大黄游离蒽醌的制备与纯化
作者：袁倚盛 赵飞浪 谭力
单位：南京军区南京总医院 210002
关键词：大黄游离蒽醌；大孔树脂；大黄酸；大黄素
中草药000714摘 要 从中药大黄中提取总蒽醌(结合和游离2类)，经水解后用化学试剂或大孔树脂制备总游离蒽醌(含大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚)，进一步纯化得大黄酸和大黄素。
Preparation and Purification of Free Anthraquinones Extracted from Rheum
Yuan Yisheng
(Nanjing General Hospital of Nanjing-Command PLA Nanjing 210002)
, http://www.100md.com
Zhao Feilang
(Nanjing General Hospital of Nanjing-Command PLA Nanjing 210002)
Tan Li
(Nanjing General Hospital of Nanjing-Command PLA Nanjing 210002)
Abstract Total free anthraquinones extracted from Rheum palmatum Linn.was hydrolyzed with hydrochloric acid. The hydrolyzate was separated either with chemical reagents or on macroporus resin to obtain the total free anthraquinone (containing rhein, emodin, aloe-emodin, chrysophanal and physcion), which was further purified to obtain rhein and emodin.
, 百拇医药
Key words free anthraquinones extracted from Rheum macroporus resin rhein emodin
大黄为常用中药。研究表明，对肾功能有显著的药理临床作用[1～3]。大黄提取物能有效地延缓慢性肾衰的进展，同时发现大黄酸治疗糖尿病肾病[4]，大黄素治疗尿毒症[5]，均有良好的疗效。大黄的诸多制剂均以保存总蒽醌为目的[6，7]。本课题以总游离蒽醌作为大黄有效部位，研究了制备纯化工艺。
1 仪器与材料
P200型高效液相色谱仪(大连依利特公司)，FP800 型熔点仪(瑞士 Mettler 公司)，YWG C18柱(淮阴精细化工研究所)。大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚标准品(中国药品生物制品检定所)。703树脂(上海树脂厂)。
, 百拇医药
2 有效部位提取
市售掌叶大黄根茎湿润后切片，按 1 kg 大黄与 5 000 mL 的50%乙醇比例在室温下浸泡 24 h过滤；再用 2 000 mL 的 50%乙醇清洗，合并滤液，减压蒸馏至原液体积的1/2，得稀糖浆状物。按20体积的糖浆状物趁热加入 1 体积的浓 HCl，搅拌，放置 30 min。
2.1 化学试剂法：上之水解糖浆状物冷至室温转入提取罐内，用2倍糖浆体积的乙醚提取1次，静置，放出糖浆状物后用与乙醚等体积的5% KOH 提取1次。放出碱液，挥去残余乙醚，浓 HCl 调碱提取液的 pH 到2～3，生成黄色沉淀，静置，抽滤至干，反复用水洗至中性，干燥后为深黄色粉末，为总游离蒽醌。以生药大黄计，实验室得率 2.2%～2.8%，批量生产得率 1.8%～2.5%。
2.2 大孔树脂法：取 703 弱碱性大孔树脂水浸泡后装柱，柱床高为柱径的6倍，树脂重量与生药大黄重量之比为1∶3。10倍树脂体积的水过柱，20倍树脂体积的 1 mol/L NaOH 溶液过柱，10倍体积的水洗；10倍体积的 1 mol/L HCl 溶液过柱，10倍体积的水洗。上述过程重复1次。
, 百拇医药
上之水解糖浆状物用 5% KOH 调 pH 到9，过滤。滤液过处理好的树脂柱，弃去流出液，水洗柱近中性，乙醇-5% KOH(4∶1)洗脱至洗脱液近无色。收集洗脱液，蒸去乙醇后，用浓 HCl调 pH到2～3，有黄色沉淀，静置，抽滤至干，反复用水洗至中性，干燥后为深黄色粉末的总游离蒽醌，以生药计，得率2.8%～3.5%。
703树脂可反复使用。
3 有效成分(大黄酸和大黄素)的分离[8]
2.1项中的乙醚提取液首先用等体积的5% KHCO3溶液提取。KHCO3提取液加浓 HCl 直至有棕黄色沉淀生成，静置，过滤，水洗至中性，少量乙醇-丙酮(1∶1)洗涤，干燥，得深黄色粉状物的粗大黄酸，得率约为0.45%。在索氏提取器内用二氧六环回流提取大黄酸，直至提取液近无色，蒸出二氧六环至原体积的1/2，冷后有红棕色针状晶体析出，反复过滤，直至母液中无大黄酸析出，干燥后称重，大黄酸得率0.25%～0.35%。测得熔点 318 ℃～320 ℃，与大黄酸标准品一致。
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KHCO3提取后的乙醚液再用等体积的5% Na2CO3溶液提取，加浓 HCl 直至黄色沉淀生成，静置，过滤，水洗至中性，少量丙酮洗涤，干燥，得黄色粉末状的精制大黄素，得率约为 0.25%。氯仿反复重结晶后得深黄色针状体的大黄素，得率0.1～0.15%，mp 250 ℃～252 ℃，与大黄素标准品一致。
4 HPLC 分析
反相高效液相色谱法：10 μm YWG C18 柱 (4.6 mm×200 mm)；流动相为甲醇-水-氯仿-冰醋酸(500∶80∶25∶2)，流速 1.2 mL/min；紫外检测波长 254 nm。
标准品与待测样品均用甲醇-二氧六环(9∶1)配制，色谱图见图1。
图1 大黄游离蒽醌HPLC色谱图
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经测定所提取的总游离蒽醌中大黄酸 25.4%，大黄素13.1%，芦荟大黄素4.7%，大黄酚7.9%，大黄素甲醚2.9%。总药用有效部位为54.0%。
国家重点科技项目(攻关)(96-901-5-5-66)
袁倚盛 男，59岁，教授。1966年毕业于南京大学化学系，先后从事有机化学，植物化学， 生物化学以及仪器分析研究。任南京大学医学院和镇江医学院兼职教授。中国色谱学会副理 事长兼常务理事，全军药物分析专业委员会委员，江苏省色谱委员会副主任等职。出版专著 2本，国内外杂志发表学术论文50多篇。获军队医疗成果二等奖1项以及多项科技进步三、四 等奖。
参考文献
1，江苏新医学院.中药大辞典(上册).上海：上海人民出版社，1975：179
2，曹元成.中药材，1990，13(11)：47
, 百拇医药
3，刘庆增.中草药，1987，18(1)：41
4，黎磊石.发明专利公报，1998，14(18)：36
5，刘志红，黎磊石，胡伟新，等.肾脏病与透析肾移植杂志，1992，1(1)：27
6，郝淑清，王汝龙，何丽一.中草药，1984，15(2)：15
7，万海龙.中成药研究，1984，增(1)：17
8，袁倚盛，赵飞浪.发明专利公报，1999，15(4)：33
(1999-08-30收稿), http://www.100md.com
单位：南京军区南京总医院 210002
关键词：大黄游离蒽醌；大孔树脂；大黄酸；大黄素
中草药000714摘 要 从中药大黄中提取总蒽醌(结合和游离2类)，经水解后用化学试剂或大孔树脂制备总游离蒽醌(含大黄素、大黄酸、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚)，进一步纯化得大黄酸和大黄素。
Preparation and Purification of Free Anthraquinones Extracted from Rheum
Yuan Yisheng
(Nanjing General Hospital of Nanjing-Command PLA Nanjing 210002)
, http://www.100md.com
Zhao Feilang
(Nanjing General Hospital of Nanjing-Command PLA Nanjing 210002)
Tan Li
(Nanjing General Hospital of Nanjing-Command PLA Nanjing 210002)
Abstract Total free anthraquinones extracted from Rheum palmatum Linn.was hydrolyzed with hydrochloric acid. The hydrolyzate was separated either with chemical reagents or on macroporus resin to obtain the total free anthraquinone (containing rhein, emodin, aloe-emodin, chrysophanal and physcion), which was further purified to obtain rhein and emodin.
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大黄为常用中药。研究表明，对肾功能有显著的药理临床作用[1～3]。大黄提取物能有效地延缓慢性肾衰的进展，同时发现大黄酸治疗糖尿病肾病[4]，大黄素治疗尿毒症[5]，均有良好的疗效。大黄的诸多制剂均以保存总蒽醌为目的[6，7]。本课题以总游离蒽醌作为大黄有效部位，研究了制备纯化工艺。
1 仪器与材料
P200型高效液相色谱仪(大连依利特公司)，FP800 型熔点仪(瑞士 Mettler 公司)，YWG C18柱(淮阴精细化工研究所)。大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚标准品(中国药品生物制品检定所)。703树脂(上海树脂厂)。
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2 有效部位提取
市售掌叶大黄根茎湿润后切片，按 1 kg 大黄与 5 000 mL 的50%乙醇比例在室温下浸泡 24 h过滤；再用 2 000 mL 的 50%乙醇清洗，合并滤液，减压蒸馏至原液体积的1/2，得稀糖浆状物。按20体积的糖浆状物趁热加入 1 体积的浓 HCl，搅拌，放置 30 min。
2.1 化学试剂法：上之水解糖浆状物冷至室温转入提取罐内，用2倍糖浆体积的乙醚提取1次，静置，放出糖浆状物后用与乙醚等体积的5% KOH 提取1次。放出碱液，挥去残余乙醚，浓 HCl 调碱提取液的 pH 到2～3，生成黄色沉淀，静置，抽滤至干，反复用水洗至中性，干燥后为深黄色粉末，为总游离蒽醌。以生药大黄计，实验室得率 2.2%～2.8%，批量生产得率 1.8%～2.5%。
2.2 大孔树脂法：取 703 弱碱性大孔树脂水浸泡后装柱，柱床高为柱径的6倍，树脂重量与生药大黄重量之比为1∶3。10倍树脂体积的水过柱，20倍树脂体积的 1 mol/L NaOH 溶液过柱，10倍体积的水洗；10倍体积的 1 mol/L HCl 溶液过柱，10倍体积的水洗。上述过程重复1次。
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上之水解糖浆状物用 5% KOH 调 pH 到9，过滤。滤液过处理好的树脂柱，弃去流出液，水洗柱近中性，乙醇-5% KOH(4∶1)洗脱至洗脱液近无色。收集洗脱液，蒸去乙醇后，用浓 HCl调 pH到2～3，有黄色沉淀，静置，抽滤至干，反复用水洗至中性，干燥后为深黄色粉末的总游离蒽醌，以生药计，得率2.8%～3.5%。
703树脂可反复使用。
3 有效成分(大黄酸和大黄素)的分离[8]
2.1项中的乙醚提取液首先用等体积的5% KHCO3溶液提取。KHCO3提取液加浓 HCl 直至有棕黄色沉淀生成，静置，过滤，水洗至中性，少量乙醇-丙酮(1∶1)洗涤，干燥，得深黄色粉状物的粗大黄酸，得率约为0.45%。在索氏提取器内用二氧六环回流提取大黄酸，直至提取液近无色，蒸出二氧六环至原体积的1/2，冷后有红棕色针状晶体析出，反复过滤，直至母液中无大黄酸析出，干燥后称重，大黄酸得率0.25%～0.35%。测得熔点 318 ℃～320 ℃，与大黄酸标准品一致。
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KHCO3提取后的乙醚液再用等体积的5% Na2CO3溶液提取，加浓 HCl 直至黄色沉淀生成，静置，过滤，水洗至中性，少量丙酮洗涤，干燥，得黄色粉末状的精制大黄素，得率约为 0.25%。氯仿反复重结晶后得深黄色针状体的大黄素，得率0.1～0.15%，mp 250 ℃～252 ℃，与大黄素标准品一致。
4 HPLC 分析
反相高效液相色谱法：10 μm YWG C18 柱 (4.6 mm×200 mm)；流动相为甲醇-水-氯仿-冰醋酸(500∶80∶25∶2)，流速 1.2 mL/min；紫外检测波长 254 nm。
标准品与待测样品均用甲醇-二氧六环(9∶1)配制，色谱图见图1。
图1 大黄游离蒽醌HPLC色谱图, http://www.100md.com
经测定所提取的总游离蒽醌中大黄酸 25.4%，大黄素13.1%，芦荟大黄素4.7%，大黄酚7.9%，大黄素甲醚2.9%。总药用有效部位为54.0%。
国家重点科技项目(攻关)(96-901-5-5-66)
袁倚盛 男，59岁，教授。1966年毕业于南京大学化学系，先后从事有机化学，植物化学， 生物化学以及仪器分析研究。任南京大学医学院和镇江医学院兼职教授。中国色谱学会副理 事长兼常务理事，全军药物分析专业委员会委员，江苏省色谱委员会副主任等职。出版专著 2本，国内外杂志发表学术论文50多篇。获军队医疗成果二等奖1项以及多项科技进步三、四 等奖。
参考文献
1，江苏新医学院.中药大辞典(上册).上海：上海人民出版社，1975：179
2，曹元成.中药材，1990，13(11)：47
, 百拇医药
3，刘庆增.中草药，1987，18(1)：41
4，黎磊石.发明专利公报，1998，14(18)：36
5，刘志红，黎磊石，胡伟新，等.肾脏病与透析肾移植杂志，1992，1(1)：27
6，郝淑清，王汝龙，何丽一.中草药，1984，15(2)：15
7，万海龙.中成药研究，1984，增(1)：17
8，袁倚盛，赵飞浪.发明专利公报，1999，15(4)：33
(1999-08-30收稿), http://www.100md.com