急性髓系白血病细胞粘附分子Mac-1、LFA-1、L-选择素的表达及其临床意义
作者：童秀珍 洪文德 罗绍凯 彭爱华 陈运贤
单位：510080 广州，中山医科大学附属第一医院血液科
关键词：
中华血液学杂志000717 有研究表明，急性髓系白血病(AML)细胞表面有多种粘附分子表达的异常，早期造血前体细胞粘附分子CD49、CD56、CD44的改变，与白血病发生、发展有关[1] 。但晚期髓系造血细胞的粘附分子β整合素巨噬细胞分子-1(Mac-1)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)及选择蛋白L-选择素(L-Selectin)在AML细胞的表达情况报道较少。我们对25例AML患者及20名正常人Mac-1、LFA-1、L-选择素表达进行检测，分析其表达特征及与临床及化疗的关系，现将结果报道如下。
病例和方法
, 百拇医药
1 病例选择 初诊AML 25例，年龄18～60岁，男13例，女12例。其中M1 3例，M2 6例，M3 2例，M4 6例，M5 7例，M6 1例，经形态及组化染色确诊。正常人20名，男11名，女9名，年龄20～40岁。
2 化疗 AML患者大多用MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)方案，M4及M5患者在MA方案基础上加用足叶乙甙(Vp16)诱导化疗，缓解后以原方案或HA(高三尖杉酯碱+阿糖胞苷)、DA(柔红霉素+阿糖胞苷)等方案交替巩固化疗。AML-M3部分用全反式维甲酸诱导缓解，3个疗程后评定疗效。
3 细胞株 HL-60、U937、K562细胞株均由我校肿瘤研究所提供。
4 主要试剂 Mac-1、LFA-1、L-选择素单克隆抗体购于美国Gibco公司，荧光标记的羊抗鼠IgG购于武汉生物技术研究所。
, 百拇医药
5 单个核细胞的制备 按本实验室常规，抽取正常人和AML患者的骨髓3ml，肝素抗凝，淋巴细胞分离液密度梯度离心20min，收集单个核细胞层，用PBS洗涤2次。涂片染色显示AML患者的单个核细胞中原始细胞>0.95，将细胞浓度调至5×106/ml,用于免疫荧光分析。
6 免疫荧光分析 参考文献[2]方法。计数200个AML细胞，计算荧光阳性率。患者荧光阳性率与对照组的比值≤20%为粘附分子表达下降标准。
7 统计学处理 χ2检验及t检验、F检验。
结果
1 AML细胞不同粘附分子的表达 与正常人相比，AML细胞Mac-1、L-选择素表达均明显下降(表1)。25例AML患者中Mac-1表达下降者达100%，L-选择素表达下降者占50%。而LFA-1在AML细胞中的荧光阳性率与正常人相比差异无显著性(P>0.05)，表达下降患者只占20%。
, 百拇医药
表1 AML患者白血病细胞粘附分子的表达 组别
例数
荧光阳性率(%)
LFA-1
Mac-1
L-选择素
AML组
25
60.83±21.39
14.00±8.08
16.17±7.66
正常对照
, 百拇医药
20
94.40±3.01
37.80±5.22
45.82±5.41
P值
>0.05
<0.001
<0.05
2 HL-60、U937、K562细胞株粘附分子的表达 AML不同类型细胞株K562、U937、HL-60粘附分子Mac-1、L-选择素表达均明显低于正常人，HL-60细胞两种粘附分子的表达低于U937细胞和K562细胞(P<0.05)，而K562细胞LFA-1的表达则明显低于HL-60和U937细胞(图1)。
, 百拇医药
图1 不同类型细胞株粘附分子的表达
3 AML患者某些临床特征与Mac-1、LFA-1、L-选择素表达的关系 比较Mac-1、LFA-1、L-选择率表达下降患者与表达正常患者的性别，年龄，就诊时血红蛋白、白细胞、血小板水平等，结果差异无显著性(P>0.05)。
4 AML患者临床疗效与Mac-1、LFA-1、L-选择素异常表达的关系 表2显示Mac-1荧光阳性率缓解组明显高于未缓解组(P<0.01)。 L-选择素在缓解组的表达高于未缓解组及部分缓解组(P<0.05)。而LFA-1三组间比较差异无显著性。
表2 AML患者临床疗效与粘附分子表达关系 组别
例数
荧光阳性率(%)
, 百拇医药 LFA-1
Mac-1
L-选择素
NR
8
55.73±29.61
8.31±3.88＃
18.20±13.06*
PR
5
50.72±20.01
20.04±6.10
, http://www.100md.com
25.04±8.90*
CR
12
64.30±8.93
30.30±7.20
57.72±18.26
注： 与CR组比较，*P<0.05,#P<0.015 粘附分子的动态变化 动态观察10例AML患者粘附分子表达情况发现，化疗达CR后Mac-1表达均升至正常范围。4例患者复发时其Mac-1表达又下降。10例L-选择素表达下降者，化疗达CR后，8例表达升至正常范围。而LFA-1则无明显改变。
讨论
粘附分子LFA-1、Mac-1属整合素β1、β2亚家族，主要表达于晚期髓系前体细胞。L-选择素属选择蛋白类，可在单个核细胞上表达。本资料结果显示：100%的AML患者，其白血病细胞Mac-1的表达低于正常人，50%的AML患者L-选择素表达明显下降，而LFA-1只有20%的患者表达下降。表明AML细胞表面存在多个粘附分子异常表达。推测粘附分子表达下降有助于造血细胞脱离基质细胞的正常调控，形成恶性细胞克隆。
, 百拇医药
我们的资料显示Mac-1、L-选择素在HL-60细胞的表达低于U937、K562细胞，LFA-1在K562细胞的表达明显高于HL-60、U937细胞。提示检测粘附分子的表达有助于白血病分型。
本资料还显示Mac-1、L-选择素在完全缓解组的荧光阳性率高于未缓解组，Mac-1下降的患者化疗达完全缓解后，Mac-1、L-选择素的表达可升至正常范围。提示检测粘附分子Mac-1、L-选择素的改变可预示化疗疗效。
基金项目：广东省卫生厅基金资助项目(A1999146)
参 考 文 献
1，Reuss-Borst MA, Klein G, Waller HD, et al. Differential expression of adhesion molecules in acute leukemia. Leukemia, 1995, 9: 869-874.
2，Tatsumi T, Shimazaki C, Goto H, et al. Expression of adhesion molecules on myeloma cells. Jpn J Cancer Res, 1996,87: 837-842.
(收稿日期：1999-10-07), http://www.100md.com
单位：510080 广州，中山医科大学附属第一医院血液科
关键词：
中华血液学杂志000717 有研究表明，急性髓系白血病(AML)细胞表面有多种粘附分子表达的异常，早期造血前体细胞粘附分子CD49、CD56、CD44的改变，与白血病发生、发展有关[1] 。但晚期髓系造血细胞的粘附分子β整合素巨噬细胞分子-1(Mac-1)、淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)及选择蛋白L-选择素(L-Selectin)在AML细胞的表达情况报道较少。我们对25例AML患者及20名正常人Mac-1、LFA-1、L-选择素表达进行检测，分析其表达特征及与临床及化疗的关系，现将结果报道如下。
病例和方法
, 百拇医药
1 病例选择 初诊AML 25例，年龄18～60岁，男13例，女12例。其中M1 3例，M2 6例，M3 2例，M4 6例，M5 7例，M6 1例，经形态及组化染色确诊。正常人20名，男11名，女9名，年龄20～40岁。
2 化疗 AML患者大多用MA(米托蒽醌+阿糖胞苷)方案，M4及M5患者在MA方案基础上加用足叶乙甙(Vp16)诱导化疗，缓解后以原方案或HA(高三尖杉酯碱+阿糖胞苷)、DA(柔红霉素+阿糖胞苷)等方案交替巩固化疗。AML-M3部分用全反式维甲酸诱导缓解，3个疗程后评定疗效。
3 细胞株 HL-60、U937、K562细胞株均由我校肿瘤研究所提供。
4 主要试剂 Mac-1、LFA-1、L-选择素单克隆抗体购于美国Gibco公司，荧光标记的羊抗鼠IgG购于武汉生物技术研究所。
, 百拇医药
5 单个核细胞的制备 按本实验室常规，抽取正常人和AML患者的骨髓3ml，肝素抗凝，淋巴细胞分离液密度梯度离心20min，收集单个核细胞层，用PBS洗涤2次。涂片染色显示AML患者的单个核细胞中原始细胞>0.95，将细胞浓度调至5×106/ml,用于免疫荧光分析。
6 免疫荧光分析 参考文献[2]方法。计数200个AML细胞，计算荧光阳性率。患者荧光阳性率与对照组的比值≤20%为粘附分子表达下降标准。
7 统计学处理 χ2检验及t检验、F检验。
结果
1 AML细胞不同粘附分子的表达 与正常人相比，AML细胞Mac-1、L-选择素表达均明显下降(表1)。25例AML患者中Mac-1表达下降者达100%，L-选择素表达下降者占50%。而LFA-1在AML细胞中的荧光阳性率与正常人相比差异无显著性(P>0.05)，表达下降患者只占20%。
, 百拇医药
表1 AML患者白血病细胞粘附分子的表达 组别
例数
荧光阳性率(%)
LFA-1
Mac-1
L-选择素
AML组
25
60.83±21.39
14.00±8.08
16.17±7.66
正常对照
, 百拇医药
20
94.40±3.01
37.80±5.22
45.82±5.41
P值
>0.05
<0.001
<0.05
2 HL-60、U937、K562细胞株粘附分子的表达 AML不同类型细胞株K562、U937、HL-60粘附分子Mac-1、L-选择素表达均明显低于正常人，HL-60细胞两种粘附分子的表达低于U937细胞和K562细胞(P<0.05)，而K562细胞LFA-1的表达则明显低于HL-60和U937细胞(图1)。
, 百拇医药
图1 不同类型细胞株粘附分子的表达
3 AML患者某些临床特征与Mac-1、LFA-1、L-选择素表达的关系 比较Mac-1、LFA-1、L-选择率表达下降患者与表达正常患者的性别，年龄，就诊时血红蛋白、白细胞、血小板水平等，结果差异无显著性(P>0.05)。
4 AML患者临床疗效与Mac-1、LFA-1、L-选择素异常表达的关系 表2显示Mac-1荧光阳性率缓解组明显高于未缓解组(P<0.01)。 L-选择素在缓解组的表达高于未缓解组及部分缓解组(P<0.05)。而LFA-1三组间比较差异无显著性。
表2 AML患者临床疗效与粘附分子表达关系 组别
例数
荧光阳性率(%)
, 百拇医药 LFA-1
Mac-1
L-选择素
NR
8
55.73±29.61
8.31±3.88＃
18.20±13.06*
PR
5
50.72±20.01
20.04±6.10
, http://www.100md.com
25.04±8.90*
CR
12
64.30±8.93
30.30±7.20
57.72±18.26
注： 与CR组比较，*P<0.05,#P<0.015 粘附分子的动态变化 动态观察10例AML患者粘附分子表达情况发现，化疗达CR后Mac-1表达均升至正常范围。4例患者复发时其Mac-1表达又下降。10例L-选择素表达下降者，化疗达CR后，8例表达升至正常范围。而LFA-1则无明显改变。
讨论
粘附分子LFA-1、Mac-1属整合素β1、β2亚家族，主要表达于晚期髓系前体细胞。L-选择素属选择蛋白类，可在单个核细胞上表达。本资料结果显示：100%的AML患者，其白血病细胞Mac-1的表达低于正常人，50%的AML患者L-选择素表达明显下降，而LFA-1只有20%的患者表达下降。表明AML细胞表面存在多个粘附分子异常表达。推测粘附分子表达下降有助于造血细胞脱离基质细胞的正常调控，形成恶性细胞克隆。
, 百拇医药
我们的资料显示Mac-1、L-选择素在HL-60细胞的表达低于U937、K562细胞，LFA-1在K562细胞的表达明显高于HL-60、U937细胞。提示检测粘附分子的表达有助于白血病分型。
本资料还显示Mac-1、L-选择素在完全缓解组的荧光阳性率高于未缓解组，Mac-1下降的患者化疗达完全缓解后，Mac-1、L-选择素的表达可升至正常范围。提示检测粘附分子Mac-1、L-选择素的改变可预示化疗疗效。
基金项目：广东省卫生厅基金资助项目(A1999146)
参 考 文 献
1，Reuss-Borst MA, Klein G, Waller HD, et al. Differential expression of adhesion molecules in acute leukemia. Leukemia, 1995, 9: 869-874.
2，Tatsumi T, Shimazaki C, Goto H, et al. Expression of adhesion molecules on myeloma cells. Jpn J Cancer Res, 1996,87: 837-842.
(收稿日期：1999-10-07), http://www.100md.com