碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤后一氧化氮含量及一氧化氮合酶活性的影响
作者：吴宏 贾连顺 许斌
单位：吴宏(第二军医大学长征医院骨科，上海200003)；贾连顺(第二军医大学长征医院骨科，上海200003)；许斌(第二军医大学长征医院骨科，上海200003)
关键词：成纤维细胞生长因子,碱性；脊髓损伤；一氧化氮；一氧化氮合酶
第二军医大学学报000738 [中图分类号] R 651.202 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)07-0602-02
目前研究认为一氧化氮(NO)不仅参与介导继发性损伤，而且还扮演十分重要的角色。本实验用大鼠脊髓损伤模型，测定损伤后不同时间点脊髓组织NO含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的变化和外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对它们的影响，以探讨bFGF保护损伤后脊髓组织的作用机制。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 SD大鼠52只，雌雄不拘；体质量200～250 g，随机分组为假手术组(S)4只,生理盐水组(NS)24只,bFGF治疗组24只，后两组均按损伤后12 h, 1, 3, 7 d再随机分4组，每组6只。脊髓组织NO含量及NOS活性的测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供，bFGF试剂由珠海生物工程公司提供。
1.2 脊髓损伤模型的建立 用1%戊巴比妥钠(15 mg/kg)腹腔内麻醉后，以大鼠T8 棘突为中心作后正中切口，咬除T8棘突及全椎板，采用Allen's打击法致伤暴露的脊髓(致伤10 g×5 cm)，并置硬膜外导管于损伤区，妥善固定。假手术组仅咬除椎板，不致伤脊髓。术后bFGF组每天经管注入25 μl bFGF溶液(含bFGF 100 ng)；NS组在同时间内注入等量生理盐水作为对照。按实验设计要求定期处死大鼠，收集脊髓组织标本。
, 百拇医药
1.3 统计学处理 采用SAS软件包进行方差分析，t检验。
2 结 果
2.1 各组大鼠脊髓损伤及bFGF治疗后脊髓组织中NO含量及NOS活性的变化 假手术组脊髓组织中NO含量 、NOS活性分别为(58.36 ± 2.73) μmol/L, (1.33±0.31) U/mg,脊髓损伤12 h，1 , 3 d, 3个时点 NS组NO含量为(80.56±3.51), (84.20±4.57), (67.71±2.65) μmol/L; NOS活性为(2.66±0.62), (3.08±0.76), (2.95±0.53) U/mg； bFGF组NO含量为：(73.33±4.85), (66.31±4.07), (63.48±1.77) μmol/L；NOS活性为(1.91±0.28), (2.05±0.48),(1.99±0.42) U/mg。结果表明NS组NO含量、NOS活性在上述时点均明显高于假手术组(P<0.01)，bFGF组NO含量、NOS活性虽高于假手术组(P<0.05)，但与同一时点的NS组相比则明显降低(P<0.05)，假手术组、NS7d组及bFGF7d组3者之间NO含量、NOS活性无显著性差异(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨 论
脊髓损伤后NO的过度产生则会加强其所介导的细胞毒性损害，加重神经元的缺血、缺氧及代谢障碍，甚至引起神经元死亡。本实验采用生化方法研究了bFGF对损伤后脊髓组织NO含量和NOS活性的影响。结果显示脊髓损伤12 h， 1, 3 d后bFGF治疗组的NO含量和NOS活性与损伤组相比明显降低，提示外源性bFGF能通过有效抑制NOS的活性而减少NO的过度产生，从而保护了神经元。但其作用机制目前尚不完全清楚，bFGF可能通过以下途径对NOS活性产生影响，进而抑制NO的过度产生。(1)bFGF在缺血、缺氧等病理状态下具有抑制Ca2+内流的功能。当脊髓损伤后EAA介导NMDA通道开放，诱发Ca2+大量内流时，由于bFGF作用使Ca2+内流减少，调节了细胞内离子的平衡，进而抑制了一系列钙促反应，最终使NOS活性降低，NO的生成减少。(2)外源性bFGF与受损区及其周围的巨噬细胞及血管平滑肌、内皮细胞等膜上的受体结合，发挥其生物学活性，诱导它们合成抑制iNOS表达的细胞因子如血小板衍生生长因子(PDGF)、β转化生长因子等；或者可能直接发挥作用抑制iNOS的表达。(3)iNOS在合成过程中需要Ca2+的参与，因此bFGF也可能在iNOS合成途径上阻断Ca2+通道，从而抑制iNOS的合成。
作者简介：吴宏(1970-)，男(汉族)，硕士。
[收稿日期] 2000-02-05
[修回日期] 2000-04-11, 百拇医药
单位：吴宏(第二军医大学长征医院骨科，上海200003)；贾连顺(第二军医大学长征医院骨科，上海200003)；许斌(第二军医大学长征医院骨科，上海200003)
关键词：成纤维细胞生长因子,碱性；脊髓损伤；一氧化氮；一氧化氮合酶
第二军医大学学报000738 [中图分类号] R 651.202 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)07-0602-02
目前研究认为一氧化氮(NO)不仅参与介导继发性损伤，而且还扮演十分重要的角色。本实验用大鼠脊髓损伤模型，测定损伤后不同时间点脊髓组织NO含量及一氧化氮合酶(NOS)活性的变化和外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对它们的影响，以探讨bFGF保护损伤后脊髓组织的作用机制。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 材料 SD大鼠52只，雌雄不拘；体质量200～250 g，随机分组为假手术组(S)4只,生理盐水组(NS)24只,bFGF治疗组24只，后两组均按损伤后12 h, 1, 3, 7 d再随机分4组，每组6只。脊髓组织NO含量及NOS活性的测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供，bFGF试剂由珠海生物工程公司提供。
1.2 脊髓损伤模型的建立 用1%戊巴比妥钠(15 mg/kg)腹腔内麻醉后，以大鼠T8 棘突为中心作后正中切口，咬除T8棘突及全椎板，采用Allen's打击法致伤暴露的脊髓(致伤10 g×5 cm)，并置硬膜外导管于损伤区，妥善固定。假手术组仅咬除椎板，不致伤脊髓。术后bFGF组每天经管注入25 μl bFGF溶液(含bFGF 100 ng)；NS组在同时间内注入等量生理盐水作为对照。按实验设计要求定期处死大鼠，收集脊髓组织标本。
, 百拇医药
1.3 统计学处理 采用SAS软件包进行方差分析，t检验。
2 结 果
2.1 各组大鼠脊髓损伤及bFGF治疗后脊髓组织中NO含量及NOS活性的变化 假手术组脊髓组织中NO含量 、NOS活性分别为(58.36 ± 2.73) μmol/L, (1.33±0.31) U/mg,脊髓损伤12 h，1 , 3 d, 3个时点 NS组NO含量为(80.56±3.51), (84.20±4.57), (67.71±2.65) μmol/L; NOS活性为(2.66±0.62), (3.08±0.76), (2.95±0.53) U/mg； bFGF组NO含量为：(73.33±4.85), (66.31±4.07), (63.48±1.77) μmol/L；NOS活性为(1.91±0.28), (2.05±0.48),(1.99±0.42) U/mg。结果表明NS组NO含量、NOS活性在上述时点均明显高于假手术组(P<0.01)，bFGF组NO含量、NOS活性虽高于假手术组(P<0.05)，但与同一时点的NS组相比则明显降低(P<0.05)，假手术组、NS7d组及bFGF7d组3者之间NO含量、NOS活性无显著性差异(P>0.05)。
, 百拇医药
3 讨 论
脊髓损伤后NO的过度产生则会加强其所介导的细胞毒性损害，加重神经元的缺血、缺氧及代谢障碍，甚至引起神经元死亡。本实验采用生化方法研究了bFGF对损伤后脊髓组织NO含量和NOS活性的影响。结果显示脊髓损伤12 h， 1, 3 d后bFGF治疗组的NO含量和NOS活性与损伤组相比明显降低，提示外源性bFGF能通过有效抑制NOS的活性而减少NO的过度产生，从而保护了神经元。但其作用机制目前尚不完全清楚，bFGF可能通过以下途径对NOS活性产生影响，进而抑制NO的过度产生。(1)bFGF在缺血、缺氧等病理状态下具有抑制Ca2+内流的功能。当脊髓损伤后EAA介导NMDA通道开放，诱发Ca2+大量内流时，由于bFGF作用使Ca2+内流减少，调节了细胞内离子的平衡，进而抑制了一系列钙促反应，最终使NOS活性降低，NO的生成减少。(2)外源性bFGF与受损区及其周围的巨噬细胞及血管平滑肌、内皮细胞等膜上的受体结合，发挥其生物学活性，诱导它们合成抑制iNOS表达的细胞因子如血小板衍生生长因子(PDGF)、β转化生长因子等；或者可能直接发挥作用抑制iNOS的表达。(3)iNOS在合成过程中需要Ca2+的参与，因此bFGF也可能在iNOS合成途径上阻断Ca2+通道，从而抑制iNOS的合成。
作者简介：吴宏(1970-)，男(汉族)，硕士。
[收稿日期] 2000-02-05
[修回日期] 2000-04-11, 百拇医药