同种胚胎脊髓移植治疗成年大鼠脊髓损伤
作者：彭亦良 吴梅英 崔大勇
单位：彭亦良(第三军医大学附属西南医院骨科，重庆 400038)；吴梅英(第三军医大学附属西南医院骨科，重庆 400038)；崔大勇(第三军医大学附属西南医院骨科，重庆 400038)
关键词：脊髓损伤；脊髓移植；移植，同种
第三军医大学学报000732 中图法分类号： R651.2 文献标识码： B
文章编号：1000-5404(2000)07-0634-01
Treatment of spinal cord injury by fetal cord allograft in adult rats
脊髓损伤所造成的截瘫，至今仍缺乏有效的治疗方法。本实验采用同种胚胎脊髓移植治疗成年大鼠脊髓损伤，通过观察植入的胚胎脊髓在宿主脊髓内的分化发育过程及对损伤脊髓再生修复的促进作用，为进一步探索脊髓损伤后再生修复的机制和胚胎脊髓移植的临床应用提供可能有用的实验依据。
, http://www.100md.com
1 材料与方法
1.1 动物与分组
Wistar大鼠96只，体重(200±20)g，雌雄不拘。随机分为两组：①胚胎脊髓移植组：72只；②单纯脊髓损伤组：24只。
1.2 截瘫模型制备
采用大鼠胸腰段(T11-L1)脊髓左侧半横切损伤模型。
1.3 胚胎脊髓移植 选用妊娠14 d的胎鼠作为移植供体，损伤组不作移植。
1.4 组织标本制作 以术后15、30、60 d作为制作标本及观察的时相点。
1.5 观察指标
, 百拇医药
1.5.1HE染色、尼氏染色和嗜银染色。
1.5.2 免疫细胞化学染色 采用S-P法进行SP、SOM、GFAP、NF-200 4种抗体的免疫细胞化学染色。
1.5.3 图像分析 运用图像分析软件，对阳性染色的神经元数目、面积、平均灰度值进行测量和分析。
1.5.4 统计学处理 实验数据作方差分析。
2 结果
2.1 一般组织病理学改变
HE染色显示，移植组织存活率为72.26%。移植组术后30 d 时，87.19%的移植物与受体脊髓融合在一起；术后60 d时融合更紧密；而损伤组术后左半侧脊髓均形成一个大的空腔。尼氏染色显示移植组术后30 d 时，移植物中神经元体积增大，神经元内尼氏体增多，神经元排列较规整；术后60 d时移植物中神经元大小、形态与脊髓后角神经元基本相似；而损伤组在术后15 d时，损伤区周围神经元内尼氏体大多消失，60 d时仍无明显恢复。镀银染色显示移植组术后15 d，63.96%的移植组织内可见纤细的神经纤维，与受体脊髓间有少量的纤维连接。30 d 时74.08%的移植物与受体纤维连接增多，60 d时移植物与受体脊髓交界面可见明显的纤维联系；而损伤组则至术后60d 时脊髓内神经纤维在空腔处仍不连续。
, 百拇医药
2.2 免疫细胞化学改变 移植组术后15 d，69.48%的移植物内即可见较明显的SP和SOM阳性染色细胞，呈斑片状或网状分布；GFAP和NF染色不明显。术后30 d时，87.25%的移植物内SP和SOM染色呈强阳性，阳性染色的细胞呈类圆形或多角形，可见较多棕黄色颗粒分布于胞浆内，并可见长短不一的突起向周围延伸。GFAP染色阳性的细胞和纤维稀疏，主要见于移植物与宿主脊髓融合不紧密处。NF染色阳性的神经纤维在纵切面上呈纵形排列，分布密集；在横截面上呈点状散在分布，并可见少量NF阳性神经元。术后60 d时，以上4种染色与30 d时基本相似，仅阳性染色略浅。单纯损伤组在各时相点中GFAP阳性染色最明显，呈带状或网状分布于脊髓空腔周围。
2.3 图像分析结果
图像分析结果显示，在各个时相点两组动物的SP、SOM和NF-200染色差异非常显著(P<0.01)，GFAP染色差异显著(P<0.05)。
, 百拇医药
3 讨论
本实验表明，植入成年大鼠损伤脊髓内的胚胎脊髓，不仅可存活，还可在宿主脊髓内继续生长及分化发育。随着移植物的体积增大，可在大体上恢复损伤脊髓的解剖连续性。此外，镀银染色结果还显示，胚胎脊髓移植后，移植物与宿主脊髓间的纤维联系逐渐增多。
处于未分化阶段的胚胎期神经元缺乏神经肽或递质等标记物，通过检测这些特异性标记物，即可了解神经元的发育情况。SP、SOM染色结果表明，植入的胚胎脊髓可在宿主脊髓内逐渐发育成熟，并具有正常成熟神经元的特征。GFAP染色的强弱反映了胶质增生的活跃程度，GFAP染色结果提示，胚胎脊髓移植物对胶质增生有一定的抑制作用。NF-200染色可特异性地显示神经元的轴突，本实验的结果提示，移植的胚胎脊髓可诱导脊髓损伤后的轴突再生，并且显示胚胎脊髓神经元在发育成熟过程中细胞功能活跃。
由于脊髓结构和功能的复杂性，目前离脊髓再生修复的最终目标——恢复感觉和控制运动，还有很大有距离。因此，进一步探索脊髓再生的本质，对提高脊髓损伤的修复水平及改善外伤性截瘫的预后，具有重要的意义。
, 百拇医药
作者简介：彭亦良(1964-)，男，重庆市人，硕士，主治医师，主要从事脊髓损伤方面的研究，发表论文5篇。电话：(023)68754019
参考文献：
[1] Bahr M, Bonhoeffer F. Perspectives on axonal regeneration in the mammalian CNS[J]. Trends Neurosci,1994,17(11):473-479.
[2] Bernstein J J, Goldberg A. Experimental spinal cord transplantation as a mechanism of spinal cord regeneration[J]. Paraplegia,1995,33(5):250-253.
[3] Tatagiba M, Brosamle C, Schwab M E. Rengeneration of injured axons in the adult mammalian central nervous system[J]. Neurosurgery,1996,273(11):451-458.
收稿日期：1999-08-15；修回日期：1999-12-28, 百拇医药
单位：彭亦良(第三军医大学附属西南医院骨科，重庆 400038)；吴梅英(第三军医大学附属西南医院骨科，重庆 400038)；崔大勇(第三军医大学附属西南医院骨科，重庆 400038)
关键词：脊髓损伤；脊髓移植；移植，同种
第三军医大学学报000732 中图法分类号： R651.2 文献标识码： B
文章编号：1000-5404(2000)07-0634-01
Treatment of spinal cord injury by fetal cord allograft in adult rats
脊髓损伤所造成的截瘫，至今仍缺乏有效的治疗方法。本实验采用同种胚胎脊髓移植治疗成年大鼠脊髓损伤，通过观察植入的胚胎脊髓在宿主脊髓内的分化发育过程及对损伤脊髓再生修复的促进作用，为进一步探索脊髓损伤后再生修复的机制和胚胎脊髓移植的临床应用提供可能有用的实验依据。
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1 材料与方法
1.1 动物与分组
Wistar大鼠96只，体重(200±20)g，雌雄不拘。随机分为两组：①胚胎脊髓移植组：72只；②单纯脊髓损伤组：24只。
1.2 截瘫模型制备
采用大鼠胸腰段(T11-L1)脊髓左侧半横切损伤模型。
1.3 胚胎脊髓移植 选用妊娠14 d的胎鼠作为移植供体，损伤组不作移植。
1.4 组织标本制作 以术后15、30、60 d作为制作标本及观察的时相点。
1.5 观察指标
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1.5.1HE染色、尼氏染色和嗜银染色。
1.5.2 免疫细胞化学染色 采用S-P法进行SP、SOM、GFAP、NF-200 4种抗体的免疫细胞化学染色。
1.5.3 图像分析 运用图像分析软件，对阳性染色的神经元数目、面积、平均灰度值进行测量和分析。
1.5.4 统计学处理 实验数据作方差分析。
2 结果
2.1 一般组织病理学改变
HE染色显示，移植组织存活率为72.26%。移植组术后30 d 时，87.19%的移植物与受体脊髓融合在一起；术后60 d时融合更紧密；而损伤组术后左半侧脊髓均形成一个大的空腔。尼氏染色显示移植组术后30 d 时，移植物中神经元体积增大，神经元内尼氏体增多，神经元排列较规整；术后60 d时移植物中神经元大小、形态与脊髓后角神经元基本相似；而损伤组在术后15 d时，损伤区周围神经元内尼氏体大多消失，60 d时仍无明显恢复。镀银染色显示移植组术后15 d，63.96%的移植组织内可见纤细的神经纤维，与受体脊髓间有少量的纤维连接。30 d 时74.08%的移植物与受体纤维连接增多，60 d时移植物与受体脊髓交界面可见明显的纤维联系；而损伤组则至术后60d 时脊髓内神经纤维在空腔处仍不连续。
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2.2 免疫细胞化学改变 移植组术后15 d，69.48%的移植物内即可见较明显的SP和SOM阳性染色细胞，呈斑片状或网状分布；GFAP和NF染色不明显。术后30 d时，87.25%的移植物内SP和SOM染色呈强阳性，阳性染色的细胞呈类圆形或多角形，可见较多棕黄色颗粒分布于胞浆内，并可见长短不一的突起向周围延伸。GFAP染色阳性的细胞和纤维稀疏，主要见于移植物与宿主脊髓融合不紧密处。NF染色阳性的神经纤维在纵切面上呈纵形排列，分布密集；在横截面上呈点状散在分布，并可见少量NF阳性神经元。术后60 d时，以上4种染色与30 d时基本相似，仅阳性染色略浅。单纯损伤组在各时相点中GFAP阳性染色最明显，呈带状或网状分布于脊髓空腔周围。
2.3 图像分析结果
图像分析结果显示，在各个时相点两组动物的SP、SOM和NF-200染色差异非常显著(P<0.01)，GFAP染色差异显著(P<0.05)。
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3 讨论
本实验表明，植入成年大鼠损伤脊髓内的胚胎脊髓，不仅可存活，还可在宿主脊髓内继续生长及分化发育。随着移植物的体积增大，可在大体上恢复损伤脊髓的解剖连续性。此外，镀银染色结果还显示，胚胎脊髓移植后，移植物与宿主脊髓间的纤维联系逐渐增多。
处于未分化阶段的胚胎期神经元缺乏神经肽或递质等标记物，通过检测这些特异性标记物，即可了解神经元的发育情况。SP、SOM染色结果表明，植入的胚胎脊髓可在宿主脊髓内逐渐发育成熟，并具有正常成熟神经元的特征。GFAP染色的强弱反映了胶质增生的活跃程度，GFAP染色结果提示，胚胎脊髓移植物对胶质增生有一定的抑制作用。NF-200染色可特异性地显示神经元的轴突，本实验的结果提示，移植的胚胎脊髓可诱导脊髓损伤后的轴突再生，并且显示胚胎脊髓神经元在发育成熟过程中细胞功能活跃。
由于脊髓结构和功能的复杂性，目前离脊髓再生修复的最终目标——恢复感觉和控制运动，还有很大有距离。因此，进一步探索脊髓再生的本质，对提高脊髓损伤的修复水平及改善外伤性截瘫的预后，具有重要的意义。
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作者简介：彭亦良(1964-)，男，重庆市人，硕士，主治医师，主要从事脊髓损伤方面的研究，发表论文5篇。电话：(023)68754019
参考文献：
[1] Bahr M, Bonhoeffer F. Perspectives on axonal regeneration in the mammalian CNS[J]. Trends Neurosci,1994,17(11):473-479.
[2] Bernstein J J, Goldberg A. Experimental spinal cord transplantation as a mechanism of spinal cord regeneration[J]. Paraplegia,1995,33(5):250-253.
[3] Tatagiba M, Brosamle C, Schwab M E. Rengeneration of injured axons in the adult mammalian central nervous system[J]. Neurosurgery,1996,273(11):451-458.
收稿日期：1999-08-15；修回日期：1999-12-28, 百拇医药