子宫内膜异位症的子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位的变化
作者：徐惠成 史常旭
单位：徐惠成(第三军医大学附属西南医院妇产科，重庆 400038)；史常旭(第三军医大学附属西南医院妇产科，重庆 400038)
关键词：子宫内膜异位症；整合素β3亚单位；雌、孕激素；不孕
第三军医大学学报000807 提 要： 目的 探讨子宫接受性改变在子宫内膜异位症(EM)致不孕中的作用及其调节因素。方法 收集EM患者(23例)及非子宫内膜异位症患者(29例)的子宫内膜和血清，进行整合素β3亚单位免疫组化方法和雌、孕激素(E2、P)放射免疫测定，并进行比较。结果 EM患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位含量显著低于非子宫内膜异位症患者，而血清E2、P浓度无明显差异。结论 EM患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位含量明显降低，子宫接受性下降，是EM致不孕的重要原因之一，EM患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位表达异常与雌、孕激素无关，EM患者异常升高的细胞因子可能是导致整合素表达异常的重要原因。
, 百拇医药
中图法分类号： R711.71 文献标识码： A
文章编号：1000-5404(2000)08-0734-04
Expression change of integrin β3 subunit on endometrial epithelial cells in endometriostic patients
XU Hui-cheng, SHI Chang-xu
(Department of Gynecotokology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China)
Abstract： Objective To study the relationship between uterine receptivity and endometriosis(EM)-induced infertility and explore the possible factors regulating uterine receptivity. Methods Samples of endometrium and serum were collected from 23 patients with EM and 29 without this disorder. The expression of integrin β3 subunit in endometrial epithelial cells was detected with immunohistochemical methods. Estrogen (E2) and progesterone (P) were determined with radioimmunoassay. All results were compared with those of the control. Results The concentration of integrin β3 was significantly lower in those with endometriosis than those without this disorder. While, no obvious difference was found in the concentration of E2 and P between the 2 groups. Conclusion One of the main reasons for EM might be the obviously decreased expression of integrin β3 subunitin endometrial epithelial cells that contribute to the reduce of uterine receptivity. The abnormal expression of integrin β3 subunit in EM patients might result not from the change of E2 and P concentration, but from the increase of some cell ular factors.
, 百拇医药
Key words: endometriosis; integrin β3 subunit; progesterone; estrogen; infertility
子宫内膜异位症(Endometriosis,EM)是妇女不孕最常见原因之一，其致不孕的机制尚不完全清楚。近来研究发现，子宫接受性下降导致胚泡着床障碍是EM致不孕的重要原因之一。子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位的表达是目前公认的子宫接受性标志。本课题采用免疫组化法和放射免疫法分别检测EM患者和对照组子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位含量和血清雌孕激素浓度，以探讨子宫接受性改变在EM致不孕中的作用及其可能调节因素。
1 材料和方法
1.1 研究对象
1997年11月至1998年6月因不孕就诊于本院的未生育患者，在黄体中期行腹腔镜检查，除外全身性疾患、月经紊乱、内膜组织学分期为非分泌中期患者，术前3月未使用任何激素及免疫制剂，按腹腔镜诊断选择研究对象并分组：①EM组：23例，年龄23～34岁，平均28.3岁，均为腹腔镜诊断EM患者，按AFS分期一期EM 13例，二期10例；②对照组：29例，年龄21～34岁，平均26.7岁，腹腔镜检查为正常盆腔24例，子宫肌瘤2例，卵巢冠囊肿3例。
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1.2 方法
1.2.1标本收集
行腹腔镜检查当日晨6∶00～7∶00时抽取空腹肘静脉血2～3ml，常规分离血清，贮存于-20℃冰箱统一行E2、P测定。腹腔镜检查明确诊断并选择研究对象，常规消毒后刮取少许子宫内膜，存放于液氮中待用，检查时统一用10%中性福尔马林固定液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，参照Noyes标准进行子宫内膜组织学分期，除外非分泌中期标本。
1.2.2 血清E2、P测定
应用天津九鼎医学生物工程有限公司的E2、P放免测试盒，按说明书进行操作。
1.2.3 子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位测定
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一抗为鼠抗人整合素β3亚单位单抗，由国家计生委计划生育研究所王介东博士惠赠，S-P试剂盒购自北京中山生物工程有限公司，主要实验步骤：脱蜡，进水，抗原修复，0.3%过氧化氢封闭，0.1%胰酶消化，依次加正常山羊血清、Ⅰ抗、Ⅱ抗和Ⅲ抗，DAB显色，复染，封片。对染色后标本进行图像分析处理，计算平均光密度代表整合素β3亚单位含量。
1.3 统计学处理
采用t检验，数据以
±s表示。
2 结果
2.1 血清E2浓度
EM组为(55.9±34.2)pg/ml，对照组为(58.9±33.0)pg/ml；血清P浓度EM组为(6.41±2.36)ng/ml，对照组为(6.40±3.75)ng/ml，EM组与对照组相比E2和P差异均不显著(P<0.05)。
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2.2 子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位水平
对照组子宫内膜上皮细胞表面有明显棕褐色着色，EM组子宫内膜上皮细胞表面无着色，见图1、2。经图像分析，EM组上皮细胞整合素β3含量为28.5±0.33，对照组为4.35±1.18,两组相比差异显著(P<0.05)，EM组上皮细胞整合素β3亚单位含量显著低于对照组。
图1 对照组子宫内膜整合素β3免疫组化染色，上皮细胞膜上有棕黄色颗粒分布 (S-P×400)
Fig 1 Immunohistochemical staining of integrin β3 in control group, brownish granules
, http://www.100md.com
in the membrane of endometrial epithelial cells (S-P×400)
图2 EM组子宫内膜整合素β3免疫组化染色，上皮细胞膜上无棕黄色颗粒沉着 (S-P×400)
Fig 2 Immunohistochemical staining of integrin β3 in EM group, brown in granules not found in the membrane
of endometrial epithelial cells (S-P×400)
3 讨论
, http://www.100md.com 胚泡着床是一复杂的生理过程，必须胚泡和子宫内膜同步发育且相互配合，子宫内膜仅在一极短时期内允许胚泡着床，此期为着床窗口期。目前胚泡着床机制尚不清楚，其基本本质为细胞粘附分子介导的细胞与细胞、细胞与基质间的相互作用过程。最新研究发现，一类细胞粘附分子——整合素在子宫内膜表达有动态变化，其中整合素β3，于月经周期第19～20天开始在子宫内膜上皮细胞表达，与着床窗口期开放时间一致，可作为子宫接受性的标志[1]。
3.1 EM患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位与不孕
EM是妇女不孕最常见原因之一，目前为止，其致不孕的机制尚不完全清楚，尤其是轻度EM，亦无十分有效的治疗措施。近年发现子宫接受性下降可能是EM致不孕的重要原因之一。本研究发现轻度EM不孕患者分泌中期子宫内膜上皮细胞整合素β3表达低下，与Lessey等[2]报道的结果相符，Lessey等尚发现即使在EM，经产妇子宫内膜上皮细胞整合素β3的表达高于不孕者，提示子宫接受性下降是轻度EM致不孕的重要原因，并可以解释临床所见EM妊娠的现象，即在EM患者，仅有部分患者整合素β3亚单位表达异常而不孕，而表达正常者可妊娠，由此可见，对EM不孕患者，采取措施提高整合素β3亚单位于子宫内膜上皮细胞的表达可能是有效治疗措施之一。
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3.2 轻度EM不孕患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位与E2、P的关系
整合素的表达受诸多因素调节，在子宫，整合素的表达主要受雌、孕激素的调节。目前普遍认为，孕激素诱导子宫内膜表达整合素，而雌激素则抑制整合素表达[3]。据报道，在黄体功能不全(LPD)患者，子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位表达缺失，用外源性孕激素治疗后可恢复整合素β3亚单位的正常表达，提示LPD子宫内膜整合素表达异常是由于孕激素分泌不足所致[4]。本研究发现EM不孕患者血清E2、P均无异常，提示EM不孕患者子宫内膜整合素表达异常与雌、孕激素无关。有报道，子宫内膜整合素表达除受雌、孕激素调节外，尚受众多细胞因子和胚泡调节[5]，如EGF(表皮生长因子)、TGF(转化生长因子)等诱导子宫内膜表达整合素，IL-1、TNFα和IFN等则抑制整合素在子宫内膜表达，胚泡亦通过分泌特定细胞因子调节整合素表达[6]。目前已发现，EM患者有多种细胞因子异常，如EM患者腹腔液及血清IL-1、IL-2、TNF等均明显升高[7]。因此，EM患者子宫内膜整合素表达异常可能是异常升高的细胞因子所致。应用细胞因子，如EGF等，提高子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位表达，以提高子宫接受性可能是治疗EM不孕的有效措施。
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目前整合素在胚泡着床中的作用机制尚不完全清楚，可能通过与配体结合直接介导细胞与细胞、细胞与细胞间粘附，或/和与配体结合后激活特定酶分泌或降解某些物质以利胚泡着床[8]，对此，有待深入研究。
作者简介： 徐惠成(1970-)，男，浙江省兰溪市人，硕士，医师，主要从事女性不孕症方面的研究。电话： (023)68752710
参考文献：
[1] Lessey B A. The use of integrins for the assessment of uterine receptivity[J]. Fertil Steril, 1994,61(5):812-813.
[2] Lessey B A, Castellbaum A J, Sawin S J, et al. Aberrant integrin expression in the endometrium of women with endometriosis[J]. J Clin Endocrinol Metab, 1994,79(2):643-649.
, http://www.100md.com
[3] Grosskinsky C M, Yowell C W, Sum J H, et al. Modulation of integrin expression in endometrial stromal cell in vitro[J]. J Clin Endocninol Metab, 1996,81(6):2 047-2 054.
[4] Lessey B A, Yeb I T, Castelbaum A J, et al. Endometrial progesterone receptors and markers of uterine receptivity in the window of implantation[J]. Fertil steril, 1996,65(3):477-483.
[5] Santala P, Henio J. Regulation of integrin β-type cell adhesion receptors by cytokines[J]. J Biol Chem, 1991,266(34):23 505-23 509.
, http://www.100md.com
[6] Somon C, Gimeno M J, Mercader A, et al. Embryonic regulation of integrins β3、α4and α1in human endometrial epithelial cell in vitro[J]. J Chin Endocrinol Metab, 1997,82(8):2 607-2 616.
[7] 胡 珊，史常旭.细胞因子在子宫内膜异位症不孕中的作用[J].国外医学：妇产科分册，1996，23(4)：216-219.
[8] Sueoka K, Shiokawa S, Miyazaki T, et al. Integrins and reproductive physiology, expression and modulation in fertilization, embryogenesis, and implantation[J]. Fertil Steril, 1997,67(5):799-811.
收稿日期： 2000-01-20；修回日期： 2000-05-08, 百拇医药
单位：徐惠成(第三军医大学附属西南医院妇产科，重庆 400038)；史常旭(第三军医大学附属西南医院妇产科，重庆 400038)
关键词：子宫内膜异位症；整合素β3亚单位；雌、孕激素；不孕
第三军医大学学报000807 提 要： 目的 探讨子宫接受性改变在子宫内膜异位症(EM)致不孕中的作用及其调节因素。方法 收集EM患者(23例)及非子宫内膜异位症患者(29例)的子宫内膜和血清，进行整合素β3亚单位免疫组化方法和雌、孕激素(E2、P)放射免疫测定，并进行比较。结果 EM患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位含量显著低于非子宫内膜异位症患者，而血清E2、P浓度无明显差异。结论 EM患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位含量明显降低，子宫接受性下降，是EM致不孕的重要原因之一，EM患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位表达异常与雌、孕激素无关，EM患者异常升高的细胞因子可能是导致整合素表达异常的重要原因。
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中图法分类号： R711.71 文献标识码： A
文章编号：1000-5404(2000)08-0734-04
Expression change of integrin β3 subunit on endometrial epithelial cells in endometriostic patients
XU Hui-cheng, SHI Chang-xu
(Department of Gynecotokology, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China)
Abstract： Objective To study the relationship between uterine receptivity and endometriosis(EM)-induced infertility and explore the possible factors regulating uterine receptivity. Methods Samples of endometrium and serum were collected from 23 patients with EM and 29 without this disorder. The expression of integrin β3 subunit in endometrial epithelial cells was detected with immunohistochemical methods. Estrogen (E2) and progesterone (P) were determined with radioimmunoassay. All results were compared with those of the control. Results The concentration of integrin β3 was significantly lower in those with endometriosis than those without this disorder. While, no obvious difference was found in the concentration of E2 and P between the 2 groups. Conclusion One of the main reasons for EM might be the obviously decreased expression of integrin β3 subunitin endometrial epithelial cells that contribute to the reduce of uterine receptivity. The abnormal expression of integrin β3 subunit in EM patients might result not from the change of E2 and P concentration, but from the increase of some cell ular factors.
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Key words: endometriosis; integrin β3 subunit; progesterone; estrogen; infertility
子宫内膜异位症(Endometriosis,EM)是妇女不孕最常见原因之一，其致不孕的机制尚不完全清楚。近来研究发现，子宫接受性下降导致胚泡着床障碍是EM致不孕的重要原因之一。子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位的表达是目前公认的子宫接受性标志。本课题采用免疫组化法和放射免疫法分别检测EM患者和对照组子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位含量和血清雌孕激素浓度，以探讨子宫接受性改变在EM致不孕中的作用及其可能调节因素。
1 材料和方法
1.1 研究对象
1997年11月至1998年6月因不孕就诊于本院的未生育患者，在黄体中期行腹腔镜检查，除外全身性疾患、月经紊乱、内膜组织学分期为非分泌中期患者，术前3月未使用任何激素及免疫制剂，按腹腔镜诊断选择研究对象并分组：①EM组：23例，年龄23～34岁，平均28.3岁，均为腹腔镜诊断EM患者，按AFS分期一期EM 13例，二期10例；②对照组：29例，年龄21～34岁，平均26.7岁，腹腔镜检查为正常盆腔24例，子宫肌瘤2例，卵巢冠囊肿3例。
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1.2 方法
1.2.1标本收集
行腹腔镜检查当日晨6∶00～7∶00时抽取空腹肘静脉血2～3ml，常规分离血清，贮存于-20℃冰箱统一行E2、P测定。腹腔镜检查明确诊断并选择研究对象，常规消毒后刮取少许子宫内膜，存放于液氮中待用，检查时统一用10%中性福尔马林固定液固定，石蜡包埋，切片，HE染色，参照Noyes标准进行子宫内膜组织学分期，除外非分泌中期标本。
1.2.2 血清E2、P测定
应用天津九鼎医学生物工程有限公司的E2、P放免测试盒，按说明书进行操作。
1.2.3 子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位测定
, 百拇医药
一抗为鼠抗人整合素β3亚单位单抗，由国家计生委计划生育研究所王介东博士惠赠，S-P试剂盒购自北京中山生物工程有限公司，主要实验步骤：脱蜡，进水，抗原修复，0.3%过氧化氢封闭，0.1%胰酶消化，依次加正常山羊血清、Ⅰ抗、Ⅱ抗和Ⅲ抗，DAB显色，复染，封片。对染色后标本进行图像分析处理，计算平均光密度代表整合素β3亚单位含量。
1.3 统计学处理
采用t检验，数据以
±s表示。2 结果
2.1 血清E2浓度
EM组为(55.9±34.2)pg/ml，对照组为(58.9±33.0)pg/ml；血清P浓度EM组为(6.41±2.36)ng/ml，对照组为(6.40±3.75)ng/ml，EM组与对照组相比E2和P差异均不显著(P<0.05)。
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2.2 子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位水平
对照组子宫内膜上皮细胞表面有明显棕褐色着色，EM组子宫内膜上皮细胞表面无着色，见图1、2。经图像分析，EM组上皮细胞整合素β3含量为28.5±0.33，对照组为4.35±1.18,两组相比差异显著(P<0.05)，EM组上皮细胞整合素β3亚单位含量显著低于对照组。
图1 对照组子宫内膜整合素β3免疫组化染色，上皮细胞膜上有棕黄色颗粒分布 (S-P×400)
Fig 1 Immunohistochemical staining of integrin β3 in control group, brownish granules
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in the membrane of endometrial epithelial cells (S-P×400)
图2 EM组子宫内膜整合素β3免疫组化染色，上皮细胞膜上无棕黄色颗粒沉着 (S-P×400)
Fig 2 Immunohistochemical staining of integrin β3 in EM group, brown in granules not found in the membrane
of endometrial epithelial cells (S-P×400)
3 讨论
, http://www.100md.com 胚泡着床是一复杂的生理过程，必须胚泡和子宫内膜同步发育且相互配合，子宫内膜仅在一极短时期内允许胚泡着床，此期为着床窗口期。目前胚泡着床机制尚不清楚，其基本本质为细胞粘附分子介导的细胞与细胞、细胞与基质间的相互作用过程。最新研究发现，一类细胞粘附分子——整合素在子宫内膜表达有动态变化，其中整合素β3，于月经周期第19～20天开始在子宫内膜上皮细胞表达，与着床窗口期开放时间一致，可作为子宫接受性的标志[1]。
3.1 EM患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位与不孕
EM是妇女不孕最常见原因之一，目前为止，其致不孕的机制尚不完全清楚，尤其是轻度EM，亦无十分有效的治疗措施。近年发现子宫接受性下降可能是EM致不孕的重要原因之一。本研究发现轻度EM不孕患者分泌中期子宫内膜上皮细胞整合素β3表达低下，与Lessey等[2]报道的结果相符，Lessey等尚发现即使在EM，经产妇子宫内膜上皮细胞整合素β3的表达高于不孕者，提示子宫接受性下降是轻度EM致不孕的重要原因，并可以解释临床所见EM妊娠的现象，即在EM患者，仅有部分患者整合素β3亚单位表达异常而不孕，而表达正常者可妊娠，由此可见，对EM不孕患者，采取措施提高整合素β3亚单位于子宫内膜上皮细胞的表达可能是有效治疗措施之一。
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3.2 轻度EM不孕患者子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位与E2、P的关系
整合素的表达受诸多因素调节，在子宫，整合素的表达主要受雌、孕激素的调节。目前普遍认为，孕激素诱导子宫内膜表达整合素，而雌激素则抑制整合素表达[3]。据报道，在黄体功能不全(LPD)患者，子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位表达缺失，用外源性孕激素治疗后可恢复整合素β3亚单位的正常表达，提示LPD子宫内膜整合素表达异常是由于孕激素分泌不足所致[4]。本研究发现EM不孕患者血清E2、P均无异常，提示EM不孕患者子宫内膜整合素表达异常与雌、孕激素无关。有报道，子宫内膜整合素表达除受雌、孕激素调节外，尚受众多细胞因子和胚泡调节[5]，如EGF(表皮生长因子)、TGF(转化生长因子)等诱导子宫内膜表达整合素，IL-1、TNFα和IFN等则抑制整合素在子宫内膜表达，胚泡亦通过分泌特定细胞因子调节整合素表达[6]。目前已发现，EM患者有多种细胞因子异常，如EM患者腹腔液及血清IL-1、IL-2、TNF等均明显升高[7]。因此，EM患者子宫内膜整合素表达异常可能是异常升高的细胞因子所致。应用细胞因子，如EGF等，提高子宫内膜上皮细胞整合素β3亚单位表达，以提高子宫接受性可能是治疗EM不孕的有效措施。
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目前整合素在胚泡着床中的作用机制尚不完全清楚，可能通过与配体结合直接介导细胞与细胞、细胞与细胞间粘附，或/和与配体结合后激活特定酶分泌或降解某些物质以利胚泡着床[8]，对此，有待深入研究。
作者简介： 徐惠成(1970-)，男，浙江省兰溪市人，硕士，医师，主要从事女性不孕症方面的研究。电话： (023)68752710
参考文献：
[1] Lessey B A. The use of integrins for the assessment of uterine receptivity[J]. Fertil Steril, 1994,61(5):812-813.
[2] Lessey B A, Castellbaum A J, Sawin S J, et al. Aberrant integrin expression in the endometrium of women with endometriosis[J]. J Clin Endocrinol Metab, 1994,79(2):643-649.
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[3] Grosskinsky C M, Yowell C W, Sum J H, et al. Modulation of integrin expression in endometrial stromal cell in vitro[J]. J Clin Endocninol Metab, 1996,81(6):2 047-2 054.
[4] Lessey B A, Yeb I T, Castelbaum A J, et al. Endometrial progesterone receptors and markers of uterine receptivity in the window of implantation[J]. Fertil steril, 1996,65(3):477-483.
[5] Santala P, Henio J. Regulation of integrin β-type cell adhesion receptors by cytokines[J]. J Biol Chem, 1991,266(34):23 505-23 509.
, http://www.100md.com
[6] Somon C, Gimeno M J, Mercader A, et al. Embryonic regulation of integrins β3、α4and α1in human endometrial epithelial cell in vitro[J]. J Chin Endocrinol Metab, 1997,82(8):2 607-2 616.
[7] 胡 珊，史常旭.细胞因子在子宫内膜异位症不孕中的作用[J].国外医学：妇产科分册，1996，23(4)：216-219.
[8] Sueoka K, Shiokawa S, Miyazaki T, et al. Integrins and reproductive physiology, expression and modulation in fertilization, embryogenesis, and implantation[J]. Fertil Steril, 1997,67(5):799-811.
收稿日期： 2000-01-20；修回日期： 2000-05-08, 百拇医药