；当患者接受大剂量氯丙嗪治疗或尿中含有盐酸苯偶氮吡啶的代谢产物时，可呈假阴性[3]。(3)尿液中一些内源物质如胆色素原、胆红素等，可使尿胆原检查结果出现假阳性；有些药物也可产色，干扰实验[3]。(4)正常人尿胆原排出量每天波动很大，夜间和上午量少，午后则迅速增加，在午后2～4时达最高峰[2]，故应结合留样时间评价结果。
7 pH测定
原理是试剂带中含有甲基红(PH阈值4.6～6.2)和溴麝香草酚蓝(pH阈值6.0～7.6)，两种酸碱指示剂适量配合可反应PH4.5～9.0的变化范围[2]。检测时尿标本必须新鲜，放久细菌分解尿液成分，可导致PH改变。干化学法实际应严格按规定时间浸泡，如浸泡过长PH呈降低趋势；尿液PH主要反映肾脏在维持血浆和细胞外液正常氢离子方面的能力，而干化学法测定只是一个半定量的实验结果。因此在临床观察结果时，不要单从尿PH测定值分析，要结合临床其他资料和实验数据，综合分析才能得出正确的判断。
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8 尿比重(SG)测定
在干化学法检查时应注意：(1)当尿液PH≥7时，应在测定结果的基础上增加0.005作为由于尿液PH损失的补偿[2]。(2)尿蛋白增高时，以干化学法影响最为明显，折射仪法次之，比重法影响最小。(3)干化学法不宜用于新生儿尿比重检查。可能是由于新生儿尿比重太低。(4)干化学法只能用于筛选，病理性特别是系统观察的病例仍以折射仪法更为理想。
9 尿血红蛋白、尿红细胞(BLD)测定
其原理是邻甲苯胺法，测定时应注意：(1)尿液必须新鲜，留尿后应立即测定，以免红细胞破坏，导致干化学法与镜检法的人为误差。(2)干化学法既可对完整的红细胞反应，又能测定游离的血红蛋白量，因此报告时要了解临床诊断，综合分析。由于肾病患者，终尿中红细胞因各种因素变形裂解或血红蛋白溢出，可导致仪器法与目测法的差异。笔者认为此标本最好不使用干化学法。(3)尿中含有对热不稳定酶、肌红蛋白尿或菌尿可引起假阳性。(4)大量维生素C是可干扰实验结果应予以警惕。
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10 尿白细胞(LEU)测定
干化学法测定尿内白细胞的原理是基于粒细胞胞质内含有特异性酯酶可作用于膜块中的吲哚酚酯，并与重氮盐反应形成紫色缩合物，其颜色深浅与细胞的多少呈比例关系[3]。该项检查其影响因素较多，为此尿液必须新鲜，以免细胞被破坏，导致结果误差。同时应了解此法只能测定粒细胞，不与淋巴细胞起反应，在肾移植病人发生排异反应时，尿中以淋巴细胞为主时，或其它病因引起的淋巴细胞尿时会产生阴性结果。尿蛋白>5g/L或尿液中含有大剂量先锋Ⅳ或庆大霉素等药物时，可使结果偏低或出现假阴性结果。尿中如甲醛污染或高浓度胆红质时，可产生假阳性。该项检查，凡筛选后阳性尿必须镜检。
11 尿干化学分析仪主要用于常规筛选
因其设计上的高度敏感性，国外主要用于临床常规筛选检验及治疗监护。很多学者指出，在尿红细胞、白细胞、蛋白、亚硝酸盐均为干化学阴性的非肾病、泌尿科病人，无需特殊要求(查管型、结晶)镜检的患者，才可使用干化学法进行尿液白细胞、红细胞的筛查[4]，这是提高质量控制和充分发挥尿干化学分析仪的临床作用及社会效益的重要措施和内容之一。以干化学法检查完全取代镜检是不科学的，由于干化学法分析干扰因素较多，因此要结合临床表现判断结果，决不可只采用干化学分析，而忽视镜检。
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参考文献
[1] 张绍林.临床检验[M].四川：科学技术出版社出版，1989.274
[2] 丛玉隆，马骏龙.当代尿液分析技术与临床[M].北京：中国科学技术出版社出版，1998，38，40，53，55，58
[3] 丛玉隆，王淑娟.今日临床检验学[M].北京：中国科学技术出版社出版，1998.236，238，239
[4] 丛玉隆，陈宝梁，孙芾，等.我国临床检验50年进展[M].中华医学检验杂志，999，5：274
收稿：2000-04-06
修回：2000-04-13, 百拇医药
单位：(武警宁夏总队医院，宁夏 银川 750004)
关键词：
宁夏医学杂志000654 文章编号：1001-5949(2000)06-0382-02▲
干化学尿液分析仪，是由微电脑控制，根据球面积分仪和双波长测定试剂带上的颜色变化，得出实验结果。具有简单、快速、灵敏、准确等优点，并把传统的“+”、“-”号这一模糊的表示方法，改进成半定量的报告方式，大大提高了检验结果的精密性和敏感性。为临床快速诊断提供了可靠的实验依据，同时也把检验工作者从大量繁杂的手工操作中解放出来。但在试验过程中，有许多中间环节和干扰因素都直接影响尿液干化学分析，不合理的应用也会带来实验结果的误差，甚至延误诊断。据此笔者查阅了国内外有关文献和工作中的体会，对当前国内在应用尿液自动化检测中的有关问题，将提出以下意见供同道参考。
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1 在判断等级标准上要更新观念
首先要全面了解尿液分析仪的设计思想及其功能特点。该仪器的设计思想是提高灵敏度，以达到对病人早发现、早确诊、早治疗的预防为主思想，它在一些检测项目的生理和病理临界线上定的较严，如尿糖班氏法测得的“+”号尿糖浓度为5.51～27.76mmol/L[1]，而干化学法测得的“+”的尿糖浓度仅为3.89～5.51mmol/L，从理论上就提高了30%，干化学法测出的“”、“”号的尿糖浓度也都在班氏法尿糖浓度“+”号范围内。这就要求我们不能沿用传统手工法的定性分级观念来衡量解释和判断临床诊断。
2 尿糖(GLU)测定
干化学试剂带法测定尿糖的膜块中主要含有葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和色源及其它物质。在测定中应注意：(1)干化学法与班氏法的特异性不同，干化学法的特异性强，只与葡萄糖反应；而班氏法与尿内所有还原性糖(葡萄糖、乳糖和半乳糖等)和所有还原性物质都反应。(2)维生素C、抗生素对班氏法测定结果有不同程度的影响[2]，这可能与维生素C、抗生素同班氏试剂中铜离子反应有关，而干化学法没有影响。(3)干化学法测定尿葡萄糖只是一般半定量的过筛实验，它所设计的档次与传统班氏定性法的档次存在着差异，因此对于动态观察的糖尿病病人，最好使用湿化学定量分析。
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3 尿蛋白(PRO)测定
干化学法是根据试剂带指示剂蛋白误差原理，膜块中主要含有酸碱指示剂——溴酚蓝(pH值为3.0～4.6)，枸橼酸缓冲系统和表面活性剂。在pH值为3.2时，溴酚蓝产生阴离子，与带阳离子的蛋白质(白蛋白)结合后发生颜色变化。在测定中应注意：(1)尿液应新鲜，陈旧尿液会使pH变化影响实验结果。(2)病人服用奎宁、奎宁丁等药物时，引起尿液呈强碱尿(pH≥9.0)，使干化学法出现假阳性结果；而用磺基水杨酸法和加热乙酸法作尿蛋白定性时出现假阴性结果[3]。(3)大量的青霉素族药物治疗后对干化学法产生假阴性，而对磺基水杨酸法产生假阳性[3]。(4)要注意不同测定方法对病人尿液内不同类型的蛋白质检测的敏感性不同，磺基水杨酸、双缩脲定量，可以对白蛋白、球蛋白显示同样的敏感性；而干化学法测量球蛋白的敏感性仅是白蛋白的1/100～1/50[3]，因此对于肾病患者，特别是在疾病发展过程中需要系统观察尿蛋白含量的病例最好使用磺柳酸法(或加热乙酸法)和双缩脲法进行定性、定量实验。
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4 尿亚硝酸盐(NIT)测定
大多数尿路感染是由大肠埃希氏菌引起的，正常人尿液中含有来自食物或蛋白质正常代谢产物的硝酸盐，当尿液中有大肠埃希氏菌增殖时，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，使膜块中对氨基苯砷酸重氮化而成重氮盐，后者与1，2，3，4—四氢并喹啉—3酚偶联使膜块产生红色，借以诊断患者是否被大肠埃希氏菌感染，其检出敏感度为0.03～0.06mg/dl[3]。尿液中亚硝酸盐检出率受感染细菌是否含有硝酸盐还原酶、食物中是否含有适量的硝酸盐和尿液在膀胱是否停留间隔4小时三个方面的影响，若符合上述三个条件，此实验的检出率为80%；反之呈阴性结果[3]。因此本实验阴性并不能排除菌尿的可能；同样亚硝酸盐试验阳性也不能完全肯定泌尿系感染，标本放置过久或污染可呈假阳性，应结合其它尿液检查结果，综合分析，得出正确判断。
5 尿酮体(KET)测定
尿酮体膜块中主要含有亚硝基铁氰化钠，可与尿液中乙酰乙酸、丙酮产生紫色反应。其对乙酰乙酸的敏感性为50～100mg/L，对丙酮仅为400～700mg/L，不与β-羟丁酸发生作用[2]。测定中应注意：(1)尿液必须新鲜，及时送检，以免酮体的挥发或分解，出现假阴性结果。(2)干化学法与酮体粉法的灵敏度的差异[2]。同一病理标本两种方法可能出现截然不同的结果，结果分析时应特别注意。(3)不同病程酮体成分的变化会给检测结果带来差异。不同病因引起的酮症，酮体的成分不同，即使同一病人在不同病程也可有差异，在糖尿病酮症酸中毒早期，酮体的主要成分是β-羟丁酸，乙酰乙酸很少或缺乏[3]，此时测量可导致对总酮体量估计不足；在糖尿病酮症酸中毒症状缓解之后，乙酰乙酸含量反而比急性期初始含量高。因此检验人员必须注意病程发展，与临床医生共同分析实验结果的可靠性。
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6 尿胆红质(BIL) 尿胆原(UBG)测定
胆红质测定原理是直接胆红质在强酸介质中，与2，4-二氯苯胺重氮盐起偶联反应呈紫红色。尿胆原的原理与改良Ehrlich 相同。在实验中应注意：(1)标本必须新鲜。(2)尿液中含高浓度维生素C和亚硝酸盐时，抑制偶氮反应使尿胆红质呈假阴性[3]；当患者接受大剂量氯丙嗪治疗或尿中含有盐酸苯偶氮吡啶的代谢产物时，可呈假阴性[3]。(3)尿液中一些内源物质如胆色素原、胆红素等，可使尿胆原检查结果出现假阳性；有些药物也可产色，干扰实验[3]。(4)正常人尿胆原排出量每天波动很大，夜间和上午量少，午后则迅速增加，在午后2～4时达最高峰[2]，故应结合留样时间评价结果。
7 pH测定
原理是试剂带中含有甲基红(PH阈值4.6～6.2)和溴麝香草酚蓝(pH阈值6.0～7.6)，两种酸碱指示剂适量配合可反应PH4.5～9.0的变化范围[2]。检测时尿标本必须新鲜，放久细菌分解尿液成分，可导致PH改变。干化学法实际应严格按规定时间浸泡，如浸泡过长PH呈降低趋势；尿液PH主要反映肾脏在维持血浆和细胞外液正常氢离子方面的能力，而干化学法测定只是一个半定量的实验结果。因此在临床观察结果时，不要单从尿PH测定值分析，要结合临床其他资料和实验数据，综合分析才能得出正确的判断。
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8 尿比重(SG)测定
在干化学法检查时应注意：(1)当尿液PH≥7时，应在测定结果的基础上增加0.005作为由于尿液PH损失的补偿[2]。(2)尿蛋白增高时，以干化学法影响最为明显，折射仪法次之，比重法影响最小。(3)干化学法不宜用于新生儿尿比重检查。可能是由于新生儿尿比重太低。(4)干化学法只能用于筛选，病理性特别是系统观察的病例仍以折射仪法更为理想。
9 尿血红蛋白、尿红细胞(BLD)测定
其原理是邻甲苯胺法，测定时应注意：(1)尿液必须新鲜，留尿后应立即测定，以免红细胞破坏，导致干化学法与镜检法的人为误差。(2)干化学法既可对完整的红细胞反应，又能测定游离的血红蛋白量，因此报告时要了解临床诊断，综合分析。由于肾病患者，终尿中红细胞因各种因素变形裂解或血红蛋白溢出，可导致仪器法与目测法的差异。笔者认为此标本最好不使用干化学法。(3)尿中含有对热不稳定酶、肌红蛋白尿或菌尿可引起假阳性。(4)大量维生素C是可干扰实验结果应予以警惕。
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10 尿白细胞(LEU)测定
干化学法测定尿内白细胞的原理是基于粒细胞胞质内含有特异性酯酶可作用于膜块中的吲哚酚酯，并与重氮盐反应形成紫色缩合物，其颜色深浅与细胞的多少呈比例关系[3]。该项检查其影响因素较多，为此尿液必须新鲜，以免细胞被破坏，导致结果误差。同时应了解此法只能测定粒细胞，不与淋巴细胞起反应，在肾移植病人发生排异反应时，尿中以淋巴细胞为主时，或其它病因引起的淋巴细胞尿时会产生阴性结果。尿蛋白>5g/L或尿液中含有大剂量先锋Ⅳ或庆大霉素等药物时，可使结果偏低或出现假阴性结果。尿中如甲醛污染或高浓度胆红质时，可产生假阳性。该项检查，凡筛选后阳性尿必须镜检。
11 尿干化学分析仪主要用于常规筛选
因其设计上的高度敏感性，国外主要用于临床常规筛选检验及治疗监护。很多学者指出，在尿红细胞、白细胞、蛋白、亚硝酸盐均为干化学阴性的非肾病、泌尿科病人，无需特殊要求(查管型、结晶)镜检的患者，才可使用干化学法进行尿液白细胞、红细胞的筛查[4]，这是提高质量控制和充分发挥尿干化学分析仪的临床作用及社会效益的重要措施和内容之一。以干化学法检查完全取代镜检是不科学的，由于干化学法分析干扰因素较多，因此要结合临床表现判断结果，决不可只采用干化学分析，而忽视镜检。
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参考文献
[1] 张绍林.临床检验[M].四川：科学技术出版社出版，1989.274
[2] 丛玉隆，马骏龙.当代尿液分析技术与临床[M].北京：中国科学技术出版社出版，1998，38，40，53，55，58
[3] 丛玉隆，王淑娟.今日临床检验学[M].北京：中国科学技术出版社出版，1998.236，238，239
[4] 丛玉隆，陈宝梁，孙芾，等.我国临床检验50年进展[M].中华医学检验杂志，999，5：274
收稿：2000-04-06
修回：2000-04-13, 百拇医药