口腔鳞癌nm23-H1基因存在状态及其与转移的关系
作者：刘刚 李金荣 东耀峻 杨学文
单位：430079 武汉，湖北医科大学口腔医学院口腔颌面外科
关键词：
中华口腔医学杂志000628 nm23是近年发现的一个肿瘤转移抑制基因，nm23包括nm23-H1和nm23-H2两个亚型，本研究旨在探讨口腔鳞癌nm23-H1基因的存在状态及其与颈淋巴结转移的关系。
一、 材料和方法
1. 研究对象：30例口腔鳞癌标本及7例正常对照标本均来自湖北医科大学口腔医学院口腔颌面外科手术患者。鳞癌组织学根据Broder分级分为4级。口腔鳞癌转移癌细胞系GNM及舌鳞癌细胞系Tscca由湖北医科大学口腔医学院建立。
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2. PCR扩增nm23-H1基因:引物设计：正义链5′GGCTCGAAATGGCCAACT-GTGAGCG3′,反义链5′GGGCGGCCGC-TCATTCATAGATCCAGTTC3′;扩增条件：变性 94 ℃，1 min, 复性55 ℃，1 min, 延伸72 ℃，1 min，共30个循环。
3. SSCP法检测nm23-H1基因突变：将PCR产物进行变性PAGE电泳，EB染色，凡出现和正常组织泳动带不同者为发生基因突变。
4.鳞癌组织及两细胞系nm23-H1cDNA探针杂交：鳞癌标本冰冻切片，细胞系制成涂片，固定，消化，预杂交，地高辛标记之nm23-H1探针杂交，检测杂交信号。阳性判断：癌细胞浆内出现棕黄色颗粒即为阳性细胞，阳性细胞数>20%为(+)，<20%为(-)。
5.统计学方法：采用四格表确切概率法。
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二、 结果
1. PCR产物片段大小为533 bp，1例鳞癌标本nm23-H1基因缺失；SSCP结果表明无1例nm23-H1基因发生了编码区突变。
2.原位杂交结果：阳性反应出现在肿瘤细胞浆。9例有转移的患者中有7例nm23-H1表达阴性，而21例未转移的患者只有5例nm23-H1表达阴性；TSCCa nm23-H1mRNA阳性率高于GNM细胞nm23-H1的表达与颈淋巴结转移呈显著负相关，而与病理分级无关。
三、讨论
1988年Steeg等[1]研究发现，有高转移潜能黑色素瘤细胞系nm23基因的表达比低转移潜能的细胞低10倍，因此推测nm23是一肿瘤转移抑制基因。后陆续发现，nm23基因有两个亚型，即nm23-H1和nm23-H2，但nm23-H1基因似乎和转移发生关系更密切。
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12例nm23-H1(-)口腔鳞癌患者中有7例发生转移，而在18例nm23-H1(+)患者中只有5例出现颈淋巴结转移，这说明nm23-H1mRNA翻译产物在颈淋巴结转移中起着抑制作用。另外，由转移癌建立的细胞系GNM nm23-H1mRNA阳性率要低于由原发灶建立的细胞系TSCCa，提示无nm23-H1基因表达的鳞癌细胞可能更具有转移潜能。
本实验发现，除1例有基因缺失外，未发现nm23-H1基因结构有变化，说明口腔鳞癌nm23-H1表达水平的变化可能是因该基因转录机制出现障碍或nm23-H1mRNA稳定性下降所致。
肿瘤转移是多基因的正负调节失控所致，任何单一基因的变化都不足以发生转移，正如我们的实验表明：nm23-H1mRNA(+)病例也可发生转移，而nm23-H1(-)患者并不是都发生转移，所以联合其他转移相关基因进行分析有助于进一步全面地阐明口腔鳞癌转移的机理。
基金项目：湖北省自然科学基金资助项目
参考文献
1.Steeg PS, Bevilacqua G, Kopper L, et al. Evidence for a novel gene associated with low tumor metastasis potential. J Natl Cancer Inst, 1998, 80:200-204.
(收稿日期：1999-03-16), 百拇医药
单位：430079 武汉，湖北医科大学口腔医学院口腔颌面外科
关键词：
中华口腔医学杂志000628 nm23是近年发现的一个肿瘤转移抑制基因，nm23包括nm23-H1和nm23-H2两个亚型，本研究旨在探讨口腔鳞癌nm23-H1基因的存在状态及其与颈淋巴结转移的关系。
一、 材料和方法
1. 研究对象：30例口腔鳞癌标本及7例正常对照标本均来自湖北医科大学口腔医学院口腔颌面外科手术患者。鳞癌组织学根据Broder分级分为4级。口腔鳞癌转移癌细胞系GNM及舌鳞癌细胞系Tscca由湖北医科大学口腔医学院建立。
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2. PCR扩增nm23-H1基因:引物设计：正义链5′GGCTCGAAATGGCCAACT-GTGAGCG3′,反义链5′GGGCGGCCGC-TCATTCATAGATCCAGTTC3′;扩增条件：变性 94 ℃，1 min, 复性55 ℃，1 min, 延伸72 ℃，1 min，共30个循环。
3. SSCP法检测nm23-H1基因突变：将PCR产物进行变性PAGE电泳，EB染色，凡出现和正常组织泳动带不同者为发生基因突变。
4.鳞癌组织及两细胞系nm23-H1cDNA探针杂交：鳞癌标本冰冻切片，细胞系制成涂片，固定，消化，预杂交，地高辛标记之nm23-H1探针杂交，检测杂交信号。阳性判断：癌细胞浆内出现棕黄色颗粒即为阳性细胞，阳性细胞数>20%为(+)，<20%为(-)。
5.统计学方法：采用四格表确切概率法。
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二、 结果
1. PCR产物片段大小为533 bp，1例鳞癌标本nm23-H1基因缺失；SSCP结果表明无1例nm23-H1基因发生了编码区突变。
2.原位杂交结果：阳性反应出现在肿瘤细胞浆。9例有转移的患者中有7例nm23-H1表达阴性，而21例未转移的患者只有5例nm23-H1表达阴性；TSCCa nm23-H1mRNA阳性率高于GNM细胞nm23-H1的表达与颈淋巴结转移呈显著负相关，而与病理分级无关。
三、讨论
1988年Steeg等[1]研究发现，有高转移潜能黑色素瘤细胞系nm23基因的表达比低转移潜能的细胞低10倍，因此推测nm23是一肿瘤转移抑制基因。后陆续发现，nm23基因有两个亚型，即nm23-H1和nm23-H2，但nm23-H1基因似乎和转移发生关系更密切。
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12例nm23-H1(-)口腔鳞癌患者中有7例发生转移，而在18例nm23-H1(+)患者中只有5例出现颈淋巴结转移，这说明nm23-H1mRNA翻译产物在颈淋巴结转移中起着抑制作用。另外，由转移癌建立的细胞系GNM nm23-H1mRNA阳性率要低于由原发灶建立的细胞系TSCCa，提示无nm23-H1基因表达的鳞癌细胞可能更具有转移潜能。
本实验发现，除1例有基因缺失外，未发现nm23-H1基因结构有变化，说明口腔鳞癌nm23-H1表达水平的变化可能是因该基因转录机制出现障碍或nm23-H1mRNA稳定性下降所致。
肿瘤转移是多基因的正负调节失控所致，任何单一基因的变化都不足以发生转移，正如我们的实验表明：nm23-H1mRNA(+)病例也可发生转移，而nm23-H1(-)患者并不是都发生转移，所以联合其他转移相关基因进行分析有助于进一步全面地阐明口腔鳞癌转移的机理。
基金项目：湖北省自然科学基金资助项目
参考文献
1.Steeg PS, Bevilacqua G, Kopper L, et al. Evidence for a novel gene associated with low tumor metastasis potential. J Natl Cancer Inst, 1998, 80:200-204.
(收稿日期：1999-03-16), 百拇医药