尿激酶型纤溶酶原激活剂在胃癌组织及癌旁粘膜中的表达
作者：乔士兴 王文华 黄大鹤 袁玫 谭毓铨 张晓萍 谷志远
单位：乔士兴(130041 长春，白求恩医科大学第二临床医院普外科)；王文华(130041 长春，白求恩医科大学第二临床医院普外科)；黄大鹤(130041 长春，白求恩医科大学第二临床医院普外科)；袁玫(中国人民解放军总医院)；张晓萍(中国人民解放军总医院)；谷志远(中国人民解放军总医院)；谭毓铨(白求恩医科大学第一临床医院普外科)
关键词：
中华医学杂志000713 尿激酶型纤溶酶原激活剂(UPA)是新近发现的一种肿瘤标志物，但以往的研究只是注重其在胃癌转移方面的研究[1]，就UPA在胃癌诊断方面研究尚少报道。作者采用UPA多克隆抗体(PCAb UPA)，运用sABC免疫组织化学分析法，对30例胃癌、29例癌旁粘膜组织标本进行染色分析，旨在探讨UPA在胃癌诊断方面的价值。
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一、对象和方法
1.对象：胃癌及癌旁粘膜组织标本由中国人民解放军总医院普外科、白求恩医科大学第一临床学院普外科提供。试剂：PCAb UPA：由中国人民解放军总医院分子生物学研究室谷志远教授提供。通过效价测定，确定UPA应用浓度为：1：200。
2.方法：(1)将冰冻切片置丙酮溶液中固定20 min，取出后于PBS中洗三遍。将切片置于0.5%H2O2甲醛溶液中，室温下20 min，取出于PBS中洗3遍。10%牛血清白蛋白(100 μl/片)封闭15 min，然后弃去封闭液不洗片。一抗稀释倍数为1∶200，每片加100 μl覆盖片上组织，室温2h或4℃过夜，取出后于PBS中洗3遍。二抗Biotin-Gaot Anti-Rabbit，做1：400稀释每片加100μl，覆盖组织，室温下30min，取出于PBS中洗3遍。三抗为HRP-Streptavidin，用PBS做1∶400稀释，每片加100 μl室温下30 min，取出于PBS中洗3遍。底物配制浓度：1ml PBS+0.5 mg重氮氨基苯(DAB)+1 μl H2O2(H2O2在使用前加)，每片100 μl，室温下5 min，自来水冲洗数次自然干燥。每片加甲基绿100 μl，室温下3 min，迅速自来水冲洗后，空气干燥，二甲苯透明树胶封片，置Olympus显微镜下观察。
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(2)结果判定：使用日本产Olympus倒置显微镜进行观察，组织切片中阴性细胞呈淡蓝色或不着色。细胞膜或胞浆中出现深浅不一的棕褐色物质为阳性细胞，按阳性区域占组织切片的比例统计，小于5%为阴性，在5%～25%为(+)，在25%～50%为(++)，大于50%为强阳性(+++)。
(3)统计学处理：采用t检验方法，作组间比较。
二、结果
1.UPA在各组组织中表达阳性率(表1)：从以上结果可以看出UPA在胃癌组中低分化癌阳性率为90%，高分化癌为57%，硬化癌及印戒癌为100%。癌旁粘膜伴肠上皮化生及不典型增生组阳性率亦较高，分别为81.8%、83.3%。从UPA的组织分布来看，高分化癌主要分布在靠近腺腔的癌细胞内，腺腔中少有阳性物质(图1)。低分化癌主要分布在细胞浆内。乳头状癌则在乳头内广泛分布。肠化生主要分布于杯状细胞膜及杯状细胞的粘液中(图2)。
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表1 UPA在各组组织中表达阳性率(%) 组织类型
检测例数
阳性例数
强阳
性率
总阳
性率
+
++
+++
胃癌组
30
6
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13
5
16.6
80
低分化癌
10
2
5
2
20
90
中分化癌
8
2
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3
1
12.5
75
高分化癌
7
1
2
1
14.3
57
硬化癌
4
1
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3
0
0
100
印戒癌
1
0
0
1
100
100
癌旁粘膜伴肠上皮化生
11
4
, 百拇医药
4
1
9
81.8
癌旁粘膜伴不典型增生
18
5
7
3
16.7
83.3
浅表性胃炎
20
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0
0
0
0
0
正常胃粘膜
12
0
0
0
0
0
三、讨论
近年来的研究发现，UPA与肿瘤有密切的相关性。现已证明UPA及其受体UPAR在多种肿瘤组织中具有高水平表达，在胃癌方面的研究主要是认为UPA与胃癌的浸润和转移密切相关[1]，但就胃癌及癌旁粘膜UPA表达情况及UPA对胃癌诊断方面，研究较少。本研究结果表明：胃癌组总阳性率为80%，较国外报道(70%)偏高[2]。从胃癌组织学分型来看，低分化癌阳性率最高(90%)，随分化程度增高，阳性率愈低，说明UPA的表达与组织学分型有相关性。硬化癌及印戒癌阳性率均为100%，但例数较少，难以说明问题。癌旁粘膜伴肠上皮化生及不典型增生组阳性率亦较高在80%以上。正常粘膜及浅表性胃炎组均为阴性。癌旁粘膜的病理改变虽不能完全代表早期胃癌，但也部分说明了胃癌发生的早期事件，况且不典型增生及肠上皮化生已被视为明确的癌前病变，UPA在癌旁粘膜的高表达说明UPA不但和胃癌的浸润、转移有密切相关性，而且也可能参与了早期癌变的致癌过程，导致细胞的遗传性及免疫特性的改变，使细胞的某些生物学行为发生异常，从而使细胞癌变。故我们认为，UPA也可作为一种胃癌诊断的辅助指标，对于胃癌或早期胃癌的诊断可能会有一定的帮助，有关该方面的问题有待今后进一步探讨。
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图1 高分化癌UPA主要分布在靠近腺腔
图2 肠化生中UPA主要分布于杯状细胞膜及杯状细胞的粘液中
参考文献
1，Schwartz GK.Invasion and metastases in gastric cancer in vitro and in vivo models with clinical correlations.Semin Oncol， 1996，23：316-324.
2，Hong SI，Park IC，Son-YS，et al.Expression of urokinase-type plasminogen activator，its receptor，and its inhibitor in gastric adenocarcinoma tissues.J Korean Med Sci，1996，11：33-37.
收稿日期：1999-07-07, 百拇医药
单位：乔士兴(130041 长春，白求恩医科大学第二临床医院普外科)；王文华(130041 长春，白求恩医科大学第二临床医院普外科)；黄大鹤(130041 长春，白求恩医科大学第二临床医院普外科)；袁玫(中国人民解放军总医院)；张晓萍(中国人民解放军总医院)；谷志远(中国人民解放军总医院)；谭毓铨(白求恩医科大学第一临床医院普外科)
关键词：
中华医学杂志000713 尿激酶型纤溶酶原激活剂(UPA)是新近发现的一种肿瘤标志物，但以往的研究只是注重其在胃癌转移方面的研究[1]，就UPA在胃癌诊断方面研究尚少报道。作者采用UPA多克隆抗体(PCAb UPA)，运用sABC免疫组织化学分析法，对30例胃癌、29例癌旁粘膜组织标本进行染色分析，旨在探讨UPA在胃癌诊断方面的价值。
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一、对象和方法
1.对象：胃癌及癌旁粘膜组织标本由中国人民解放军总医院普外科、白求恩医科大学第一临床学院普外科提供。试剂：PCAb UPA：由中国人民解放军总医院分子生物学研究室谷志远教授提供。通过效价测定，确定UPA应用浓度为：1：200。
2.方法：(1)将冰冻切片置丙酮溶液中固定20 min，取出后于PBS中洗三遍。将切片置于0.5%H2O2甲醛溶液中，室温下20 min，取出于PBS中洗3遍。10%牛血清白蛋白(100 μl/片)封闭15 min，然后弃去封闭液不洗片。一抗稀释倍数为1∶200，每片加100 μl覆盖片上组织，室温2h或4℃过夜，取出后于PBS中洗3遍。二抗Biotin-Gaot Anti-Rabbit，做1：400稀释每片加100μl，覆盖组织，室温下30min，取出于PBS中洗3遍。三抗为HRP-Streptavidin，用PBS做1∶400稀释，每片加100 μl室温下30 min，取出于PBS中洗3遍。底物配制浓度：1ml PBS+0.5 mg重氮氨基苯(DAB)+1 μl H2O2(H2O2在使用前加)，每片100 μl，室温下5 min，自来水冲洗数次自然干燥。每片加甲基绿100 μl，室温下3 min，迅速自来水冲洗后，空气干燥，二甲苯透明树胶封片，置Olympus显微镜下观察。
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(2)结果判定：使用日本产Olympus倒置显微镜进行观察，组织切片中阴性细胞呈淡蓝色或不着色。细胞膜或胞浆中出现深浅不一的棕褐色物质为阳性细胞，按阳性区域占组织切片的比例统计，小于5%为阴性，在5%～25%为(+)，在25%～50%为(++)，大于50%为强阳性(+++)。
(3)统计学处理：采用t检验方法，作组间比较。
二、结果
1.UPA在各组组织中表达阳性率(表1)：从以上结果可以看出UPA在胃癌组中低分化癌阳性率为90%，高分化癌为57%，硬化癌及印戒癌为100%。癌旁粘膜伴肠上皮化生及不典型增生组阳性率亦较高，分别为81.8%、83.3%。从UPA的组织分布来看，高分化癌主要分布在靠近腺腔的癌细胞内，腺腔中少有阳性物质(图1)。低分化癌主要分布在细胞浆内。乳头状癌则在乳头内广泛分布。肠化生主要分布于杯状细胞膜及杯状细胞的粘液中(图2)。
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表1 UPA在各组组织中表达阳性率(%) 组织类型
检测例数
阳性例数
强阳
性率
总阳
性率
+
++
+++
胃癌组
30
6
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13
5
16.6
80
低分化癌
10
2
5
2
20
90
中分化癌
8
2
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3
1
12.5
75
高分化癌
7
1
2
1
14.3
57
硬化癌
4
1
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3
0
0
100
印戒癌
1
0
0
1
100
100
癌旁粘膜伴肠上皮化生
11
4
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4
1
9
81.8
癌旁粘膜伴不典型增生
18
5
7
3
16.7
83.3
浅表性胃炎
20
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正常胃粘膜
12
0
0
0
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三、讨论
近年来的研究发现，UPA与肿瘤有密切的相关性。现已证明UPA及其受体UPAR在多种肿瘤组织中具有高水平表达，在胃癌方面的研究主要是认为UPA与胃癌的浸润和转移密切相关[1]，但就胃癌及癌旁粘膜UPA表达情况及UPA对胃癌诊断方面，研究较少。本研究结果表明：胃癌组总阳性率为80%，较国外报道(70%)偏高[2]。从胃癌组织学分型来看，低分化癌阳性率最高(90%)，随分化程度增高，阳性率愈低，说明UPA的表达与组织学分型有相关性。硬化癌及印戒癌阳性率均为100%，但例数较少，难以说明问题。癌旁粘膜伴肠上皮化生及不典型增生组阳性率亦较高在80%以上。正常粘膜及浅表性胃炎组均为阴性。癌旁粘膜的病理改变虽不能完全代表早期胃癌，但也部分说明了胃癌发生的早期事件，况且不典型增生及肠上皮化生已被视为明确的癌前病变，UPA在癌旁粘膜的高表达说明UPA不但和胃癌的浸润、转移有密切相关性，而且也可能参与了早期癌变的致癌过程，导致细胞的遗传性及免疫特性的改变，使细胞的某些生物学行为发生异常，从而使细胞癌变。故我们认为，UPA也可作为一种胃癌诊断的辅助指标，对于胃癌或早期胃癌的诊断可能会有一定的帮助，有关该方面的问题有待今后进一步探讨。
, http://www.100md.com
图1 高分化癌UPA主要分布在靠近腺腔
图2 肠化生中UPA主要分布于杯状细胞膜及杯状细胞的粘液中
参考文献
1，Schwartz GK.Invasion and metastases in gastric cancer in vitro and in vivo models with clinical correlations.Semin Oncol， 1996，23：316-324.
2，Hong SI，Park IC，Son-YS，et al.Expression of urokinase-type plasminogen activator，its receptor，and its inhibitor in gastric adenocarcinoma tissues.J Korean Med Sci，1996，11：33-37.
收稿日期：1999-07-07, 百拇医药