霉酚酸酯与雷帕霉素合用预防及逆转大鼠心脏移植排斥反应
彭钧铮 张元芳 丁强 齐世杰 徐大生 陈惠方
摘 要 目的 评价霉酚酸酯(MMF)与雷帕霉素(RAPA)合用预防及逆转大鼠心脏移植后排斥反应的作用。方法 将实验动物随机分为4组：(1)对照组；(2)单用MMF组；(3)单用RAPA组；(4)MMF与RAPA合用组。结果 单用MMF和单用RAPA组与对照组比较均显著延长移植心脏存活时间，MMF与RAPA合用组与对照组比较非常显著地延长移植心脏存活时间，并且心脏存活时间明显长于同剂量两药的单用组。结论 MMF与RAPA具有很强的协同效应，能够预防与逆转大鼠心脏移植排斥反应。
关键词：心脏移植 霉酚酸 雷帕霉素
霉酚酸酯与雷帕霉素是两种新型的免疫抑制剂，为探讨两药合用的免疫抑制作用，我们对两药亚治疗剂量合用的免疫抑制效应进行了初步研究，报道如下。
材料与方法
, http://www.100md.com
一、实验动物：9～11周的雄性BrownNorway大鼠、Lew大鼠分别作为供、受体，均购于美国HarlanSprague公司。
二、实验设计：依药物应用的目的将实验分为两大类：预防心脏移植后排斥反应类和逆转心脏移植后排斥反应类。每类均分为4组，第1组为对照组，不用任何免疫抑制剂；第2组为MMF不同剂量单用组；第3组为RAPA不同剂量单用组；第4组为MMF与RAPA不同剂量合用组。每组动物数均为6只，预防排斥反应类4组均于术后第1d至30d给药，逆转排斥反应类4组均于术后第4d至34d给药。
三、免疫抑制剂的应用：RAPA由美国Wyeth-Ayerst研究所资助，稀释于质量浓度为70%的聚乙烯乙二醇400.N.N-二甲缩醛以及10%的吐温80的容量中，MMF由加拿大RocheBioscience公司惠赠，将粉剂的MMF悬浮于含有Carbopal凝胶的甲羧基纤维素中配置成20g/L，两药术后均连续应用30d，灌胃给药，术后观察60d。
, 百拇医药
四、心脏移植手术：(1)供心摘取：BrownNorway大鼠用戊巴比妥40mg/kg腹腔注入麻醉，需要时辅助应用水合氯醛160mg/kg，胸部“V”形切口，显露心脏置于4℃冰水中，在结扎下腔静脉前用肝素化4℃生理盐水先灌注下腔静脉，5-0丝线分别结扎上下腔静脉及肺静脉，游离升主动脉及肺动脉干切断，供心用4℃林格氏液灌注后保存不超过30min。(2)异位心脏移植术：受体LEW大鼠正中切开腹腔，显露腹主动脉及下腔静脉，将供心升主动脉与受体腹主动脉、供心肺动脉与受体下腔静脉先后行端侧吻合，关腹。(3)心脏移植后每天腹部扪诊心脏搏动，心跳停止前1d作为移植心最后存活时间，移植心停跳时已发生不可逆的排斥反应，并经剖腹后心脏标本病理证实。大鼠心脏移植术后3d内停止搏动，作为手术失败(<3%)标准，不计入统计分析。
五、统计分析：大鼠心脏存活期用均数±标准差表示，组间比较存活率应用Gehan's存活率检验，两药间相互作用判断应用联合指数(CI)，依据Chou's理论：CI值<0.9提示两药具有协同效应，CI0.9～1.1提示累加效应，CI>1.1提示两药拮抗，应用Calcusyn生物软件处理得CI值。
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结 果
一、MMF与RAPA合用预防大鼠心脏移植排斥反应(见表1)。
表1 各组预防大鼠心脏移植后排斥反应的作用比较
组别
免疫抑制剂剂量
(mg.kg-1.d-1)
移植心存活时间
(d)
CI值
第1组
0
, 百拇医药
6.5±0.6
-
第2组
10
12.5±2.6*
-
20
19.3±9.0*
-
第3组
0.2
19.2±2.0*
, http://www.100md.com
-
0.4
30.0±7.3*
-
第4组
10+0.2
52.7±5.7*
0.189
20+0.2
57.7±5.7*
0.084
注：*与对照组比较，P<0.01
, 百拇医药
二、MMF与RAPA合用逆转大鼠心脏移植排斥反应(见表2)
表2 各组逆转大鼠心脏移植后急性排斥
反应的作用比较
组别
免疫抑制剂剂量
(mg.kg-1.d-1)
移植心存活时间
(d)
CI值
第1组
0
, http://www.100md.com
6.5±0.6
-
第2组
10
10.8±0.8*
-
20
24.3±6.2*
-
第3组
0.2
11.7±2.4*
, http://www.100md.com
-
0.4
27.2±8.5*
-
第4组
10+0.2
35.5±16.0*
0.794
20+0.2
57.2±4.7*
0.310
注：*与对照组比较，P<0.01
, 百拇医药
讨 论
动物实验研究及初步的临床应用表明MMF具有良好的抗排斥反应效果，但同时有诱发白细胞减少，上消化道功能障碍以及巨细胞病毒感染的副作用[1]。RAPA具有延长不同种类动物移植器官存活的作用，但在大动物特别是犬的器官移植中发现：有发热、厌食、呕吐、严重体重减轻，胃溃疡，血管炎等毒性反应[2]。本研究选择亚治疗剂量的MMF与RAPA合用以期避免两者的不良反应，同时获得良好的免疫抑制效果。结果表明：两药合用在预防及逆转大鼠心脏移植后急性排斥反应中具有良好的协同作用，两药合用预防及逆转移植心脏急性排斥反应的效果优于两药同剂量单用组，亚治疗剂量MMF与RAPA合用，在预防移植心脏急性排斥反应中与大剂量RAPA具有相同效果，MMF、RAPA两者不同的作用机制可解释其协同效应，细胞激活依赖于嘌呤的重新合成，MMF通过抑制次黄嘌呤核苷—磷酸脱氢酶从而阻断嘌呤的再合成，达到选择性阻断T.B细胞增殖，抑制抗体形成及毒性T细胞的产生，但其不影响细胞因子的产生[3]。RAPA主要抑制细胞周期中晚期细胞的增殖，破坏T细胞对增殖促进作用的淋巴因子反应，也具有在G0-G1期调节一些细胞因子稳定性的作用，MMF与RAPA合用在预防及逆转大鼠心脏移植急性排斥反应中的良好协同作用为临床应用展现良好的前景。
, http://www.100md.com
作者单位：彭钧铮(200040 上海医科大学附属华山医院泌尿科)
张元芳(200040 上海医科大学附属华山医院泌尿科)
丁强(200040 上海医科大学附属华山医院泌尿科)
齐世杰(加拿大蒙特利尔大学圣母玛莉亚医院实验外科器官移植中心)
徐大生(加拿大蒙特利尔大学圣母玛莉亚医院实验外科器官移植中心)
陈惠方(加拿大蒙特利尔大学圣母玛莉亚医院实验外科器官移植中心)
参考文献
[1]Pirsch JD, Sollinger HW. Mycophenolate mofetil-clinical and experimental experience. Therapeutic Drug Mornitoring, 1996, 18:357-361.
, 百拇医药
[2]Ochiai T, Gunji Y, Nagate M, et al. Effects of rapamycin in experimental organ allografting. Transplantation, 1993,56:15-19.
[3]Laskow DA, Deierhoi MH, Hudson SH, et al. The incidence of subsequent acute rejection following the treatment of refractory renal allograft rejection with mycophenolate mofetil (RS-61443). Transplantation, 1994, 57:640-643., 百拇医药
摘 要 目的 评价霉酚酸酯(MMF)与雷帕霉素(RAPA)合用预防及逆转大鼠心脏移植后排斥反应的作用。方法 将实验动物随机分为4组：(1)对照组；(2)单用MMF组；(3)单用RAPA组；(4)MMF与RAPA合用组。结果 单用MMF和单用RAPA组与对照组比较均显著延长移植心脏存活时间，MMF与RAPA合用组与对照组比较非常显著地延长移植心脏存活时间，并且心脏存活时间明显长于同剂量两药的单用组。结论 MMF与RAPA具有很强的协同效应，能够预防与逆转大鼠心脏移植排斥反应。
关键词：心脏移植 霉酚酸 雷帕霉素
霉酚酸酯与雷帕霉素是两种新型的免疫抑制剂，为探讨两药合用的免疫抑制作用，我们对两药亚治疗剂量合用的免疫抑制效应进行了初步研究，报道如下。
材料与方法
, http://www.100md.com
一、实验动物：9～11周的雄性BrownNorway大鼠、Lew大鼠分别作为供、受体，均购于美国HarlanSprague公司。
二、实验设计：依药物应用的目的将实验分为两大类：预防心脏移植后排斥反应类和逆转心脏移植后排斥反应类。每类均分为4组，第1组为对照组，不用任何免疫抑制剂；第2组为MMF不同剂量单用组；第3组为RAPA不同剂量单用组；第4组为MMF与RAPA不同剂量合用组。每组动物数均为6只，预防排斥反应类4组均于术后第1d至30d给药，逆转排斥反应类4组均于术后第4d至34d给药。
三、免疫抑制剂的应用：RAPA由美国Wyeth-Ayerst研究所资助，稀释于质量浓度为70%的聚乙烯乙二醇400.N.N-二甲缩醛以及10%的吐温80的容量中，MMF由加拿大RocheBioscience公司惠赠，将粉剂的MMF悬浮于含有Carbopal凝胶的甲羧基纤维素中配置成20g/L，两药术后均连续应用30d，灌胃给药，术后观察60d。
, 百拇医药
四、心脏移植手术：(1)供心摘取：BrownNorway大鼠用戊巴比妥40mg/kg腹腔注入麻醉，需要时辅助应用水合氯醛160mg/kg，胸部“V”形切口，显露心脏置于4℃冰水中，在结扎下腔静脉前用肝素化4℃生理盐水先灌注下腔静脉，5-0丝线分别结扎上下腔静脉及肺静脉，游离升主动脉及肺动脉干切断，供心用4℃林格氏液灌注后保存不超过30min。(2)异位心脏移植术：受体LEW大鼠正中切开腹腔，显露腹主动脉及下腔静脉，将供心升主动脉与受体腹主动脉、供心肺动脉与受体下腔静脉先后行端侧吻合，关腹。(3)心脏移植后每天腹部扪诊心脏搏动，心跳停止前1d作为移植心最后存活时间，移植心停跳时已发生不可逆的排斥反应，并经剖腹后心脏标本病理证实。大鼠心脏移植术后3d内停止搏动，作为手术失败(<3%)标准，不计入统计分析。
五、统计分析：大鼠心脏存活期用均数±标准差表示，组间比较存活率应用Gehan's存活率检验，两药间相互作用判断应用联合指数(CI)，依据Chou's理论：CI值<0.9提示两药具有协同效应，CI0.9～1.1提示累加效应，CI>1.1提示两药拮抗，应用Calcusyn生物软件处理得CI值。
, http://www.100md.com
结 果
一、MMF与RAPA合用预防大鼠心脏移植排斥反应(见表1)。
表1 各组预防大鼠心脏移植后排斥反应的作用比较
组别
免疫抑制剂剂量
(mg.kg-1.d-1)
移植心存活时间
(d)
CI值
第1组
0
, 百拇医药
6.5±0.6
-
第2组
10
12.5±2.6*
-
20
19.3±9.0*
-
第3组
0.2
19.2±2.0*
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-
0.4
30.0±7.3*
-
第4组
10+0.2
52.7±5.7*
0.189
20+0.2
57.7±5.7*
0.084
注：*与对照组比较，P<0.01
, 百拇医药
二、MMF与RAPA合用逆转大鼠心脏移植排斥反应(见表2)
表2 各组逆转大鼠心脏移植后急性排斥
反应的作用比较
组别
免疫抑制剂剂量
(mg.kg-1.d-1)
移植心存活时间
(d)
CI值
第1组
0
, http://www.100md.com
6.5±0.6
-
第2组
10
10.8±0.8*
-
20
24.3±6.2*
-
第3组
0.2
11.7±2.4*
, http://www.100md.com
-
0.4
27.2±8.5*
-
第4组
10+0.2
35.5±16.0*
0.794
20+0.2
57.2±4.7*
0.310
注：*与对照组比较，P<0.01
, 百拇医药
讨 论
动物实验研究及初步的临床应用表明MMF具有良好的抗排斥反应效果，但同时有诱发白细胞减少，上消化道功能障碍以及巨细胞病毒感染的副作用[1]。RAPA具有延长不同种类动物移植器官存活的作用，但在大动物特别是犬的器官移植中发现：有发热、厌食、呕吐、严重体重减轻，胃溃疡，血管炎等毒性反应[2]。本研究选择亚治疗剂量的MMF与RAPA合用以期避免两者的不良反应，同时获得良好的免疫抑制效果。结果表明：两药合用在预防及逆转大鼠心脏移植后急性排斥反应中具有良好的协同作用，两药合用预防及逆转移植心脏急性排斥反应的效果优于两药同剂量单用组，亚治疗剂量MMF与RAPA合用，在预防移植心脏急性排斥反应中与大剂量RAPA具有相同效果，MMF、RAPA两者不同的作用机制可解释其协同效应，细胞激活依赖于嘌呤的重新合成，MMF通过抑制次黄嘌呤核苷—磷酸脱氢酶从而阻断嘌呤的再合成，达到选择性阻断T.B细胞增殖，抑制抗体形成及毒性T细胞的产生，但其不影响细胞因子的产生[3]。RAPA主要抑制细胞周期中晚期细胞的增殖，破坏T细胞对增殖促进作用的淋巴因子反应，也具有在G0-G1期调节一些细胞因子稳定性的作用，MMF与RAPA合用在预防及逆转大鼠心脏移植急性排斥反应中的良好协同作用为临床应用展现良好的前景。
, http://www.100md.com
作者单位：彭钧铮(200040 上海医科大学附属华山医院泌尿科)
张元芳(200040 上海医科大学附属华山医院泌尿科)
丁强(200040 上海医科大学附属华山医院泌尿科)
齐世杰(加拿大蒙特利尔大学圣母玛莉亚医院实验外科器官移植中心)
徐大生(加拿大蒙特利尔大学圣母玛莉亚医院实验外科器官移植中心)
陈惠方(加拿大蒙特利尔大学圣母玛莉亚医院实验外科器官移植中心)
参考文献
[1]Pirsch JD, Sollinger HW. Mycophenolate mofetil-clinical and experimental experience. Therapeutic Drug Mornitoring, 1996, 18:357-361.
, 百拇医药
[2]Ochiai T, Gunji Y, Nagate M, et al. Effects of rapamycin in experimental organ allografting. Transplantation, 1993,56:15-19.
[3]Laskow DA, Deierhoi MH, Hudson SH, et al. The incidence of subsequent acute rejection following the treatment of refractory renal allograft rejection with mycophenolate mofetil (RS-61443). Transplantation, 1994, 57:640-643., 百拇医药