Caspase-8、caspase-3与Fas介导凋亡信号传导及其在肝癌细胞凋亡中的作用
作者：杨连粤 易彤波
单位：杨连粤(湖南医科大学附属湘雅医院 410008)；易彤波(广西桂林医学院附属医院)
关键词：
中国现代医学杂志000813 肝癌组织中高度增生和高度凋亡经常并存，后者在肝癌发生、发展过程中起重要作用。已知有多种死亡受体介导肝癌细胞凋亡信号传导，Fas即是重要的一种[1]。Fas介导凋亡信号传导的分子机制十分复杂。一般认为，细胞死亡机器包括激活子、效应子和抑制子[2]。对于Fas介导细胞调亡信号传导研究表明，caspase-8、caspase-3参与了Fas介导凋亡信号传导，且对于肝癌细胞凋亡有重要调控效应作用。本文就此作一简要综述。
1 Caspase-8、caspase-3特性与Fas介导凋亡的信号传导
, 百拇医药
Caspase-8、caspase-3归类于ICE/CED3蛋白酶家族。因为它们都是半胱氨酸蛋白酶，且在天冬氨酸(ASP)后切割肽键，故已被统一命名为caspase(即切割Asp后肽腱的半胱氨酸蛋白酶)[3]。caspase后的阿拉伯数字代表命名发表日期的先后，相应基因用CASP表示。caspase通常以单一多肽酶原形式存在，含有一个N端前域及一大一小两个亚单位。caspase酶原在其内部保守的天冬氨酸残基位点经蛋白水解激活，激活的caspase通常又可作用其自身和其它caspase酶原，按顺序依次激活caspase，形成信号传导机制的酶级联反应。基于caspase N端前域长度，caspase-8有较长的前域，参与打靶和激活调控，称调控caspase。caspase-3含有较短前域，在级联反应下游操作底物酶切，在功能上作为凋亡的效应子，故称为效应caspase[4]。Fas属于肿瘤坏死因子受体/神经生长因子受体(TNFR/NGFR)家族，是Ⅰ型跨膜受体蛋白，其胞外区含有特征性的3个半胱氨酸重复序列，胞浆区含有一个由80个氨基酸组成的“死亡结构域”(death domain,DD)和由15个氨基酸组成的C端拯救域。Fas介导细胞凋亡，至少要具备3个条件：细胞表达功能性Fas受体；Fas与FasL(Fas Ligand)结合或Fas与其抗体交联成三聚体；胞内凋亡拮抗程度关闭[5]。已知Fas胞浆死亡结构域对于启动细胞内死亡程度是必要的。但Fas胞浆区不含有与某些酶功能的同源序列或与一些信号分子结合的部位，提示凋亡信号传导需由其它信号传导分子完成。研究证实FADD(Fas-associated death domain)[6]具有向下传导Fas凋亡信号的作用。Kischkel等[7]发现4种细胞毒Apo-1依赖的结合蛋白，即CAP1-4(cytotoxicity-dependent Apo-1-associated protein)。经鉴定CAP1、CAP2为丝氨酸磷酸化的FADD，CAP4为caspase-8，CAP3是代表caspase-8 N末端的蛋白部分，这四个相关的蛋白与Fas的DD结合成死亡诱导信号复合体(death-inducing signaling complex,DISC)。DISC的形成被当作是Fas介导凋亡信号传导的一个重要事件。作为中介的FADD通过其C-端死亡域与Fas胞浆C-端死亡域相互作用暴露FADDN-端死亡效应域，而死亡效应域也存在于caspase-8的N-末端前域。诱变研究表明，FADD和caspase-8的死亡效应域间相互作用募集这些蛋白酶到DISC，进而将死亡信号从受体传递给caspase家族成员。Medema等[8]研究认为caspase-8激活与DISC形成及在caspase-8特异部位蛋白酶切形成caspase-8自身激活。caspase-3是Fas介导死亡信号途径下游1个关键效应组分[9]。该酶可能被caspase-8、caspase-10或其它caspase水解形成活性酶形式。Takahashi等[10]研究认为caspase-3酶原主要是经caspase-8水解而成活性酶形式。进一步研究发现CAD通过与ICAD紧密结合，以失活的形式隔离于胞浆。只有当死亡信号从DISC传递到caspase，引发caspase酶促级联反应，活化的caspase-3酶切ICAD上的第117、224两个氨基酸位点，从而使CAD从ICAD：CAD复合体中解离出来，CAD才被活化进入细胞核内降解染色质DNA，从而导致细胞凋亡。
, 百拇医药
2 Fas在介导肝癌细胞凋亡中的作用
Fas属于TNFR/NGFR死亡受体超家族成员，是一种触发凋亡的蛋白质。Higaki等[11]发现肝细胞癌组织的凋亡进展与Fas的表达有关。他们研究了25个肝细胞癌组织和与其相关的非癌组织，发现大部分的非癌组织标本的细胞表面和胞质都表达Fas，而大多数的肝细胞癌只有胞质表达Fas。在表达Fas的组织中，细胞表面表达Fas的组织凋亡细胞计数高于胞质表达的组织。并且当癌细胞分化水平低或生物学特性更为恶性时，肝癌细胞表面的Fas表达较差，凋亡发生率低。这提示低分化或高度恶性的肝癌细胞能逃避Fas介导的凋亡。Strand等[12]发现肝肿瘤细胞能通过下调其表面CD95(Fas/Apo-1)受体表达和通过FasL的表达杀死细胞毒性T淋巴细胞进而逃避Fas介导的凋亡。为此有人试图用Fas介导的凋亡来诱导活体肿瘤细胞凋亡。在体外试验中，鼠肝癌MH134(Fas-)被转染鼠Fas抗原cDNA，Fas+肝癌细胞在体外经抗Fas抗体处理后可发生凋亡；体内试验中用双突变鼠(同时缺乏Fas和FasL鼠)避免抗体对肝脏的细胞毒活性以及内源性FasL的干预，探讨抗Fas抗体清除体内肿瘤细胞的可能性，结果表明抗Fas抗体能有效地抑制Fas+肝肿瘤的生长，而不能抑制Fas-肝肿瘤生长[13]。Müller等[14]发现HepG2(携带野生型p53的肝癌细胞)对于Fas介导的凋亡敏感性高于HuH7(带有突变p53的肝癌细胞)和Hep3B(p53阴性的肝癌细胞)。争光霉素处理过的HePG2能增加FasL的mRNA表达从而使其细胞表面Fas表达上调，而且争光霉素诱导HepG2肝癌细胞凋亡能被干扰Fas/FasL反应的抗体抑制。研究表明，争光霉素诱导的凋亡至少部分由于依赖p53的Fas/FasL系统介导。Jiang等[15]通过使用5-Fu、cisplatin诱导5种肝癌细胞株(HepG2、HepG2.2.15、HeP3B、SK-Hep-1、PLC/PRF/5)凋亡研究发现，HePG2、HePG2.2.15、SK-Hep-1 3种肝癌细胞用5-Fu或cisplatin处理后可使细胞表面Fas表达增加，抗Fas抗体可增强5-Fu和cisplatin诱导的凋亡，且用抗一抗Fas抗体可使药物诱导HepG2细胞凋亡受到抑制。Hep3B、PLC/PRF/5经药物处理后无法检测到细胞Fas表达，而Hep3B、PLC/PRF/5同样发生凋亡，大量研究发现Fas并非是通过细胞毒性药物作用肝癌细胞后细胞中表达上调的唯一基因产物。同时检测到用5-Fu和cisplatin处理后TNFR、FADD、DR3(death receptor3)表达也增加，提示肝癌细胞凋亡存在依赖Fas途径和非Fas途径。
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3 Caspase-8、caspase-3在Fas介导肝癌细胞凋亡中的作用
Medema等[8]研究认为肝癌细胞依赖Fas凋亡中，caspase-8参与Fas介导肝癌细胞凋亡信号传导，通过与Fas系统形成DISC，使得caspase-8在DISC水平上自身激活，进而促发ICE/CED3蛋白酶级联反应，特别是caspase-3活化，进而酶切ICAD，从而使CAD被活化进入细胞核内降解染色质DNA，形成凋亡细胞所具有的特征性DNA片段。caspase-8抑制剂IETD-fmk和caspase-3抑制剂DEVD-CHO能抑制Fas介导的凋亡，而ICE抑制剂YVAD-CHO则不能，提示caspase-8、caspase-3参与了Fas介导的肝癌细胞凋亡，而非ICE参与。Hasegawa等[16]研究发现了Fas介导肝癌细胞凋亡过程中，caspase-3活性增高，caspase-3抑制剂DEVD-CHO能抑制caspase-3活化从而抑制Fas介导的凋亡。而ICE抑制剂YVAD-CHO则不能抑制Fas介导的细胞凋亡。Ruggieri等[17]研究发现Fas介导了表达丙肝病毒核心蛋白的HepG2肝癌细胞凋亡，且caspase-3抑制剂DEVD-CHO能抑制凋亡，而ICE抑制剂YVAD-CHO则不能抑制凋亡的发生，表明caspase-3在此过程中发挥重要作用，而不是ICE本身。Suzuki等[18]研究证明在Fas介导的人肝癌细胞凋亡中，X染色体连锁凋亡抑制剂能直接抑制活化的caspase-3，从而抑制Fas介导的凋亡。p21直接与caspase-3前体结合形成caspase-3前体/p21复合物，抑制caspase-3的激活从而抑制Fas介导的凋亡。
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4 Caspase-8、caspase-3和Fas在肝癌治疗中的潜在作用
目前研究表明肝癌过度增长以及对于宿主免疫监视的逃避与Fas/FasL系统密切相关[19]。肝癌细胞能通过下调其表面Fas受体表达和通过表达Fas配体而杀死细胞毒性T淋巴细胞从而逃避宿主机体免疫攻击。研究显示许多化疗药物治疗肝癌是通过Fas介导的凋亡信号传导通路而起作用的。caspase-8、caspase-3作为Fas介导肝癌细胞凋亡信号中的调控性和效应性caspase，在肝癌细胞依赖Fas介导凋亡途径中发挥着重要作用。因而对caspase-8、caspase-3和Fas介导的信号传导的研究将为我们治疗肝癌提供新的启示，可利用已知的调节肝癌细胞表面Fas表达的物质，积极寻找新的促进Fas表达药物或转基因使Fas-肝肿瘤转变成Fas+肝肿瘤，通过调节肝癌细胞凋亡，为肝肿瘤治疗提供新方法和新途径。而且亦可考虑利用caspase-8、caspase-3在肝癌细胞凋亡中的作用，强化凋亡信号传导，促进肝癌治疗效果的提高。
, 百拇医药
5 结语
肝癌细胞凋亡在肝癌发生、发展中起着重要作用。目前对Fas介导凋亡信号传导分子机制研究有了很大进展，caspase-8、caspase-3在肝癌细胞依赖Fas介导的凋亡中发挥着重要的调控作用，研究证实肝癌细胞凋亡存在非Fas死亡受体介导途径，进一步研究caspase各成员在凋亡促酶促级联反应中的先后顺序以及非Fas其它死亡受体与caspase在肝癌凋亡中的作用及其分子机制，对于肝癌的防治有重要理论与实际意义。
本研究为湖南省科委重点资助课题(98SSY1008)
参 考 文 献
1，Hamazaki,Gochi A,Matsubara N,et al.Expression of Fas antigen and Bcl-2 protein in hepatocellular carcinoma.Acta Med Okayama,1995;49:227～230
, http://www.100md.com
2，Hu SM,Vincenz C,Ni J,et al.I-FLICE.a novel inhibitor of tumor necrosis factor receptor-1 and CD95-induced apoaptosis.J Biol Chem,1997;272:17255
3，Alnemri ES,Livingston DJ,Nicholson DW,et al.Human ICE/CED-3 protease nomenclature.Cell,1996;87:171
4，Villa P,Kaufmann SH,Earnshaw WC,Caspase and Caspase inhibitors.TIBS,1997;22:388～393
5，Peter ME,Krammer PH.Mechanisms of CD95(Apo-1/Fas)-mediated apoptosis.Curr Opin lmmunol,1998;10:545～551
, http://www.100md.com
6，Chinnaiyan AM,O'pourke K,Tewari M,et al.FADD,a novel death domain-containing protein.Cell,1995;81:505～512
7，Kischkel FC,Hellbardt S,Behrmann L,et al.Cytotoxicity dependent Apo-1(Fas/CD95)-associated proteins form a death-inducing signaling complex(DISC)with the receptor.EMBO J,1995;14:5579～5588
8，Medema JP,Scaffidi C,Kischkel FC,et al.FLICE is activated by association with the CD95 death-inducing signaling complex(DISC).EMBO J,1997;16:2794～2804
, http://www.100md.com
9，Cryns V,Yuan J.Protease to die for.Genes & Dev,1998;12:1551～1570
10，Takahashi A,Hirata H,Yonehara S,et al.Affinity labeling displays the stepwise activation of ICE-related proteases by Fas,staurosporine,and CrmA sensitive Caspase-8.Oncogene,1997;14:2741～2752
11，Higaki K,Yano H,Kijiro M.Fas antigen expresion and its relatioship with apoptosis in human hepatocelluar carcinoma and noncancerous tissues.Am J Patol,1996;149:429～437
, 百拇医药
12，Strand S,Hofmann WJ,Hug H,et al.Lymphocyte apoptosis induced by CD95(APO-1/Fas)ligand-expressing tumor immune escape.Science,1996;274:1363～1366
13，Shimizu M,Yoshimoto T,Nagata S,et al.A trial to kill tumor cells through Fas(CD95)-mediated apoptosis in Vivo.Biochem Biophys Res Commun,1996;228:375～379
14，Müller M,Strand S,Hug H,et al.Drug-induced apoptosis in hepatoma cells is mediated by the CD95(Apo-1/Fas)receptor/system and involves activation of wild-type p53.J Clin lnvest,1997;99:403～413
, http://www.100md.com
15，Jiang S,Song MJ,Shin E-C,et al.Apoptosis in human hepatoma cell lines by chemotherapeutic drugs via Fasdependent and Fas-independent pathways.Hepatology,1999;29:101～110
16，Hasegawa J,Kamada S,Kamijke W,et al.lnvolvement of CPP32/Yama(-like) protease in Fas-mediated apoptosis.Cancer Res,1996;56:1713～1718
17，Ruggieri A,Haradea T,Matsuura Y,et al.Senstitization to Fasmediated apoptosis by hepatitis C virus core protein.Virology,1997;229:68～76
, http://www.100md.com
18，Suzuki A,Tsutomi Y,Akahane K,et al.Resistance to Fas-mediated apoptosis:activation of caspase-3 is regulated by cell cycle regulator p21WAF1 and IAP gene family ILP.Oncogene,1998;17:931～939
19，Nagao M,Nakajima Y,Hisanaga M,et al.The alteration of Fas receptor and ligand system in hepatocellular carcinomas:How do hepatoma cells escape from the host immune surveillance in vivo?Hepatology,1999;30:413～421
收稿：2000-02-20, http://www.100md.com
单位：杨连粤(湖南医科大学附属湘雅医院 410008)；易彤波(广西桂林医学院附属医院)
关键词：
中国现代医学杂志000813 肝癌组织中高度增生和高度凋亡经常并存，后者在肝癌发生、发展过程中起重要作用。已知有多种死亡受体介导肝癌细胞凋亡信号传导，Fas即是重要的一种[1]。Fas介导凋亡信号传导的分子机制十分复杂。一般认为，细胞死亡机器包括激活子、效应子和抑制子[2]。对于Fas介导细胞调亡信号传导研究表明，caspase-8、caspase-3参与了Fas介导凋亡信号传导，且对于肝癌细胞凋亡有重要调控效应作用。本文就此作一简要综述。
1 Caspase-8、caspase-3特性与Fas介导凋亡的信号传导
, 百拇医药
Caspase-8、caspase-3归类于ICE/CED3蛋白酶家族。因为它们都是半胱氨酸蛋白酶，且在天冬氨酸(ASP)后切割肽键，故已被统一命名为caspase(即切割Asp后肽腱的半胱氨酸蛋白酶)[3]。caspase后的阿拉伯数字代表命名发表日期的先后，相应基因用CASP表示。caspase通常以单一多肽酶原形式存在，含有一个N端前域及一大一小两个亚单位。caspase酶原在其内部保守的天冬氨酸残基位点经蛋白水解激活，激活的caspase通常又可作用其自身和其它caspase酶原，按顺序依次激活caspase，形成信号传导机制的酶级联反应。基于caspase N端前域长度，caspase-8有较长的前域，参与打靶和激活调控，称调控caspase。caspase-3含有较短前域，在级联反应下游操作底物酶切，在功能上作为凋亡的效应子，故称为效应caspase[4]。Fas属于肿瘤坏死因子受体/神经生长因子受体(TNFR/NGFR)家族，是Ⅰ型跨膜受体蛋白，其胞外区含有特征性的3个半胱氨酸重复序列，胞浆区含有一个由80个氨基酸组成的“死亡结构域”(death domain,DD)和由15个氨基酸组成的C端拯救域。Fas介导细胞凋亡，至少要具备3个条件：细胞表达功能性Fas受体；Fas与FasL(Fas Ligand)结合或Fas与其抗体交联成三聚体；胞内凋亡拮抗程度关闭[5]。已知Fas胞浆死亡结构域对于启动细胞内死亡程度是必要的。但Fas胞浆区不含有与某些酶功能的同源序列或与一些信号分子结合的部位，提示凋亡信号传导需由其它信号传导分子完成。研究证实FADD(Fas-associated death domain)[6]具有向下传导Fas凋亡信号的作用。Kischkel等[7]发现4种细胞毒Apo-1依赖的结合蛋白，即CAP1-4(cytotoxicity-dependent Apo-1-associated protein)。经鉴定CAP1、CAP2为丝氨酸磷酸化的FADD，CAP4为caspase-8，CAP3是代表caspase-8 N末端的蛋白部分，这四个相关的蛋白与Fas的DD结合成死亡诱导信号复合体(death-inducing signaling complex,DISC)。DISC的形成被当作是Fas介导凋亡信号传导的一个重要事件。作为中介的FADD通过其C-端死亡域与Fas胞浆C-端死亡域相互作用暴露FADDN-端死亡效应域，而死亡效应域也存在于caspase-8的N-末端前域。诱变研究表明，FADD和caspase-8的死亡效应域间相互作用募集这些蛋白酶到DISC，进而将死亡信号从受体传递给caspase家族成员。Medema等[8]研究认为caspase-8激活与DISC形成及在caspase-8特异部位蛋白酶切形成caspase-8自身激活。caspase-3是Fas介导死亡信号途径下游1个关键效应组分[9]。该酶可能被caspase-8、caspase-10或其它caspase水解形成活性酶形式。Takahashi等[10]研究认为caspase-3酶原主要是经caspase-8水解而成活性酶形式。进一步研究发现CAD通过与ICAD紧密结合，以失活的形式隔离于胞浆。只有当死亡信号从DISC传递到caspase，引发caspase酶促级联反应，活化的caspase-3酶切ICAD上的第117、224两个氨基酸位点，从而使CAD从ICAD：CAD复合体中解离出来，CAD才被活化进入细胞核内降解染色质DNA，从而导致细胞凋亡。
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2 Fas在介导肝癌细胞凋亡中的作用
Fas属于TNFR/NGFR死亡受体超家族成员，是一种触发凋亡的蛋白质。Higaki等[11]发现肝细胞癌组织的凋亡进展与Fas的表达有关。他们研究了25个肝细胞癌组织和与其相关的非癌组织，发现大部分的非癌组织标本的细胞表面和胞质都表达Fas，而大多数的肝细胞癌只有胞质表达Fas。在表达Fas的组织中，细胞表面表达Fas的组织凋亡细胞计数高于胞质表达的组织。并且当癌细胞分化水平低或生物学特性更为恶性时，肝癌细胞表面的Fas表达较差，凋亡发生率低。这提示低分化或高度恶性的肝癌细胞能逃避Fas介导的凋亡。Strand等[12]发现肝肿瘤细胞能通过下调其表面CD95(Fas/Apo-1)受体表达和通过FasL的表达杀死细胞毒性T淋巴细胞进而逃避Fas介导的凋亡。为此有人试图用Fas介导的凋亡来诱导活体肿瘤细胞凋亡。在体外试验中，鼠肝癌MH134(Fas-)被转染鼠Fas抗原cDNA，Fas+肝癌细胞在体外经抗Fas抗体处理后可发生凋亡；体内试验中用双突变鼠(同时缺乏Fas和FasL鼠)避免抗体对肝脏的细胞毒活性以及内源性FasL的干预，探讨抗Fas抗体清除体内肿瘤细胞的可能性，结果表明抗Fas抗体能有效地抑制Fas+肝肿瘤的生长，而不能抑制Fas-肝肿瘤生长[13]。Müller等[14]发现HepG2(携带野生型p53的肝癌细胞)对于Fas介导的凋亡敏感性高于HuH7(带有突变p53的肝癌细胞)和Hep3B(p53阴性的肝癌细胞)。争光霉素处理过的HePG2能增加FasL的mRNA表达从而使其细胞表面Fas表达上调，而且争光霉素诱导HepG2肝癌细胞凋亡能被干扰Fas/FasL反应的抗体抑制。研究表明，争光霉素诱导的凋亡至少部分由于依赖p53的Fas/FasL系统介导。Jiang等[15]通过使用5-Fu、cisplatin诱导5种肝癌细胞株(HepG2、HepG2.2.15、HeP3B、SK-Hep-1、PLC/PRF/5)凋亡研究发现，HePG2、HePG2.2.15、SK-Hep-1 3种肝癌细胞用5-Fu或cisplatin处理后可使细胞表面Fas表达增加，抗Fas抗体可增强5-Fu和cisplatin诱导的凋亡，且用抗一抗Fas抗体可使药物诱导HepG2细胞凋亡受到抑制。Hep3B、PLC/PRF/5经药物处理后无法检测到细胞Fas表达，而Hep3B、PLC/PRF/5同样发生凋亡，大量研究发现Fas并非是通过细胞毒性药物作用肝癌细胞后细胞中表达上调的唯一基因产物。同时检测到用5-Fu和cisplatin处理后TNFR、FADD、DR3(death receptor3)表达也增加，提示肝癌细胞凋亡存在依赖Fas途径和非Fas途径。
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3 Caspase-8、caspase-3在Fas介导肝癌细胞凋亡中的作用
Medema等[8]研究认为肝癌细胞依赖Fas凋亡中，caspase-8参与Fas介导肝癌细胞凋亡信号传导，通过与Fas系统形成DISC，使得caspase-8在DISC水平上自身激活，进而促发ICE/CED3蛋白酶级联反应，特别是caspase-3活化，进而酶切ICAD，从而使CAD被活化进入细胞核内降解染色质DNA，形成凋亡细胞所具有的特征性DNA片段。caspase-8抑制剂IETD-fmk和caspase-3抑制剂DEVD-CHO能抑制Fas介导的凋亡，而ICE抑制剂YVAD-CHO则不能，提示caspase-8、caspase-3参与了Fas介导的肝癌细胞凋亡，而非ICE参与。Hasegawa等[16]研究发现了Fas介导肝癌细胞凋亡过程中，caspase-3活性增高，caspase-3抑制剂DEVD-CHO能抑制caspase-3活化从而抑制Fas介导的凋亡。而ICE抑制剂YVAD-CHO则不能抑制Fas介导的细胞凋亡。Ruggieri等[17]研究发现Fas介导了表达丙肝病毒核心蛋白的HepG2肝癌细胞凋亡，且caspase-3抑制剂DEVD-CHO能抑制凋亡，而ICE抑制剂YVAD-CHO则不能抑制凋亡的发生，表明caspase-3在此过程中发挥重要作用，而不是ICE本身。Suzuki等[18]研究证明在Fas介导的人肝癌细胞凋亡中，X染色体连锁凋亡抑制剂能直接抑制活化的caspase-3，从而抑制Fas介导的凋亡。p21直接与caspase-3前体结合形成caspase-3前体/p21复合物，抑制caspase-3的激活从而抑制Fas介导的凋亡。
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4 Caspase-8、caspase-3和Fas在肝癌治疗中的潜在作用
目前研究表明肝癌过度增长以及对于宿主免疫监视的逃避与Fas/FasL系统密切相关[19]。肝癌细胞能通过下调其表面Fas受体表达和通过表达Fas配体而杀死细胞毒性T淋巴细胞从而逃避宿主机体免疫攻击。研究显示许多化疗药物治疗肝癌是通过Fas介导的凋亡信号传导通路而起作用的。caspase-8、caspase-3作为Fas介导肝癌细胞凋亡信号中的调控性和效应性caspase，在肝癌细胞依赖Fas介导凋亡途径中发挥着重要作用。因而对caspase-8、caspase-3和Fas介导的信号传导的研究将为我们治疗肝癌提供新的启示，可利用已知的调节肝癌细胞表面Fas表达的物质，积极寻找新的促进Fas表达药物或转基因使Fas-肝肿瘤转变成Fas+肝肿瘤，通过调节肝癌细胞凋亡，为肝肿瘤治疗提供新方法和新途径。而且亦可考虑利用caspase-8、caspase-3在肝癌细胞凋亡中的作用，强化凋亡信号传导，促进肝癌治疗效果的提高。
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5 结语
肝癌细胞凋亡在肝癌发生、发展中起着重要作用。目前对Fas介导凋亡信号传导分子机制研究有了很大进展，caspase-8、caspase-3在肝癌细胞依赖Fas介导的凋亡中发挥着重要的调控作用，研究证实肝癌细胞凋亡存在非Fas死亡受体介导途径，进一步研究caspase各成员在凋亡促酶促级联反应中的先后顺序以及非Fas其它死亡受体与caspase在肝癌凋亡中的作用及其分子机制，对于肝癌的防治有重要理论与实际意义。
本研究为湖南省科委重点资助课题(98SSY1008)
参 考 文 献
1，Hamazaki,Gochi A,Matsubara N,et al.Expression of Fas antigen and Bcl-2 protein in hepatocellular carcinoma.Acta Med Okayama,1995;49:227～230
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2，Hu SM,Vincenz C,Ni J,et al.I-FLICE.a novel inhibitor of tumor necrosis factor receptor-1 and CD95-induced apoaptosis.J Biol Chem,1997;272:17255
3，Alnemri ES,Livingston DJ,Nicholson DW,et al.Human ICE/CED-3 protease nomenclature.Cell,1996;87:171
4，Villa P,Kaufmann SH,Earnshaw WC,Caspase and Caspase inhibitors.TIBS,1997;22:388～393
5，Peter ME,Krammer PH.Mechanisms of CD95(Apo-1/Fas)-mediated apoptosis.Curr Opin lmmunol,1998;10:545～551
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6，Chinnaiyan AM,O'pourke K,Tewari M,et al.FADD,a novel death domain-containing protein.Cell,1995;81:505～512
7，Kischkel FC,Hellbardt S,Behrmann L,et al.Cytotoxicity dependent Apo-1(Fas/CD95)-associated proteins form a death-inducing signaling complex(DISC)with the receptor.EMBO J,1995;14:5579～5588
8，Medema JP,Scaffidi C,Kischkel FC,et al.FLICE is activated by association with the CD95 death-inducing signaling complex(DISC).EMBO J,1997;16:2794～2804
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9，Cryns V,Yuan J.Protease to die for.Genes & Dev,1998;12:1551～1570
10，Takahashi A,Hirata H,Yonehara S,et al.Affinity labeling displays the stepwise activation of ICE-related proteases by Fas,staurosporine,and CrmA sensitive Caspase-8.Oncogene,1997;14:2741～2752
11，Higaki K,Yano H,Kijiro M.Fas antigen expresion and its relatioship with apoptosis in human hepatocelluar carcinoma and noncancerous tissues.Am J Patol,1996;149:429～437
, 百拇医药
12，Strand S,Hofmann WJ,Hug H,et al.Lymphocyte apoptosis induced by CD95(APO-1/Fas)ligand-expressing tumor immune escape.Science,1996;274:1363～1366
13，Shimizu M,Yoshimoto T,Nagata S,et al.A trial to kill tumor cells through Fas(CD95)-mediated apoptosis in Vivo.Biochem Biophys Res Commun,1996;228:375～379
14，Müller M,Strand S,Hug H,et al.Drug-induced apoptosis in hepatoma cells is mediated by the CD95(Apo-1/Fas)receptor/system and involves activation of wild-type p53.J Clin lnvest,1997;99:403～413
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15，Jiang S,Song MJ,Shin E-C,et al.Apoptosis in human hepatoma cell lines by chemotherapeutic drugs via Fasdependent and Fas-independent pathways.Hepatology,1999;29:101～110
16，Hasegawa J,Kamada S,Kamijke W,et al.lnvolvement of CPP32/Yama(-like) protease in Fas-mediated apoptosis.Cancer Res,1996;56:1713～1718
17，Ruggieri A,Haradea T,Matsuura Y,et al.Senstitization to Fasmediated apoptosis by hepatitis C virus core protein.Virology,1997;229:68～76
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18，Suzuki A,Tsutomi Y,Akahane K,et al.Resistance to Fas-mediated apoptosis:activation of caspase-3 is regulated by cell cycle regulator p21WAF1 and IAP gene family ILP.Oncogene,1998;17:931～939
19，Nagao M,Nakajima Y,Hisanaga M,et al.The alteration of Fas receptor and ligand system in hepatocellular carcinomas:How do hepatoma cells escape from the host immune surveillance in vivo?Hepatology,1999;30:413～421
收稿：2000-02-20, http://www.100md.com