胆腑舒胶囊对实验性胆囊结石胆汁卵磷脂、总胆汁酸、粘蛋白及血清脂代谢的影响
作者：龙明照 龙凤昌 刘悦新 钱靖 贾云 马湖蕊 宋云娟
单位：云南省红十字会医院中西医结合科，云南 昆明 650021
关键词：胆囊胆固醇结石；脂代谢；卵磷脂；总胆汁酸；粘蛋白；胆腑舒胶囊；中医药
中国中西医结合急救杂志000615 摘要：目的：观察胆腑舒胶囊对家兔实验性胆固醇结石的溶石作用及机制。方法：血清脂代谢指标在全自动生化仪上完成。胆汁中总胆固醇(TC)、总胆汁酸分别用硫磷铁法、磷钼酸比色法测定。胆汁中卵磷脂、粘蛋白分别运用硝化-磷钼酸-氨萘磺酸法、磷钨酸沉淀酚试剂法测定。结果：胆腑舒胶囊可有效地降低血清TC、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及胆汁中胆固醇、粘蛋白浓度，提高胆汁中总胆汁酸、卵磷脂含量。结论：胆腑舒胶囊能较好地溶、排胆囊胆固醇结石，其机制与调节脂质代谢、改善致石性胆汁及纠正胆囊动力学等作用有关。
, 百拇医药
中图分类号：R575.6;R285.5 文献标识码：A
文章编号：1008-9691(2000)06-0350-03
The effect of Danfushu capsule(胆腑舒胶囊) on bile lecithin,total bile acid,mucin and serum lipid metabolism in experimental gallstone rabbits
LONG Ming-zhao,LONG Feng-chang,LIU Yue-xin,et al.
(The Red Cross Hospital of Yunnan Province,Kunming Yunnan 650021)
Abstract:Objective:To observe the stone-lysis effect of Danfushu capsule(胆腑舒胶囊) on cholesterol stone in rabbit model and its mechanism.Methods:The parameters of serum lipid metabolism were detected by full automatic biochemical instrument.The total cholesterol(TC) and total bile acid in bile gall were measured by nemafos method and phosphomolybdic acid colorimetry respectively,and the bile lecithin and mucin were done by nitrification-phosphomolybdic acid-naphthionic acid and phosphotungstic acid precipitation-phenol reagent method respectively.Results:Danfushu capsule could obviously reduce the concentrations of serum total cholesterol(TC),triglycerides(TG),low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C) ,bile cholesterol,and mucin,meanwhile increase the contents of total bile acid and lecithin in bile gall.Conclusions:Danfushu capsule is good at lytic and eliminating effects on cholesterol gallstone.The mechanisms are related to the regulation of lipid metabolism,improvement of pathogenetic bile,and gallbladder.
, 百拇医药
Key words:cholesterol stone;lipid metabolism;lecithin;total bile acid;mucin;Danfushu capsule;traditional Chinese medicine
胆腑舒胶囊具有清热利湿、祛痰消瘀作用，是为治疗湿热内蕴、痰瘀交阻型胆固醇结石而研制的中药复方制剂。为探讨该方的作用机制，我们通过动物实验研究了胆腑舒胶囊对兔胆汁中卵磷脂、总胆汁酸、粘蛋白及血清脂代谢的影响。
1 材料与方法
1.1 动物及分组：成年健康日本杂交大耳白兔40只(昆明医学院实验动物中心提供)，雌雄不拘，体重2.5～2.9 kg。随机取10只作正常组，喂普通颗粒饲料。另30只则用含1.2%高胆固醇的标准饲料饲养[1]，制模80日后又随机分为3组，每组10只。其中模型组继续喂饲同正常组；而治疗组则以胆腑舒胶囊1.60 g*kg-1*d-1灌胃(由金钱草、大黄、青皮、木香、海藻等组成，本课题组自制)；对照组以肝胆结石片1.50 g*kg-1*d-1灌胃(由四川旭华制药有限公司提供)。
, 百拇医药
1.2 标本收集：以上4组饲养、灌胃40日后，于剖杀前禁食24小时。自兔耳静脉取血，空气栓塞法处死后，收集胆汁、胆囊组织并观察成石情况。
1.3 观测指标及检测方法：
1.3.1 胆囊胆汁胆固醇结晶及结石鉴定。结石判断标准：肉眼观察胆汁内有成形粗大颗粒，光镜下观察为致密大团块结晶胆固醇。胆固醇结晶定量参照Juniper标准[2]分为(+)、(++)、(+++)及(++++)4个等级。
1.3.2 血清血脂测定：总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)等脂代谢指标均在全自动生化仪上完成。
1.3.3 胆汁中脂质成分测定：胆固醇采用硫磷铁法测定；卵磷脂用硝化磷钼酸氨萘磺酸法测定；总胆汁酸用磷钼酸比色法测定。
, 百拇医药
1.3.4 胆汁中粘蛋白测定：采用磷钨酸沉淀酚试剂法测定。
1.4 统计学方法：多个样本均数间比较用q检验。
2 结 果
2.1 胆汁胆固醇结晶与结石：正常组胆囊胆汁几乎无胆固醇结晶(0～±)，未见结石；模型组胆固醇结晶为(++++)，7只有结石；治疗组为(0～+)，2只有结石；对照组为(+～++)，4只有结石。
2.2 血清血脂测定：从表1看出，模型组的TC、TG、LDLC值均显著高于正常组。而治疗组能明显降低TC、TG、LDLC值，升高HDLC浓度，且疗效优于对照组。
2.3 胆汁中脂质和粘蛋白：从表2看出，模型组的总胆汁酸、卵磷脂值均较正常组明显降低，而胆固醇、粘蛋白含量则较高。治疗组能升高总胆汁酸、卵磷脂浓度，降低胆固醇、粘蛋白含量，且作用明显优于对照组。
, 百拇医药
2.4 胆囊形态学改变：光镜下，正常组胆囊粘膜上皮细胞呈单层柱状排列，粘膜皱襞完整。模型组胆囊部分被覆腺上皮脱落或增生，粘膜间质水肿、充血、炎细胞浸润。而治疗组、对照组的上述病变较轻。
3 讨 论
本研究通过给予实验性家兔高胆固醇饮食，发现兔血清中TC、TG、LDLC浓度增加，HDLC浓度降低，形成高脂血症，同时，胆汁中的胆固醇浓度也升高。Kern认为高胆固醇血症时，血浆胆固醇可经肝细胞浆膜转运分泌入胆汁而不进入胞浆，使血浆胆固醇快速转运入胆汁[3]。另外，血清LDLC是胆汁中胆固醇的重要来源，其含量升高，可使胆汁中胆固醇更趋饱和。而血清HDLC升高却能抑制肝脏合成胆固醇，减少胆汁中胆固醇水平[4]。所以，本实验认为胆腑舒胶囊能取得较好疗效，其机制之一可能是由于胆腑舒胶囊降低了血清TC、TG、LDLC浓度，升高血清HDLC含量，从而降低胆汁中胆固醇浓度，不致胆汁中胆固醇过饱和，阻止了“致石性胆汁”形成，故治疗组胆囊中胆固醇结晶最少，此疗效优于对照组。中医认为本方中海藻有软坚化痰之功；现代药理研究也认为海藻中藻胶酸能降低实验性高脂血症家兔的胆固醇水平[5]。所以本方有一定降脂效果。
, 百拇医药
胆囊胆汁中游离非脂化状态的胆固醇浓度，通常取决于胆汁中胆汁酸池大小及分泌率。当胆汁酸浓度超过临界微胶粒浓度时，胆汁酸和卵磷脂易形成混合微胶粒，并将胆固醇包在其疏水的内表面溶解[6]。以致胆固醇不能析出结晶，也有助于胆固醇结石的溶解。所以，当胆汁中胆汁酸和卵磷脂的含量低，而胆固醇含量高时，易形成胆固醇结晶。本实验发现，胆腑舒胶囊可明显提高胆汁中胆汁酸、卵磷脂浓度，降低胆固醇浓度，因此，其胆囊胆汁中少见胆固醇结晶、结石。此也是胆腑舒胶囊能较好溶解胆囊结石的重要机制。
粘蛋白可作为胆石基质网络胆固醇结晶，或作为成核因子促使胆石形成。其浓度过高，还会增加胆汁粘度，使胆汁流动缓慢，易析出胆固醇结晶。本研究通过观察各组胆囊形态变化，发现模型组胆囊有明显的炎症、水肿，其炎症刺激了胆囊粘蛋白分泌，故胆汁中粘蛋白浓度高。另外，其水肿胆囊还使胆汁排泄不畅。应用胆腑舒胶囊治疗后，发现胆汁中粘蛋白含量、胆汁粘度明显降低，胆囊水肿减轻，改善了胆囊动力学环境。现代药理研究认为，胆腑舒胶囊中金钱草、大黄、青皮、木香配伍，可松弛胆管括约肌、降低胆内压，有引流胆汁，排出结石，控制感染等作用[7]。所以，本方排石效果较佳。
, 百拇医药
表1 各组血清中血脂含量(
±s)mmol/L 组别
动物数(只)
TC
TG
HDLC
LDLC
正常组
10
1.91±0.38
2.07±1.05
0.77±0.24
, 百拇医药
0.73±0.28
模型组
10
8.49±1.36**
2.74±0.25**
0.63±0.34**
4.92±0.69**
对照组
10
3.52±1.32△△
, 百拇医药
1.89±1.66△△
0.82±0.28△△
2.22±0.58△△
治疗组
10
1.62±1.20△△＃＃
1.09±0.42△△＃＃
0.92±0.55△△＃＃
0.82±0.30△△＃＃
注：与正常组比较：*P<0.01；与模型组比较：△△P<0.01；与对照组比较：＃＃P<0.01表2 各组胆汁中卵磷脂、胆汁酸、胆固醇及粘蛋白的含量(±s) 组别
, http://www.100md.com
动物数(只)
总胆汁酸(mmol/L)
卵磷脂(mmol/L)
胆固醇(mmol/L)
粘蛋白(mg/L)
正常组
10
0.82±0.02
0.74±0.02
0.21±0.02
201.30±7.97
, 百拇医药
模型组
10
0.63±0.04
0.56±0.02
0.36±0.02
263.89±5.04
对照组
10
0.75±0.02△△
0.65±0.02△△
, 百拇医药
0.27±0.02△△
236.30±3.53△△
治疗组
10
0.79±0.02△△＃
0.68±0.01△△＃
0.24±0.01△△＃
221.00±6.29△△＃
注：与正常组比较：*P<0.01；与模型组比较：△△P<0.01；与对照组比较：＃P<0.05
, 百拇医药
尽管胆腑舒胶囊在调节脂质代谢、改善致石性胆汁及纠正胆囊动力学等方面的作用是肯定的，但其毒副作用还值得进一步研究。
基金项目：云南省卫生厅青年科研基金资助项目(No.98001)
作者简介：龙明照(1965-)，男(侗族)，贵州省凯里市人，硕士研究生，副主任医师。获省级科技进步三等奖1项，发表论文30余篇。
参考文献：
[1]苏敬东，李士骏，赵浩亮.咖啡因预防家兔胆囊结石形成的研究.中华实验外科杂志，1994，11(1)：27-28.
[2]Juniper K,Burson E N.Biliary tract studies Ⅱ.The significance of biliary crystals.Gastroenterology,1957,32:175-181.
, http://www.100md.com
[3]Kern F Jr.Effects of dietary cholesterol on cholesterol and bile acid homeostasis in patients with cholesterol gallstones.J Clin Invest,1994,93:1186-1194.
[4]Thornton J R.A relation between high density lipoprotein cholesterol and bile cholesterol saturation.Br Med J,1981,283:1352-1357.
[5]江苏新医学院编.中药大辞典(下册).第1版.上海：上海科学技术出版社，1986.19-34.
[6]吴金术主编.临床胆石病学.第1版.长沙：湖南科学技术出版社，1998.3-9.
[7]齐清会，吴咸中，陈灼华.利胆、理气中药和针刺日月、期门穴对人Oddi氏括约肌的影响.中西医结合杂志，1984，4(11)：662-665.
(收稿日期：2000-09-03 修回日期：2000-10-13), 百拇医药
单位：云南省红十字会医院中西医结合科，云南 昆明 650021
关键词：胆囊胆固醇结石；脂代谢；卵磷脂；总胆汁酸；粘蛋白；胆腑舒胶囊；中医药
中国中西医结合急救杂志000615 摘要：目的：观察胆腑舒胶囊对家兔实验性胆固醇结石的溶石作用及机制。方法：血清脂代谢指标在全自动生化仪上完成。胆汁中总胆固醇(TC)、总胆汁酸分别用硫磷铁法、磷钼酸比色法测定。胆汁中卵磷脂、粘蛋白分别运用硝化-磷钼酸-氨萘磺酸法、磷钨酸沉淀酚试剂法测定。结果：胆腑舒胶囊可有效地降低血清TC、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及胆汁中胆固醇、粘蛋白浓度，提高胆汁中总胆汁酸、卵磷脂含量。结论：胆腑舒胶囊能较好地溶、排胆囊胆固醇结石，其机制与调节脂质代谢、改善致石性胆汁及纠正胆囊动力学等作用有关。
, 百拇医药
中图分类号：R575.6;R285.5 文献标识码：A
文章编号：1008-9691(2000)06-0350-03
The effect of Danfushu capsule(胆腑舒胶囊) on bile lecithin,total bile acid,mucin and serum lipid metabolism in experimental gallstone rabbits
LONG Ming-zhao,LONG Feng-chang,LIU Yue-xin,et al.
(The Red Cross Hospital of Yunnan Province,Kunming Yunnan 650021)
Abstract:Objective:To observe the stone-lysis effect of Danfushu capsule(胆腑舒胶囊) on cholesterol stone in rabbit model and its mechanism.Methods:The parameters of serum lipid metabolism were detected by full automatic biochemical instrument.The total cholesterol(TC) and total bile acid in bile gall were measured by nemafos method and phosphomolybdic acid colorimetry respectively,and the bile lecithin and mucin were done by nitrification-phosphomolybdic acid-naphthionic acid and phosphotungstic acid precipitation-phenol reagent method respectively.Results:Danfushu capsule could obviously reduce the concentrations of serum total cholesterol(TC),triglycerides(TG),low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C) ,bile cholesterol,and mucin,meanwhile increase the contents of total bile acid and lecithin in bile gall.Conclusions:Danfushu capsule is good at lytic and eliminating effects on cholesterol gallstone.The mechanisms are related to the regulation of lipid metabolism,improvement of pathogenetic bile,and gallbladder.
, 百拇医药
Key words:cholesterol stone;lipid metabolism;lecithin;total bile acid;mucin;Danfushu capsule;traditional Chinese medicine
胆腑舒胶囊具有清热利湿、祛痰消瘀作用，是为治疗湿热内蕴、痰瘀交阻型胆固醇结石而研制的中药复方制剂。为探讨该方的作用机制，我们通过动物实验研究了胆腑舒胶囊对兔胆汁中卵磷脂、总胆汁酸、粘蛋白及血清脂代谢的影响。
1 材料与方法
1.1 动物及分组：成年健康日本杂交大耳白兔40只(昆明医学院实验动物中心提供)，雌雄不拘，体重2.5～2.9 kg。随机取10只作正常组，喂普通颗粒饲料。另30只则用含1.2%高胆固醇的标准饲料饲养[1]，制模80日后又随机分为3组，每组10只。其中模型组继续喂饲同正常组；而治疗组则以胆腑舒胶囊1.60 g*kg-1*d-1灌胃(由金钱草、大黄、青皮、木香、海藻等组成，本课题组自制)；对照组以肝胆结石片1.50 g*kg-1*d-1灌胃(由四川旭华制药有限公司提供)。
, 百拇医药
1.2 标本收集：以上4组饲养、灌胃40日后，于剖杀前禁食24小时。自兔耳静脉取血，空气栓塞法处死后，收集胆汁、胆囊组织并观察成石情况。
1.3 观测指标及检测方法：
1.3.1 胆囊胆汁胆固醇结晶及结石鉴定。结石判断标准：肉眼观察胆汁内有成形粗大颗粒，光镜下观察为致密大团块结晶胆固醇。胆固醇结晶定量参照Juniper标准[2]分为(+)、(++)、(+++)及(++++)4个等级。
1.3.2 血清血脂测定：总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)等脂代谢指标均在全自动生化仪上完成。
1.3.3 胆汁中脂质成分测定：胆固醇采用硫磷铁法测定；卵磷脂用硝化磷钼酸氨萘磺酸法测定；总胆汁酸用磷钼酸比色法测定。
, 百拇医药
1.3.4 胆汁中粘蛋白测定：采用磷钨酸沉淀酚试剂法测定。
1.4 统计学方法：多个样本均数间比较用q检验。
2 结 果
2.1 胆汁胆固醇结晶与结石：正常组胆囊胆汁几乎无胆固醇结晶(0～±)，未见结石；模型组胆固醇结晶为(++++)，7只有结石；治疗组为(0～+)，2只有结石；对照组为(+～++)，4只有结石。
2.2 血清血脂测定：从表1看出，模型组的TC、TG、LDLC值均显著高于正常组。而治疗组能明显降低TC、TG、LDLC值，升高HDLC浓度，且疗效优于对照组。
2.3 胆汁中脂质和粘蛋白：从表2看出，模型组的总胆汁酸、卵磷脂值均较正常组明显降低，而胆固醇、粘蛋白含量则较高。治疗组能升高总胆汁酸、卵磷脂浓度，降低胆固醇、粘蛋白含量，且作用明显优于对照组。
, 百拇医药
2.4 胆囊形态学改变：光镜下，正常组胆囊粘膜上皮细胞呈单层柱状排列，粘膜皱襞完整。模型组胆囊部分被覆腺上皮脱落或增生，粘膜间质水肿、充血、炎细胞浸润。而治疗组、对照组的上述病变较轻。
3 讨 论
本研究通过给予实验性家兔高胆固醇饮食，发现兔血清中TC、TG、LDLC浓度增加，HDLC浓度降低，形成高脂血症，同时，胆汁中的胆固醇浓度也升高。Kern认为高胆固醇血症时，血浆胆固醇可经肝细胞浆膜转运分泌入胆汁而不进入胞浆，使血浆胆固醇快速转运入胆汁[3]。另外，血清LDLC是胆汁中胆固醇的重要来源，其含量升高，可使胆汁中胆固醇更趋饱和。而血清HDLC升高却能抑制肝脏合成胆固醇，减少胆汁中胆固醇水平[4]。所以，本实验认为胆腑舒胶囊能取得较好疗效，其机制之一可能是由于胆腑舒胶囊降低了血清TC、TG、LDLC浓度，升高血清HDLC含量，从而降低胆汁中胆固醇浓度，不致胆汁中胆固醇过饱和，阻止了“致石性胆汁”形成，故治疗组胆囊中胆固醇结晶最少，此疗效优于对照组。中医认为本方中海藻有软坚化痰之功；现代药理研究也认为海藻中藻胶酸能降低实验性高脂血症家兔的胆固醇水平[5]。所以本方有一定降脂效果。
, 百拇医药
胆囊胆汁中游离非脂化状态的胆固醇浓度，通常取决于胆汁中胆汁酸池大小及分泌率。当胆汁酸浓度超过临界微胶粒浓度时，胆汁酸和卵磷脂易形成混合微胶粒，并将胆固醇包在其疏水的内表面溶解[6]。以致胆固醇不能析出结晶，也有助于胆固醇结石的溶解。所以，当胆汁中胆汁酸和卵磷脂的含量低，而胆固醇含量高时，易形成胆固醇结晶。本实验发现，胆腑舒胶囊可明显提高胆汁中胆汁酸、卵磷脂浓度，降低胆固醇浓度，因此，其胆囊胆汁中少见胆固醇结晶、结石。此也是胆腑舒胶囊能较好溶解胆囊结石的重要机制。
粘蛋白可作为胆石基质网络胆固醇结晶，或作为成核因子促使胆石形成。其浓度过高，还会增加胆汁粘度，使胆汁流动缓慢，易析出胆固醇结晶。本研究通过观察各组胆囊形态变化，发现模型组胆囊有明显的炎症、水肿，其炎症刺激了胆囊粘蛋白分泌，故胆汁中粘蛋白浓度高。另外，其水肿胆囊还使胆汁排泄不畅。应用胆腑舒胶囊治疗后，发现胆汁中粘蛋白含量、胆汁粘度明显降低，胆囊水肿减轻，改善了胆囊动力学环境。现代药理研究认为，胆腑舒胶囊中金钱草、大黄、青皮、木香配伍，可松弛胆管括约肌、降低胆内压，有引流胆汁，排出结石，控制感染等作用[7]。所以，本方排石效果较佳。
, 百拇医药
表1 各组血清中血脂含量(
±s)mmol/L 组别动物数(只)
TC
TG
HDLC
LDLC
正常组
10
1.91±0.38
2.07±1.05
0.77±0.24
, 百拇医药
0.73±0.28
模型组
10
8.49±1.36**
2.74±0.25**
0.63±0.34**
4.92±0.69**
对照组
10
3.52±1.32△△
, 百拇医药
1.89±1.66△△
0.82±0.28△△
2.22±0.58△△
治疗组
10
1.62±1.20△△＃＃
1.09±0.42△△＃＃
0.92±0.55△△＃＃
0.82±0.30△△＃＃
注：与正常组比较：*P<0.01；与模型组比较：△△P<0.01；与对照组比较：＃＃P<0.01表2 各组胆汁中卵磷脂、胆汁酸、胆固醇及粘蛋白的含量(
±s) 组别, http://www.100md.com
动物数(只)
总胆汁酸(mmol/L)
卵磷脂(mmol/L)
胆固醇(mmol/L)
粘蛋白(mg/L)
正常组
10
0.82±0.02
0.74±0.02
0.21±0.02
201.30±7.97
, 百拇医药
模型组
10
0.63±0.04
0.56±0.02
0.36±0.02
263.89±5.04
对照组
10
0.75±0.02△△
0.65±0.02△△
, 百拇医药
0.27±0.02△△
236.30±3.53△△
治疗组
10
0.79±0.02△△＃
0.68±0.01△△＃
0.24±0.01△△＃
221.00±6.29△△＃
注：与正常组比较：*P<0.01；与模型组比较：△△P<0.01；与对照组比较：＃P<0.05
, 百拇医药
尽管胆腑舒胶囊在调节脂质代谢、改善致石性胆汁及纠正胆囊动力学等方面的作用是肯定的，但其毒副作用还值得进一步研究。
基金项目：云南省卫生厅青年科研基金资助项目(No.98001)
作者简介：龙明照(1965-)，男(侗族)，贵州省凯里市人，硕士研究生，副主任医师。获省级科技进步三等奖1项，发表论文30余篇。
参考文献：
[1]苏敬东，李士骏，赵浩亮.咖啡因预防家兔胆囊结石形成的研究.中华实验外科杂志，1994，11(1)：27-28.
[2]Juniper K,Burson E N.Biliary tract studies Ⅱ.The significance of biliary crystals.Gastroenterology,1957,32:175-181.
, http://www.100md.com
[3]Kern F Jr.Effects of dietary cholesterol on cholesterol and bile acid homeostasis in patients with cholesterol gallstones.J Clin Invest,1994,93:1186-1194.
[4]Thornton J R.A relation between high density lipoprotein cholesterol and bile cholesterol saturation.Br Med J,1981,283:1352-1357.
[5]江苏新医学院编.中药大辞典(下册).第1版.上海：上海科学技术出版社，1986.19-34.
[6]吴金术主编.临床胆石病学.第1版.长沙：湖南科学技术出版社，1998.3-9.
[7]齐清会，吴咸中，陈灼华.利胆、理气中药和针刺日月、期门穴对人Oddi氏括约肌的影响.中西医结合杂志，1984，4(11)：662-665.
(收稿日期：2000-09-03 修回日期：2000-10-13), 百拇医药