益生菌和益生元对小鼠红细胞免疫功能的影响
王惠艳 刘伯阳 姚淑娟
摘 要：给小鼠灌胃青春双歧杆菌活菌液1×108CFU/ml、0.5ml低聚木糖80mg/kg和葡萄糖酸钙100mg/kg，每天一次，连续7天，对小鼠眼球后静脉丛红细胞C3b受体花环(E-C3bR)，红细胞免疫复合物花环(E-ICR)和肿瘤红细胞花环(T-RR)的形成率有增强作用。而青春双歧杆菌活菌液1×108CFU/ml加低聚木糖(40mg/kg)和葡萄糖酸钙(50 mg/kg)每天一次灌胃，连续7天，E-C3b和T-RR的形成率均有显著增强作用，P<0.01或0.05。
关键词：红细胞 E-C3bR;E-ICR T-RR. 益生菌 益生元 青春双歧杆菌
自从siegl提出红细胞免疫系统以来，对红细胞膜表面受体、红细胞免疫分 子、红细胞与白细胞、T淋巴细胞、NK细胞之间的关系以及红细胞膜受体变化与各种疾病的 关系研究越来越深入。近年来研究表明，双歧杆菌活菌制剂(益生菌)有免疫增强作用，可明 显刺激腹腔巨噬细胞提高吞噬能力[1]，红细胞膜上有C3b受体和免疫复合物受 体。通过双重粘附作用与白细胞协同，增强其清除循环中免疫复合物(CIC)的功能[2 ]；通过红细胞膜上淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3)与CD2细胞相互作用，导致γ-干扰 素，IL-2等细胞因子的分泌，增强NK细胞的活性[3]。最近报道寡糖及其衍生物等 具有益生元(促双歧因子)的生物学效应，增强双歧杆菌的生理作用[4]，本文通过 红细胞免疫粘附的方法，探讨益生菌、益生元；益生菌加益生元对小鼠红细胞免疫作用的影 响。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物 昆明种小鼠，体重18g～20g，雌雄各半，随机分组。
1.2 实验菌株 青春双歧杆菌(Bifidobacterum adolescentis)。本室从健 康成人粪便中分离，驯化，定为BaD9601。
1.3 益生元 低聚木糖(齐齐哈尔木糖实业有限公司提供)，葡萄糖酸钙(齐 齐哈尔第二制药厂提供)。
1.4 试剂 酵母多糖，致敏酵母多糖，艾氏腹水癌肿瘤细胞冻干试剂(上海 二军大长海医院免疫室提供)。
1.5 丽珠肠乐 丽珠中药厂生产，市售，批号9806。
1.6 仪器 厌氧培养罐(沈阳市第五人民医院 825-A型)，菌落计数器(无锡 金城仪器厂)，欧林帕氏显微镜(日本产)。
, 百拇医药
1.7 BaD9601和单方益生元对小鼠红细胞免疫粘附试验 取实验动物40只， 分五组，每组8只。第一组BaD9601、活菌数为1×108CFU/ml；第二组低聚木糖，80mg/kg ；第三组为葡萄糖酸钙100mg/kg；第四组：丽珠肠乐为1×108CFU/ml(阳性对照)；第五组 ：生理盐水(正常对照)。灌胃给药，剂量0.5ml，每天1次共7天，于第8天从小鼠眼球后静 脉丛取血，肝素抗凝，分别测小鼠E-C3bR、E-ICR、T-RR形成率。测定方法按文献[ 5，6]将红细胞应用液配成1.25×107/ml；酵母多糖、致敏酵母多糖各配成1×10 8/ml应用液，肿瘤细胞配成1×107/ml。应用液，用红细胞应用液分别与酵母多糖、致敏 酵母多糖、肿瘤细胞应用液等体积混合，置37℃水浴30min，加0.25%戊二醛固定，水平 涂片。吹干后瑞氏染色，结果红细胞呈粉红色，酵母菌呈兰色，肿瘤细胞呈现紫红色。在油 镜下数200个红细胞，以结合2个以上酵母菌结合1个以上肿瘤细胞的为阳性花环，计算阳性 花环的百分率。
, 百拇医药
1.8 BaD9601加单方益生元对小鼠红细胞免疫粘附试验 取动物32只，分成 四组，每组8只。第一组：BaD9601加低聚木糖，第二组：BaD9601加葡萄糖酸钙，第三组： 丽珠肠乐，第四组：NS。给药途径、剂量、测定方法同1.7。
1.9 BaD9601加复方益生元对小鼠红细胞的免疫粘附试验 取动物24只，分成三组，每组8只。第一组：1×108CFU/ml 0.5ml加低聚木糖40mg/kg， 再加葡萄糖酸钙50mg/kg；第二组：丽珠肠乐1×108CFU/ml 0.5ml；第三组：等容量NS。给药途径、测定方法同1.7。
2 结 果 见表1、表2、表3
表1 BaD9061和单方益生元小鼠红细胞三种花环形成的百分率(x±SD)
组 别
, 百拇医药
E-C3bR
E-ICR
T-RR
BaD901(Ⅰ)
24.58±5.36
13.98±1.42
13.07±0.98
低聚木糖(Ⅱ)
19.52±2.16
12.75±1.26
12.30±1.45
葡萄糖酸钙(Ⅲ)
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20.27±2.27
12.85±1.32
13.60±3.22
丽珠肠乐(Ⅳ()
25.15±4.5
14.56±3.07
15.21±3.46
NS(Ⅴ)
11.11±1.09
10.88±2.19
9.97±1.77
注：t检验：E-C3bR Ⅱ、Ⅲ组与Ⅴ组比，P<0.01,Ⅱ、Ⅲ组 与Ⅳ组 比，P<0.05 ；E-ICR Ⅱ、Ⅲ与Ⅴ比，P<0.05或0.01；Ⅱ组 与Ⅳ组比，P>0.05； Ⅲ组与Ⅳ组比，P<0.01；T-RR Ⅱ组、 Ⅲ组与Ⅴ组比，P<0.01，Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅳ组比，P>0.05。
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表2 BaD9601加单方益生元小鼠红细胞三种花环形成百分率(x± SD)
组 别
E-C3bR
E-ICR
T-RR
BaD9601+低聚木糖(Ⅰ)
31.70±2.22
15.91±1.99
15.40±1 .05
BaD9601+葡萄糖酸钙(Ⅱ)
31.57±2.48
, 百拇医药
14.81±1.92
15.85±0.62
丽珠肠乐(Ⅲ)
25.15±4.50
14.56±3.07
15.21±3.46
NS(Ⅳ)
11.11±1.09
10.88±2.19
9.97±1.77
注：t检验：E-C3bR E-ICR和T-RR Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅳ组比， P< 0.01；E-C3b和T-RR；Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组比，P>0.05。
, 百拇医药
表3 BaD9601加复方益生元小鼠红细胞三种花环形成百分率(x± SD)
组 别
C3bR
E-ICR
T-RR
BaD9601+低聚木糖(Ⅰ)
31.70±3.82
14.42±0.86
17.31±1.39
丽珠肠乐(Ⅱ)
25.15±14.50
, http://www.100md.com
14.56±3.07
15.21±3.46
NS(Ⅲ)
11.11±1.09
10.88±2.19
9.97±1.73
注：t检验：E-C3bR E-ICR T-RR Ⅰ组与Ⅱ组比，P>0.01；E -C3b R和T-RR；Ⅰ组与Ⅲ组比， P<0.01或0.05； T-RR比单方益生元加益生菌组 P<0.05。
3 讨 论
本文就益生菌BaD9601 1×108CFU/ml 0.5ml加单方益生元低聚木糖80mg/kg，葡萄糖酸 钙100mg/kg，灌胃给药，每天一次，连续7天。三种花环形成百分率与NS组比P <0.01，有 极显著性差异，而与丽珠肠乐比，只有E-C3bR P<0.01，E-ICR和FRR形成 百分率P>0.0 5，差异不显著。益生菌加复方益生元、低聚木糖40mg/kg和葡萄糖酸钙50mg/kg灌胃给药， 每天一次，每次0.5ml，连续7天，与NS组比，三种花环的形成百分率P<0.0 1，有极显著 性差异，与丽珠肠乐组比E-C3bR P<0.01，E-ICR P>0.05 ， T-RR P<0.05。益生菌 加单方益生元与益生菌加复方益生元比，T-RR花环形成百分率P<0.05，差异 显著。而E-C 3bR和E-ICR形成百分率P>0.05，无显著性。提示：单方益生元加益生菌或 复方益生元加 益生菌对三种花环的形成均有促进作用，其机理与合生素的应用有待进一步探讨。
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作者简介：王惠艳(1940～)，女，齐齐哈尔医学院微生物学教研室主任，副教授，从事肠道有益
菌群增效剂的研究。
作者单位：王惠艳 齐齐哈尔医学院微生物学教研室，齐齐哈尔 161042
刘伯阳 齐齐哈尔医学院微生物学教研室，齐齐哈尔 161042
姚淑娟 齐齐哈尔医学院微生物学教研室，齐齐哈尔 161042
参考文献
[1]郭峰，等.红细胞免疫功能的初步研究.中华医学杂志，1982， 62(12)：715.
[2]李绍康，等.红细胞免疫系统.上海免疫学杂志，1982，2(6)：57.
[3]朱大栩.红细胞免疫分子生物学研究.上海免疫学杂志，1991，7(2)：125.
[4]李雪驼，等.寡糖的含义及作用和在改善肠道内环境上的意义(上).中国微生态学杂志，1997，9(5)：48.
[5]罗予，蔡访勤，等.双歧杆菌和乳杆菌对小鼠红细胞免疫功能的影响.中国免疫学杂志，1991(7)增刊.
[6]郭峰，等.瘤苗治疗对红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的影响.中国免疫学杂志，1991，(7)增刊., 百拇医药
摘 要：给小鼠灌胃青春双歧杆菌活菌液1×108CFU/ml、0.5ml低聚木糖80mg/kg和葡萄糖酸钙100mg/kg，每天一次，连续7天，对小鼠眼球后静脉丛红细胞C3b受体花环(E-C3bR)，红细胞免疫复合物花环(E-ICR)和肿瘤红细胞花环(T-RR)的形成率有增强作用。而青春双歧杆菌活菌液1×108CFU/ml加低聚木糖(40mg/kg)和葡萄糖酸钙(50 mg/kg)每天一次灌胃，连续7天，E-C3b和T-RR的形成率均有显著增强作用，P<0.01或0.05。
关键词：红细胞 E-C3bR;E-ICR T-RR. 益生菌 益生元 青春双歧杆菌
自从siegl提出红细胞免疫系统以来，对红细胞膜表面受体、红细胞免疫分 子、红细胞与白细胞、T淋巴细胞、NK细胞之间的关系以及红细胞膜受体变化与各种疾病的 关系研究越来越深入。近年来研究表明，双歧杆菌活菌制剂(益生菌)有免疫增强作用，可明 显刺激腹腔巨噬细胞提高吞噬能力[1]，红细胞膜上有C3b受体和免疫复合物受 体。通过双重粘附作用与白细胞协同，增强其清除循环中免疫复合物(CIC)的功能[2 ]；通过红细胞膜上淋巴细胞功能相关抗原-3(LFA-3)与CD2细胞相互作用，导致γ-干扰 素，IL-2等细胞因子的分泌，增强NK细胞的活性[3]。最近报道寡糖及其衍生物等 具有益生元(促双歧因子)的生物学效应，增强双歧杆菌的生理作用[4]，本文通过 红细胞免疫粘附的方法，探讨益生菌、益生元；益生菌加益生元对小鼠红细胞免疫作用的影 响。
, 百拇医药
1 材料与方法
1.1 实验动物 昆明种小鼠，体重18g～20g，雌雄各半，随机分组。
1.2 实验菌株 青春双歧杆菌(Bifidobacterum adolescentis)。本室从健 康成人粪便中分离，驯化，定为BaD9601。
1.3 益生元 低聚木糖(齐齐哈尔木糖实业有限公司提供)，葡萄糖酸钙(齐 齐哈尔第二制药厂提供)。
1.4 试剂 酵母多糖，致敏酵母多糖，艾氏腹水癌肿瘤细胞冻干试剂(上海 二军大长海医院免疫室提供)。
1.5 丽珠肠乐 丽珠中药厂生产，市售，批号9806。
1.6 仪器 厌氧培养罐(沈阳市第五人民医院 825-A型)，菌落计数器(无锡 金城仪器厂)，欧林帕氏显微镜(日本产)。
, 百拇医药
1.7 BaD9601和单方益生元对小鼠红细胞免疫粘附试验 取实验动物40只， 分五组，每组8只。第一组BaD9601、活菌数为1×108CFU/ml；第二组低聚木糖，80mg/kg ；第三组为葡萄糖酸钙100mg/kg；第四组：丽珠肠乐为1×108CFU/ml(阳性对照)；第五组 ：生理盐水(正常对照)。灌胃给药，剂量0.5ml，每天1次共7天，于第8天从小鼠眼球后静 脉丛取血，肝素抗凝，分别测小鼠E-C3bR、E-ICR、T-RR形成率。测定方法按文献[ 5，6]将红细胞应用液配成1.25×107/ml；酵母多糖、致敏酵母多糖各配成1×10 8/ml应用液，肿瘤细胞配成1×107/ml。应用液，用红细胞应用液分别与酵母多糖、致敏 酵母多糖、肿瘤细胞应用液等体积混合，置37℃水浴30min，加0.25%戊二醛固定，水平 涂片。吹干后瑞氏染色，结果红细胞呈粉红色，酵母菌呈兰色，肿瘤细胞呈现紫红色。在油 镜下数200个红细胞，以结合2个以上酵母菌结合1个以上肿瘤细胞的为阳性花环，计算阳性 花环的百分率。
, 百拇医药
1.8 BaD9601加单方益生元对小鼠红细胞免疫粘附试验 取动物32只，分成 四组，每组8只。第一组：BaD9601加低聚木糖，第二组：BaD9601加葡萄糖酸钙，第三组： 丽珠肠乐，第四组：NS。给药途径、剂量、测定方法同1.7。
1.9 BaD9601加复方益生元对小鼠红细胞的免疫粘附试验 取动物24只，分成三组，每组8只。第一组：1×108CFU/ml 0.5ml加低聚木糖40mg/kg， 再加葡萄糖酸钙50mg/kg；第二组：丽珠肠乐1×108CFU/ml 0.5ml；第三组：等容量NS。给药途径、测定方法同1.7。
2 结 果 见表1、表2、表3
表1 BaD9061和单方益生元小鼠红细胞三种花环形成的百分率(x±SD)
组 别
, 百拇医药
E-C3bR
E-ICR
T-RR
BaD901(Ⅰ)
24.58±5.36
13.98±1.42
13.07±0.98
低聚木糖(Ⅱ)
19.52±2.16
12.75±1.26
12.30±1.45
葡萄糖酸钙(Ⅲ)
, http://www.100md.com
20.27±2.27
12.85±1.32
13.60±3.22
丽珠肠乐(Ⅳ()
25.15±4.5
14.56±3.07
15.21±3.46
NS(Ⅴ)
11.11±1.09
10.88±2.19
9.97±1.77
注：t检验：E-C3bR Ⅱ、Ⅲ组与Ⅴ组比，P<0.01,Ⅱ、Ⅲ组 与Ⅳ组 比，P<0.05 ；E-ICR Ⅱ、Ⅲ与Ⅴ比，P<0.05或0.01；Ⅱ组 与Ⅳ组比，P>0.05； Ⅲ组与Ⅳ组比，P<0.01；T-RR Ⅱ组、 Ⅲ组与Ⅴ组比，P<0.01，Ⅱ组、Ⅲ组与Ⅳ组比，P>0.05。
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表2 BaD9601加单方益生元小鼠红细胞三种花环形成百分率(x± SD)
组 别
E-C3bR
E-ICR
T-RR
BaD9601+低聚木糖(Ⅰ)
31.70±2.22
15.91±1.99
15.40±1 .05
BaD9601+葡萄糖酸钙(Ⅱ)
31.57±2.48
, 百拇医药
14.81±1.92
15.85±0.62
丽珠肠乐(Ⅲ)
25.15±4.50
14.56±3.07
15.21±3.46
NS(Ⅳ)
11.11±1.09
10.88±2.19
9.97±1.77
注：t检验：E-C3bR E-ICR和T-RR Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅳ组比， P< 0.01；E-C3b和T-RR；Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组比，P>0.05。
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表3 BaD9601加复方益生元小鼠红细胞三种花环形成百分率(x± SD)
组 别
C3bR
E-ICR
T-RR
BaD9601+低聚木糖(Ⅰ)
31.70±3.82
14.42±0.86
17.31±1.39
丽珠肠乐(Ⅱ)
25.15±14.50
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14.56±3.07
15.21±3.46
NS(Ⅲ)
11.11±1.09
10.88±2.19
9.97±1.73
注：t检验：E-C3bR E-ICR T-RR Ⅰ组与Ⅱ组比，P>0.01；E -C3b R和T-RR；Ⅰ组与Ⅲ组比， P<0.01或0.05； T-RR比单方益生元加益生菌组 P<0.05。
3 讨 论
本文就益生菌BaD9601 1×108CFU/ml 0.5ml加单方益生元低聚木糖80mg/kg，葡萄糖酸 钙100mg/kg，灌胃给药，每天一次，连续7天。三种花环形成百分率与NS组比P <0.01，有 极显著性差异，而与丽珠肠乐比，只有E-C3bR P<0.01，E-ICR和FRR形成 百分率P>0.0 5，差异不显著。益生菌加复方益生元、低聚木糖40mg/kg和葡萄糖酸钙50mg/kg灌胃给药， 每天一次，每次0.5ml，连续7天，与NS组比，三种花环的形成百分率P<0.0 1，有极显著 性差异，与丽珠肠乐组比E-C3bR P<0.01，E-ICR P>0.05 ， T-RR P<0.05。益生菌 加单方益生元与益生菌加复方益生元比，T-RR花环形成百分率P<0.05，差异 显著。而E-C 3bR和E-ICR形成百分率P>0.05，无显著性。提示：单方益生元加益生菌或 复方益生元加 益生菌对三种花环的形成均有促进作用，其机理与合生素的应用有待进一步探讨。
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作者简介：王惠艳(1940～)，女，齐齐哈尔医学院微生物学教研室主任，副教授，从事肠道有益
菌群增效剂的研究。
作者单位：王惠艳 齐齐哈尔医学院微生物学教研室，齐齐哈尔 161042
刘伯阳 齐齐哈尔医学院微生物学教研室，齐齐哈尔 161042
姚淑娟 齐齐哈尔医学院微生物学教研室，齐齐哈尔 161042
参考文献
[1]郭峰，等.红细胞免疫功能的初步研究.中华医学杂志，1982， 62(12)：715.
[2]李绍康，等.红细胞免疫系统.上海免疫学杂志，1982，2(6)：57.
[3]朱大栩.红细胞免疫分子生物学研究.上海免疫学杂志，1991，7(2)：125.
[4]李雪驼，等.寡糖的含义及作用和在改善肠道内环境上的意义(上).中国微生态学杂志，1997，9(5)：48.
[5]罗予，蔡访勤，等.双歧杆菌和乳杆菌对小鼠红细胞免疫功能的影响.中国免疫学杂志，1991(7)增刊.
[6]郭峰，等.瘤苗治疗对红细胞免疫粘附肿瘤细胞能力的影响.中国免疫学杂志，1991，(7)增刊., 百拇医药