短期应用地塞米松造成的家兔血液纤溶功能紊乱及其意义
作者：尹良军
单位：重庆第三军医大学大坪医院骨科400042
关键词：地塞米松；纤维蛋白溶解；功能紊乱；兔
中国现代医学杂志000715 目的：探讨短期应用地塞米松造成的家兔血液纤溶功能紊乱及其意义。 方法：健康雄性家兔36只，随机分为实验组(第1，2，7，8天注射地塞米松磷酸钠10mg/kg/d )及对照组(注射生理盐水)。在实验前及第15，30，60天，观察两组家兔血小板数量、血 清 脂质、血浆血栓素、组织纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制物的变化。结果：实验前两 组的各项检测指标均无显著差异。实验第15天，血清甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、血浆组 织纤溶酶原激活物(tPA)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性明显高于对照组，血小板数量、 血浆TXB2含量明显低于对照组，血浆tPA/PAI比值保持正常。实验第30天，血清TG、TC、 血浆PAI活性仍然保持高水平，血浆TXB2含量、tPA活性、tPA/PAI比值明显低于对照组， 血小板数量恢复正常。实验第60天，只有血清TC仍然保持高水平，血浆TXB2含量、tPA活 性、tPA/PAI比值显著低于对照组，其余指标在正常范围。结论：地塞米松冲击应用可造成 家兔血液长期(>60d)处于高凝低纤溶状态，从而可能诱发某些缺血性疾病。
, http://www.100md.com
分类号 R969.3
SIGNIFICANCE AND MALFUNCTION OF RABBITS FIBRINOLYSIS RESULTED
FROM SHORT-TERM APPLICATION OF DEXAMETHASONE (DEX)
Yun Liangjun
(Department of Orthopaedics of Dapin Hospital, the Third Military Medical Univers ity, Chongqing 400042)
[Abstract] Objective: To investigate the malfunction of fib rinolysis that was re sulted from short-term application of dexamethasone (DEX). Methods: 36 male rabb its were divided into 2 groups in addition to control group (injected with salin e) and DEX group (injected with dexamethasone 10mg*kg-1*d-1 in the 1st, 2nd,7t h and 8th day of the study). Patlet quantity (PLT), serum totle cholesterol (TC) , triglyceride (TG), plasma thromboxane (TX) B2 concentrations, tissue plasminog en activator (tPA) and plasminogen activator inhibitor (PAI) activity were measu red in stages. Results: In the 15th day of the study, serum TG, TC concentration s, plasma tPA, PAI activity increased, PLT and plasma TXB2 concentration decreas ed significantly in DEX group as compared with those of control group. But the r atio of TXB2/PLT was normal. In the 30th day, serum TG, TC concentrations and pl asma PAI activity kept high level, plasma TXB2 concentration, tPA activity and r atio of tPA/PAI in plasma were lower in DEX group than in control group. PLT was normal. In the 60th day, only serum TC concentration also kept high level, plas ma TXB2 concentration, tPA activity and the ratio of tPA/PAI in plasma were lowe r in DEX group. Conclusions: A short-term application of decamet hasone in rabbit s changed their blood into a long-term hypercoagulability and hypofibrinolysis, which might be result in some kinds of ischemic disease.
, 百拇医药
Key words: Dexamethasone; Fibrinolysis; Malfunction; Rabbits
本文检测并分析地塞米松 冲击应用造成的家兔血液性质的阶段性变化，为完善糖皮质激素的临床应用，揭示某些疾病 的发病机理提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 动物分组与模型制作
健康家兔36只，购自大坪医院实验动物中心，体重(2.6±0.2)kg，均为雄性，随机分为实验 组 (AG,n=20)及对照组(CG，n=16)。第1，2，7，8天，AG组皮下注射地塞米松10mg/kg/d，CG 组皮下注射等体积生理盐水。两组家兔在大坪医院实验动物中心同等条件下饲养，进行平行 实验。
1.2 观察项目
, 百拇医药
实验开始前及开始后的15，30，60天上午从家兔耳中央动脉采血，供实验检测。血小板测定 ：用日本Sysmex公司的K-4500型全自动血细胞计数仪进行检测。血清甘油三脂采用酶法测定，血清总胆固醇采用直接显色法 测定，用美国Beckman生产 的CX7型全自动生化分析仪及其配套试剂进行检测。使用福建太阳生物技术公司提供的试剂盒，采用发色底物法 ，在DG3022型酶联免疫仪450nm波长处读光密度值，分别检测血浆中组织纤溶酶原激活物(t PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的活性。采用北京东亚免疫技术研究所生产的试剂盒，用放免自 动计数仪进行非平衡法放射免疫测定，检测血浆 中TXA2的稳定代谢产物TXB2的含量。
1.3 统计学处理
全部实验数据以均值±标准差(
±s)表示，同一指标采用单因素方差分析，不 同指标间采用线性相关分析。
, 百拇医药
2 结果
2.1 糖皮质激素冲击应用对血小板的影响
实验前各组无明显差异。实验组血小板数量仅在实验后第15天明显下降，(P<0.01)， 以 后在各时段均正常。血栓素B2在实验后第15天明显下降，(P<0.01)，但是TXB/PLT 比 值正常。TXB2含量及TXB2/PLT比值在实验后第30天降至最低点，约为对照组的1/10 ；至第60天两指标均上升，但是仍明显低于对照组(P<0.01)。
2.2 对血脂的影响
实验前各组间无明显差异；实验后第15，30天实验组甘油三脂、总胆固醇均显著高于对照组 ( P<0.01)；第60天实验组甘油三脂与对照组无显著差异(P>0.05)，而总胆固 醇显著高于对照组(P<0.01)。
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2.3 血浆tPA,PAI活性的变化
实验前各组间无明显差异，实验后第15天实验组tPA和PAI活性均显著高于对照组(P<0.01)，但是tPA/PAI比值与对照组无显著差异；第30天实验组tPA活性显著低于对 照组，而PAI活性显著高于对照组，故tPA/PAI比值显著低于对照组(P<0.01)；第60天实验组tPA活性显著低于对照组，而PAI活性与对照组无显著差异(P>0.05)，tPA/PAI比值仍然显著低于对照组(P<0.01)。
2.4 相关性分析
PAI与TG呈显著正相关(r=0.736,P<0.01)。tPA/PAI与TG、CHOL、TXB2无显著相 关(r=0.006～0.539,P>0.01)。
3 讨论
, http://www.100md.com 成年Wistar鼠连续腹腔内注射地塞米松，5d后心脏、脑和肝脏PAI和t-PA抗原水平就发生不 同 的改变[1]。但是对于糖皮质激素对血液纤溶功能的长期影响尚不清楚。本实验观 察 到家兔短期大剂量应用地塞米松后，以tPA和PAI为标志的血液纤溶功能出现长期紊乱。家兔 用药后第15天tPA和PAI的活性均升高约2.5倍，说明糖皮质激素刺激血管内皮细胞增加tPA 与 PAI两者的合成，但是tPA/PAI比例保持正常，纤溶功能处于平衡状态。因此糖皮质激素的 直接作用是下调tPA的合成，这一tPA活性的增加可能是通过其他途径，如纤维蛋白对tPA的 直接激活作用来实现。第30天tPA活性降为正常的1/8，而PAI活性仍维持高水平，血液处于 纤溶抑制最严重阶段；第60天tPA活性升高，但是低于正常，而PAI活性恢复正常，血液纤 溶抑制状态略减轻。
高脂血症时血液处于 高凝低纤溶状态。一项人体静脉闭塞实验显示，静脉闭塞前，血清甘油三脂水平和PAI呈正 相关，静脉闭塞后，血清甘油三脂水平和tPA呈负相关，证实高甘油三脂血症时血液纤维蛋 白溶解功能受损[2]。本实验中地塞米松冲击应用后，PAI活性与TG含量的阶段性 变化呈显著正相关，提示糖皮质激素不仅直接诱导内皮细胞PAI-1mRNA增加[3]， 促进PAI的合成与释放，可能还通过血液甘油三脂水平的升高刺激PAI-1活性，导致长期血液 纤溶抑制。实验结果显示糖皮质激素冲击应用引起的tPA的动态变化与血脂水平无关，tPA活 性的降低可能与地塞米松的直接抑制作用有关。
, 百拇医药
临床Cushing's综合征患者存在血小板自发性聚集与对瑞斯托菌素的高反应性[4] 。地塞米松冲击应用后长期的高脂血症也可使血小板功能亢进[5]。但是地塞米松 通过糖皮质激素受体和另外的转录启动系统(如NF-KB和/或AP-1)的相互作用抑制转录，减少 磷脂酶A2和环氧化酶的合成，最终减少血栓素的合成与释放[6]。本实验中第15 天，地塞米松组血小板数量显著降低，血栓素A2/血小板比值并无显著减小，提示在这一 时段地塞米松对血小板合成释放血栓素的抑制作用被某些因素拮抗。血小板降低说明血小板 消耗过多，而同一时相血浆tPA活性在地塞米松抑制作用下仍然显著增加，因为tPA只有在纤 维蛋白存在时才能高效激活，这就提示可能出现了一过性血管内凝血，引起血小板的消耗和 tPA的反应激活，同时也解释了TXB2/PLT比值的变化。地塞米松冲击应用可能造成一过性血 管内凝血的假设未见文献支持，作者拟进行下一步实验来探讨。实验后第30，60天血小板数 量恢复，血栓素含量受地塞米松抑制仍明显低于正常。
, http://www.100md.com
本实验提示糖皮激素冲击应用造成家兔血液长期(>60d)处于高凝低纤溶状态，在选择的4个 时相点中，以第30天左右最为严重，在前30d内可能曾经发生自发性血管内凝血。临床工作 中 应该特别注意这一血栓形成高风险期，防止因为疾病或者用药进一步激化患者血液高凝低纤 溶的矛盾，引发重要器官组织的血管内凝血及坏死过程。本实验同时提示，糖皮质激素的过 量使用可能通过血液凝溶系统的长期紊乱引起某些缺血性疾病，纠正血液凝溶系统紊乱可能 有助于这些疾病的治疗。
参 考 文 献
1，Tsantarliotou M,Taitzoglou I,Kokolis N.The effect of dexamethason on t issue fibrinolytic system in male and female rats.In Vivo,1999;13(2):119～124
2，Avellone G,Di-Garbo V,Cordova R,et al.Fibrinolysis in hypertriglycerid aemic subjects in response to venous occlusion.Blood Coagul Fibrinolysis,1993;4( 3):429～433
, 百拇医药
3，Bator JM,Cohen RL,Chambers DA.Hydrocortisone regulates the dynamics of plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor expression in culture d murine kerationcytes.Exp Cell Res,1998;242(1):110～119
4，Casonato A,Pontara E,Boscaro M,et al.Abnormalities of von Willebrand f actor are also part of the prothrombotic state of Cushing's syndrome.Blood Coagu l Fibrinolysis,1999;10(3):145～151
5，Cadroy Y,Lemozy S,Diquelou a,et al.Human type Ⅱ hyperlipoproteinemia enhances platelet-collagen adhesion in flowing nonanticoagulated blood.Arteriosc ler Thromb,1993;13(11):1650～1653
6，Goppelt SM,Molecular mechanisms involved in the regulation of prostag landin biosynthesis by glucocorticoids.Biochem Pharmacol,1997;53(10):1389～1395, http://www.100md.com
单位：重庆第三军医大学大坪医院骨科400042
关键词：地塞米松；纤维蛋白溶解；功能紊乱；兔
中国现代医学杂志000715 目的：探讨短期应用地塞米松造成的家兔血液纤溶功能紊乱及其意义。 方法：健康雄性家兔36只，随机分为实验组(第1，2，7，8天注射地塞米松磷酸钠10mg/kg/d )及对照组(注射生理盐水)。在实验前及第15，30，60天，观察两组家兔血小板数量、血 清 脂质、血浆血栓素、组织纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制物的变化。结果：实验前两 组的各项检测指标均无显著差异。实验第15天，血清甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)、血浆组 织纤溶酶原激活物(tPA)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性明显高于对照组，血小板数量、 血浆TXB2含量明显低于对照组，血浆tPA/PAI比值保持正常。实验第30天，血清TG、TC、 血浆PAI活性仍然保持高水平，血浆TXB2含量、tPA活性、tPA/PAI比值明显低于对照组， 血小板数量恢复正常。实验第60天，只有血清TC仍然保持高水平，血浆TXB2含量、tPA活 性、tPA/PAI比值显著低于对照组，其余指标在正常范围。结论：地塞米松冲击应用可造成 家兔血液长期(>60d)处于高凝低纤溶状态，从而可能诱发某些缺血性疾病。
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分类号 R969.3
SIGNIFICANCE AND MALFUNCTION OF RABBITS FIBRINOLYSIS RESULTED
FROM SHORT-TERM APPLICATION OF DEXAMETHASONE (DEX)
Yun Liangjun
(Department of Orthopaedics of Dapin Hospital, the Third Military Medical Univers ity, Chongqing 400042)
[Abstract] Objective: To investigate the malfunction of fib rinolysis that was re sulted from short-term application of dexamethasone (DEX). Methods: 36 male rabb its were divided into 2 groups in addition to control group (injected with salin e) and DEX group (injected with dexamethasone 10mg*kg-1*d-1 in the 1st, 2nd,7t h and 8th day of the study). Patlet quantity (PLT), serum totle cholesterol (TC) , triglyceride (TG), plasma thromboxane (TX) B2 concentrations, tissue plasminog en activator (tPA) and plasminogen activator inhibitor (PAI) activity were measu red in stages. Results: In the 15th day of the study, serum TG, TC concentration s, plasma tPA, PAI activity increased, PLT and plasma TXB2 concentration decreas ed significantly in DEX group as compared with those of control group. But the r atio of TXB2/PLT was normal. In the 30th day, serum TG, TC concentrations and pl asma PAI activity kept high level, plasma TXB2 concentration, tPA activity and r atio of tPA/PAI in plasma were lower in DEX group than in control group. PLT was normal. In the 60th day, only serum TC concentration also kept high level, plas ma TXB2 concentration, tPA activity and the ratio of tPA/PAI in plasma were lowe r in DEX group. Conclusions: A short-term application of decamet hasone in rabbit s changed their blood into a long-term hypercoagulability and hypofibrinolysis, which might be result in some kinds of ischemic disease.
, 百拇医药
Key words: Dexamethasone; Fibrinolysis; Malfunction; Rabbits
本文检测并分析地塞米松 冲击应用造成的家兔血液性质的阶段性变化，为完善糖皮质激素的临床应用，揭示某些疾病 的发病机理提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 动物分组与模型制作
健康家兔36只，购自大坪医院实验动物中心，体重(2.6±0.2)kg，均为雄性，随机分为实验 组 (AG,n=20)及对照组(CG，n=16)。第1，2，7，8天，AG组皮下注射地塞米松10mg/kg/d，CG 组皮下注射等体积生理盐水。两组家兔在大坪医院实验动物中心同等条件下饲养，进行平行 实验。
1.2 观察项目
, 百拇医药
实验开始前及开始后的15，30，60天上午从家兔耳中央动脉采血，供实验检测。血小板测定 ：用日本Sysmex公司的K-4500型全自动血细胞计数仪进行检测。血清甘油三脂采用酶法测定，血清总胆固醇采用直接显色法 测定，用美国Beckman生产 的CX7型全自动生化分析仪及其配套试剂进行检测。使用福建太阳生物技术公司提供的试剂盒，采用发色底物法 ，在DG3022型酶联免疫仪450nm波长处读光密度值，分别检测血浆中组织纤溶酶原激活物(t PA)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI)的活性。采用北京东亚免疫技术研究所生产的试剂盒，用放免自 动计数仪进行非平衡法放射免疫测定，检测血浆 中TXA2的稳定代谢产物TXB2的含量。
1.3 统计学处理
全部实验数据以均值±标准差(
±s)表示，同一指标采用单因素方差分析，不 同指标间采用线性相关分析。, 百拇医药
2 结果
2.1 糖皮质激素冲击应用对血小板的影响
实验前各组无明显差异。实验组血小板数量仅在实验后第15天明显下降，(P<0.01)， 以 后在各时段均正常。血栓素B2在实验后第15天明显下降，(P<0.01)，但是TXB/PLT 比 值正常。TXB2含量及TXB2/PLT比值在实验后第30天降至最低点，约为对照组的1/10 ；至第60天两指标均上升，但是仍明显低于对照组(P<0.01)。
2.2 对血脂的影响
实验前各组间无明显差异；实验后第15，30天实验组甘油三脂、总胆固醇均显著高于对照组 ( P<0.01)；第60天实验组甘油三脂与对照组无显著差异(P>0.05)，而总胆固 醇显著高于对照组(P<0.01)。
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2.3 血浆tPA,PAI活性的变化
实验前各组间无明显差异，实验后第15天实验组tPA和PAI活性均显著高于对照组(P<0.01)，但是tPA/PAI比值与对照组无显著差异；第30天实验组tPA活性显著低于对 照组，而PAI活性显著高于对照组，故tPA/PAI比值显著低于对照组(P<0.01)；第60天实验组tPA活性显著低于对照组，而PAI活性与对照组无显著差异(P>0.05)，tPA/PAI比值仍然显著低于对照组(P<0.01)。
2.4 相关性分析
PAI与TG呈显著正相关(r=0.736,P<0.01)。tPA/PAI与TG、CHOL、TXB2无显著相 关(r=0.006～0.539,P>0.01)。
3 讨论
, http://www.100md.com 成年Wistar鼠连续腹腔内注射地塞米松，5d后心脏、脑和肝脏PAI和t-PA抗原水平就发生不 同 的改变[1]。但是对于糖皮质激素对血液纤溶功能的长期影响尚不清楚。本实验观 察 到家兔短期大剂量应用地塞米松后，以tPA和PAI为标志的血液纤溶功能出现长期紊乱。家兔 用药后第15天tPA和PAI的活性均升高约2.5倍，说明糖皮质激素刺激血管内皮细胞增加tPA 与 PAI两者的合成，但是tPA/PAI比例保持正常，纤溶功能处于平衡状态。因此糖皮质激素的 直接作用是下调tPA的合成，这一tPA活性的增加可能是通过其他途径，如纤维蛋白对tPA的 直接激活作用来实现。第30天tPA活性降为正常的1/8，而PAI活性仍维持高水平，血液处于 纤溶抑制最严重阶段；第60天tPA活性升高，但是低于正常，而PAI活性恢复正常，血液纤 溶抑制状态略减轻。
高脂血症时血液处于 高凝低纤溶状态。一项人体静脉闭塞实验显示，静脉闭塞前，血清甘油三脂水平和PAI呈正 相关，静脉闭塞后，血清甘油三脂水平和tPA呈负相关，证实高甘油三脂血症时血液纤维蛋 白溶解功能受损[2]。本实验中地塞米松冲击应用后，PAI活性与TG含量的阶段性 变化呈显著正相关，提示糖皮质激素不仅直接诱导内皮细胞PAI-1mRNA增加[3]， 促进PAI的合成与释放，可能还通过血液甘油三脂水平的升高刺激PAI-1活性，导致长期血液 纤溶抑制。实验结果显示糖皮质激素冲击应用引起的tPA的动态变化与血脂水平无关，tPA活 性的降低可能与地塞米松的直接抑制作用有关。
, 百拇医药
临床Cushing's综合征患者存在血小板自发性聚集与对瑞斯托菌素的高反应性[4] 。地塞米松冲击应用后长期的高脂血症也可使血小板功能亢进[5]。但是地塞米松 通过糖皮质激素受体和另外的转录启动系统(如NF-KB和/或AP-1)的相互作用抑制转录，减少 磷脂酶A2和环氧化酶的合成，最终减少血栓素的合成与释放[6]。本实验中第15 天，地塞米松组血小板数量显著降低，血栓素A2/血小板比值并无显著减小，提示在这一 时段地塞米松对血小板合成释放血栓素的抑制作用被某些因素拮抗。血小板降低说明血小板 消耗过多，而同一时相血浆tPA活性在地塞米松抑制作用下仍然显著增加，因为tPA只有在纤 维蛋白存在时才能高效激活，这就提示可能出现了一过性血管内凝血，引起血小板的消耗和 tPA的反应激活，同时也解释了TXB2/PLT比值的变化。地塞米松冲击应用可能造成一过性血 管内凝血的假设未见文献支持，作者拟进行下一步实验来探讨。实验后第30，60天血小板数 量恢复，血栓素含量受地塞米松抑制仍明显低于正常。
, http://www.100md.com
本实验提示糖皮激素冲击应用造成家兔血液长期(>60d)处于高凝低纤溶状态，在选择的4个 时相点中，以第30天左右最为严重，在前30d内可能曾经发生自发性血管内凝血。临床工作 中 应该特别注意这一血栓形成高风险期，防止因为疾病或者用药进一步激化患者血液高凝低纤 溶的矛盾，引发重要器官组织的血管内凝血及坏死过程。本实验同时提示，糖皮质激素的过 量使用可能通过血液凝溶系统的长期紊乱引起某些缺血性疾病，纠正血液凝溶系统紊乱可能 有助于这些疾病的治疗。
参 考 文 献
1，Tsantarliotou M,Taitzoglou I,Kokolis N.The effect of dexamethason on t issue fibrinolytic system in male and female rats.In Vivo,1999;13(2):119～124
2，Avellone G,Di-Garbo V,Cordova R,et al.Fibrinolysis in hypertriglycerid aemic subjects in response to venous occlusion.Blood Coagul Fibrinolysis,1993;4( 3):429～433
, 百拇医药
3，Bator JM,Cohen RL,Chambers DA.Hydrocortisone regulates the dynamics of plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor expression in culture d murine kerationcytes.Exp Cell Res,1998;242(1):110～119
4，Casonato A,Pontara E,Boscaro M,et al.Abnormalities of von Willebrand f actor are also part of the prothrombotic state of Cushing's syndrome.Blood Coagu l Fibrinolysis,1999;10(3):145～151
5，Cadroy Y,Lemozy S,Diquelou a,et al.Human type Ⅱ hyperlipoproteinemia enhances platelet-collagen adhesion in flowing nonanticoagulated blood.Arteriosc ler Thromb,1993;13(11):1650～1653
6，Goppelt SM,Molecular mechanisms involved in the regulation of prostag landin biosynthesis by glucocorticoids.Biochem Pharmacol,1997;53(10):1389～1395, http://www.100md.com