毛细管电泳测定当归饮片中阿魏酸含量
作者：陈缵光 张敏生 莫金垣 蔡沛祥 吴海云 张孔
单位：陈缵光 张敏生(中山医科大学化学教研室 广州 510089)；莫金垣 蔡沛祥 吴海云(中山大学化学与工程学院)；张孔(中山医科大学第一附属医院)
关键词：毛细管电泳；当归；阿魏酸
中草药000713 摘 要 研究了用反向毛细管电泳分离测定当归中阿魏酸含量的条件。当归饮片用热水提取，电泳缓冲液为 Tris-H3BO3(20∶80 mmol/L)，并加入 0.8 mmol/L 的 CTAB 作为电渗流改向剂，分离电压为 -10.0 kV，用安培检测器检测。分析结果每克当归饮片含阿魏酸 0.415 mg，RSD 2.3 %，回收率为 97.1 %。
Determination of Ferulic Acid in the Root of Angelica sinensis
, 百拇医药
Chen Zuanguang
(Department of Chemistry, Sun Yat-sen University of Medical Sciences Guangzhou 510089)
Zhang Minsheng
(Department of Chemistry, Sun Yat-sen University of Medical Sciences Guangzhou 510089)
Mo Jinyuan
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University)
Cai Peixiang
, 百拇医药
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University)
Wu Haiyun
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University)
Zhang Kong
(First Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences)
Abstract Experimental conditions for the separation and determination of ferulic acid in the root of Angelica sinensis (Oliv.) Diels by capillary electrophoresis were studied. Sliced A. sinensis was extracted with hot water, and the ferulic acid in the extract was separated by capillary electrophoresis and detected by amperometric detector. Buffer consisted of 20 mmol/L of tris (hydroxymethyl) aminomethane and 80 mmol/L of boric acid. 0.8 mmol/L of cetyltrimethyl ammonium bromide was added as the counter electroosmotic flow agent. Separation voltage was -10.0 kV. Result of the study showed that 1 g of the dry herb contains 0.415 mg of ferulic acid (RSD=2.3%, γ=97.1%).
, 百拇医药
Key words capillary electrophoresis Angelica sinensis (Oliv.) Diels ferulic acid
阿魏酸 (ferulic acid) 是中药当归 Angilica sinensis 重要的有效成分之一，具有抑制胶原和抑制血小板聚集作用[1]，溶于水。由于其含量较低，而且光度法分析存在干扰，因此一般用 HPLC 法进行测定[2]，但该法分析成本较高，且溶剂有一定毒性。
高效毛细管电泳 (HPCE) 以其分析效能高 (塔板数比 HPLC 高1～2 个数量级)、灵敏、运作成本低等特点，已用于药物分析，包括成药、原料、中草药成分测定。
本文研究了 HPCE 测定当归饮片中阿魏酸的分析条件。采用反向毛细管区带电泳的操作模式。由于阿魏酸在碱性条件下有效负电荷较大，正极进样、负极检测时保留时间较长，因此在缓冲液中加入了表面活性剂将电渗流改向，在负极进样，正极检测。由于阿魏酸含有酚羟基，可在较低的电位下用安培检测器检测。本文所用的仪器结构简单，成本低，但灵敏度较高。
, http://www.100md.com
1 实验部分
1.1 仪器、试剂与材料：仪器：毛细管电泳仪 (自制)[3]、AD-2A 型极谱仪 (江苏金坛分析仪器厂)、XWT-264 型平台式自动平衡记录仪(上海大华仪表厂)、石英毛细管 (100 μm-id，河北永年光导纤维厂)。
试剂：三(羟甲基)氨基甲烷 (Tris)、十六烷基三甲基季胺溴 (CTAB)等试剂均为AR级，阿魏酸对照品 (773-92024，广东省药检所提供)。溶液均用二次蒸馏水配制。当归饮片(购自广州采芝林药店，产地甘肃)。
1.2 实验操作
1.2.1 电泳条件：毛细管长 70 cm，缓冲液：20 mmol/L Tris+80 mmol/L H3BO3+0.8 mmol/L CTAB(电渗流改向剂)，温度 28 ℃，负极进样，位差 30 cm 虹吸进样 10.0 s，分离电压 -10.0 kV，运行方向：负→正，正极检测。
, 百拇医药
1.2.2 检测条件：圆盘铂电极 (300 μm) 做工作电极，对准毛细管出口。极谱仪二电极系统检测，设定电压 0.6 V (vs. SCE)。
1.2.3 样品提取：将当归饮片干燥粉碎，过20目筛，称取 1.00 g，用水提取3次，每次加热回流 1 h，制成提取液 100.0 mL。提取液用 G4号坩埚式过滤器过滤。
2 结果与讨论
2.1 结果：①在设定的电泳条件下，当归的水提取液的电泳图如图1所示。经与对照品对照和用加入法比较，第4个峰为阿魏酸，保留时间为 10.48 min。②以阿魏酸对照品配制标准溶液，得到校正曲线的线性范围为 0.01～0.4 mg/mL。③测得当归饮片中阿魏酸的含量为 0.415 mg/g，RSD 2.3%(n=6)，回收率 97.1%(n=3)。
, 百拇医药
图1 当归提取液电泳图
2.2 讨论：①电泳条件的选择：缓冲溶液的组成 (包括pH) 是影响分离效果的重要因素。本文考察了 NaH2PO4-Na2HPO4及Na2HPO4-Na3PO4(pH5～9)和 Tris-H3BO3(不同浓度和配比)缓冲体系对当归提取液的分离效果。发现磷酸盐体系一方面因其电流较大，引起的热噪音也大，另一方面分离效果也欠佳。Tris-H3BO3 体系由于分子体积较大，有效电荷较小，所以其淌度很小，在较大的浓度下所产生的电流很小(只有2～6 μA)，因此其热噪音很低。实验结果表明，Tris∶H3BO3＝20∶80 mmol/L 时分离效果最好。用甲醛作中性标记物，研究了 CTAB 电渗流改向剂的最佳用量，发现其浓度大于 0.2 mmol/L 时电渗流改向，在0.6～0.9 mmol/L时，电渗流稳定。随着电压升高，分离效果变好。但超过-12 kV 时容易放电。
, 百拇医药
②检测条件的选择：制作了铂圆盘和碳糊圆盘微电极，它们响应差异不大，但铂电极使用寿命长，而且可以通过反向电压进行表面清洗。考察了不同检测电压的影响，发现在 0.4～0.9 V(vs. SCE)范围内信噪比最高。
致谢：中山大学化学系杨晓云博士和广东省药品检验所朱炳辉博士给予支持和帮助。
国家自然科学基金资助项目 (批准号 29675033)
陈缵光 中山医科大学化学教研室副教授，中山大学化学系博士研究生。曾参与国家自然科 学基金项目1项，主持广东省医药卫生项目1项，主持中山医科大学科研项目2项。已在国 内外发表研究论文16篇，参编高校教材2本，获中国专利12项。获第五届中国新技术新 产品博览会银奖，1994中国专利技术博览会金奖。
参考文献
1，尹钟洙，张凌云，徐理纳.药学学报，1980，15(6)：321
2，陈汉平，刘素香，李桂梅.中草药，1988，19(10)：15
3，Chen Z G,Mo J Y,Yang X Y, et al. Chin Chem Lett,1999,10(3):231
(1999-10-12收稿), 百拇医药
单位：陈缵光 张敏生(中山医科大学化学教研室 广州 510089)；莫金垣 蔡沛祥 吴海云(中山大学化学与工程学院)；张孔(中山医科大学第一附属医院)
关键词：毛细管电泳；当归；阿魏酸
中草药000713 摘 要 研究了用反向毛细管电泳分离测定当归中阿魏酸含量的条件。当归饮片用热水提取，电泳缓冲液为 Tris-H3BO3(20∶80 mmol/L)，并加入 0.8 mmol/L 的 CTAB 作为电渗流改向剂，分离电压为 -10.0 kV，用安培检测器检测。分析结果每克当归饮片含阿魏酸 0.415 mg，RSD 2.3 %，回收率为 97.1 %。
Determination of Ferulic Acid in the Root of Angelica sinensis
, 百拇医药
Chen Zuanguang
(Department of Chemistry, Sun Yat-sen University of Medical Sciences Guangzhou 510089)
Zhang Minsheng
(Department of Chemistry, Sun Yat-sen University of Medical Sciences Guangzhou 510089)
Mo Jinyuan
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University)
Cai Peixiang
, 百拇医药
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University)
Wu Haiyun
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University)
Zhang Kong
(First Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences)
Abstract Experimental conditions for the separation and determination of ferulic acid in the root of Angelica sinensis (Oliv.) Diels by capillary electrophoresis were studied. Sliced A. sinensis was extracted with hot water, and the ferulic acid in the extract was separated by capillary electrophoresis and detected by amperometric detector. Buffer consisted of 20 mmol/L of tris (hydroxymethyl) aminomethane and 80 mmol/L of boric acid. 0.8 mmol/L of cetyltrimethyl ammonium bromide was added as the counter electroosmotic flow agent. Separation voltage was -10.0 kV. Result of the study showed that 1 g of the dry herb contains 0.415 mg of ferulic acid (RSD=2.3%, γ=97.1%).
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Key words capillary electrophoresis Angelica sinensis (Oliv.) Diels ferulic acid
阿魏酸 (ferulic acid) 是中药当归 Angilica sinensis 重要的有效成分之一，具有抑制胶原和抑制血小板聚集作用[1]，溶于水。由于其含量较低，而且光度法分析存在干扰，因此一般用 HPLC 法进行测定[2]，但该法分析成本较高，且溶剂有一定毒性。
高效毛细管电泳 (HPCE) 以其分析效能高 (塔板数比 HPLC 高1～2 个数量级)、灵敏、运作成本低等特点，已用于药物分析，包括成药、原料、中草药成分测定。
本文研究了 HPCE 测定当归饮片中阿魏酸的分析条件。采用反向毛细管区带电泳的操作模式。由于阿魏酸在碱性条件下有效负电荷较大，正极进样、负极检测时保留时间较长，因此在缓冲液中加入了表面活性剂将电渗流改向，在负极进样，正极检测。由于阿魏酸含有酚羟基，可在较低的电位下用安培检测器检测。本文所用的仪器结构简单，成本低，但灵敏度较高。
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1 实验部分
1.1 仪器、试剂与材料：仪器：毛细管电泳仪 (自制)[3]、AD-2A 型极谱仪 (江苏金坛分析仪器厂)、XWT-264 型平台式自动平衡记录仪(上海大华仪表厂)、石英毛细管 (100 μm-id，河北永年光导纤维厂)。
试剂：三(羟甲基)氨基甲烷 (Tris)、十六烷基三甲基季胺溴 (CTAB)等试剂均为AR级，阿魏酸对照品 (773-92024，广东省药检所提供)。溶液均用二次蒸馏水配制。当归饮片(购自广州采芝林药店，产地甘肃)。
1.2 实验操作
1.2.1 电泳条件：毛细管长 70 cm，缓冲液：20 mmol/L Tris+80 mmol/L H3BO3+0.8 mmol/L CTAB(电渗流改向剂)，温度 28 ℃，负极进样，位差 30 cm 虹吸进样 10.0 s，分离电压 -10.0 kV，运行方向：负→正，正极检测。
, 百拇医药
1.2.2 检测条件：圆盘铂电极 (300 μm) 做工作电极，对准毛细管出口。极谱仪二电极系统检测，设定电压 0.6 V (vs. SCE)。
1.2.3 样品提取：将当归饮片干燥粉碎，过20目筛，称取 1.00 g，用水提取3次，每次加热回流 1 h，制成提取液 100.0 mL。提取液用 G4号坩埚式过滤器过滤。
2 结果与讨论
2.1 结果：①在设定的电泳条件下，当归的水提取液的电泳图如图1所示。经与对照品对照和用加入法比较，第4个峰为阿魏酸，保留时间为 10.48 min。②以阿魏酸对照品配制标准溶液，得到校正曲线的线性范围为 0.01～0.4 mg/mL。③测得当归饮片中阿魏酸的含量为 0.415 mg/g，RSD 2.3%(n=6)，回收率 97.1%(n=3)。
, 百拇医药
图1 当归提取液电泳图
2.2 讨论：①电泳条件的选择：缓冲溶液的组成 (包括pH) 是影响分离效果的重要因素。本文考察了 NaH2PO4-Na2HPO4及Na2HPO4-Na3PO4(pH5～9)和 Tris-H3BO3(不同浓度和配比)缓冲体系对当归提取液的分离效果。发现磷酸盐体系一方面因其电流较大，引起的热噪音也大，另一方面分离效果也欠佳。Tris-H3BO3 体系由于分子体积较大，有效电荷较小，所以其淌度很小，在较大的浓度下所产生的电流很小(只有2～6 μA)，因此其热噪音很低。实验结果表明，Tris∶H3BO3＝20∶80 mmol/L 时分离效果最好。用甲醛作中性标记物，研究了 CTAB 电渗流改向剂的最佳用量，发现其浓度大于 0.2 mmol/L 时电渗流改向，在0.6～0.9 mmol/L时，电渗流稳定。随着电压升高，分离效果变好。但超过-12 kV 时容易放电。
, 百拇医药
②检测条件的选择：制作了铂圆盘和碳糊圆盘微电极，它们响应差异不大，但铂电极使用寿命长，而且可以通过反向电压进行表面清洗。考察了不同检测电压的影响，发现在 0.4～0.9 V(vs. SCE)范围内信噪比最高。
致谢：中山大学化学系杨晓云博士和广东省药品检验所朱炳辉博士给予支持和帮助。
国家自然科学基金资助项目 (批准号 29675033)
陈缵光 中山医科大学化学教研室副教授，中山大学化学系博士研究生。曾参与国家自然科 学基金项目1项，主持广东省医药卫生项目1项，主持中山医科大学科研项目2项。已在国 内外发表研究论文16篇，参编高校教材2本，获中国专利12项。获第五届中国新技术新 产品博览会银奖，1994中国专利技术博览会金奖。
参考文献
1，尹钟洙，张凌云，徐理纳.药学学报，1980，15(6)：321
2，陈汉平，刘素香，李桂梅.中草药，1988，19(10)：15
3，Chen Z G,Mo J Y,Yang X Y, et al. Chin Chem Lett,1999,10(3):231
(1999-10-12收稿), 百拇医药