沙苑子及其伪品的可溶性蛋白质电泳鉴别
作者：马晓莉 周文英
单位：河北省职工医学院 保定 071000
关键词：沙苑子；伪品；电泳鉴别
中草药000838摘 要 对沙苑子及其伪品进行了可溶性蛋白质电泳鉴别，同时比较了两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250 和 G-250 的染色效果。
沙苑子为少常用中药，药典收载的正品为豆科植物扁茎黄芪 Astragalus complanatus R.Br. 的干燥成熟种子。由于同属植物种子性状相似，沙苑子的异物同名品甚多，各地区的使用情况也不尽相同，我们用连续性非解离型聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对沙苑子及其伪品进行了分析，所得蛋白电泳图谱有显著差异，可作为鉴别依据，同时比较了两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250 和 G-250 的染色效果。
1 实验材料、仪器与药品
, 百拇医药
1.1 实验材料
沙苑子：豆科植物扁茎黄芪 Astragalus complanatus R.Br.种子。
紫云英：豆科植物紫云英 A. sinicus L.种子。
华黄芪：豆科植物华黄芪 A. chinensis L. 的种子。
沙大旺：豆科植物直立黄芪 A. adsurgens Pall 的种子。
以上材料由保定市药检所提供经张建英鉴定。
1.2 仪器：DYY-Ⅲ2 型稳压稳流电泳仪(北京市六一仪器厂)，圆盘电泳槽(北京市六一仪器厂)，LD5-10 型离心机(北京医用离心机厂)。
1.3 药品：丙烯酰胺为化学纯，双丙烯酰胺为进口原装，四甲基乙二胺为生化试剂，考马斯亮蓝 R-250 和 G-250 为进口分装，其余药品均为分析纯。
, 百拇医药
2 实验方法
2.1 试剂的配制及凝胶的制备：见文献[1，2]，凝胶浓度为 6.3%。
2.2 样品液的制备：取实验材料 0.5 g，加电极缓冲液 5 mL 研磨成匀浆，静置 30 min ，移至离心管中，按 3 000 r/min 离心 15 min，取上清液 0.5 mL 加入 0.05% 溴酚蓝示踪指示剂 1～2 滴，混匀备用。
2.3 电泳：调节电流按 1 毫安/管进行电泳， 2 min 后按 3.5 毫安/管进行电泳，待示踪指示剂行至距末端 0.5 cm 时，关闭电源，全程约 40 min。
2.4 染色：考马斯亮蓝 R-250 染色法：将胶条置固定液中固定 10 min，再置 90 ℃染色液中染色 10 min，最后用洗脱液反复洗脱，至背景清晰为止。考马斯亮蓝 G-250 染色法：将胶条置染色液中，室温条件下染色 30 min 即得。
, 百拇医药
3 结果与讨论
3.1 沙苑子及其伪品的蛋白质电泳图谱(图1)各不相同，有显著差别，通过多次重复实验，重现性好，结果可靠，可作为鉴别依据。
图1 沙苑子及其伪品的蛋白电泳图谱
3.2 我们按颜色的深浅将谱带分为2级，色深者为 Ⅰ级，色浅者为Ⅱ级。同种实验材料在相同条件下，分别用两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250 和 G-250 染色，所得电泳图谱基本相同，只是一些细带、弱带略有差异，如沙苑子和华黄芪用 G-250 染色所得图谱与用 R-250 染色所得图谱相比，少了一些弱带。但同时，沙苑子、紫云英、沙大旺的 G-250 电泳图谱比 R-250 电泳图谱也多了一些谱带。说明 G-250 的染色效果较好，可以和 R-250 一样用于生药的电泳鉴别，也表明可能两种染色剂的染色范围略有差异，但这一点还有待进一步考证。本实验结果结合我们对多组生药的电泳鉴别结果表明，用考马斯亮蓝 G-250 进行蛋白质染色，具有操作简便、时间短、节省试剂等优点，可用于中药材的电泳鉴别。
参考文献
1，夏 雷，刘大程.中国中药杂志，1990，15(7)：11
2，马晓莉，王 晶.中草药，1998，29(6)：412
(1999-11-24收稿), 百拇医药
单位：河北省职工医学院 保定 071000
关键词：沙苑子；伪品；电泳鉴别
中草药000838摘 要 对沙苑子及其伪品进行了可溶性蛋白质电泳鉴别，同时比较了两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250 和 G-250 的染色效果。
沙苑子为少常用中药，药典收载的正品为豆科植物扁茎黄芪 Astragalus complanatus R.Br. 的干燥成熟种子。由于同属植物种子性状相似，沙苑子的异物同名品甚多，各地区的使用情况也不尽相同，我们用连续性非解离型聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对沙苑子及其伪品进行了分析，所得蛋白电泳图谱有显著差异，可作为鉴别依据，同时比较了两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250 和 G-250 的染色效果。
1 实验材料、仪器与药品
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1.1 实验材料
沙苑子：豆科植物扁茎黄芪 Astragalus complanatus R.Br.种子。
紫云英：豆科植物紫云英 A. sinicus L.种子。
华黄芪：豆科植物华黄芪 A. chinensis L. 的种子。
沙大旺：豆科植物直立黄芪 A. adsurgens Pall 的种子。
以上材料由保定市药检所提供经张建英鉴定。
1.2 仪器：DYY-Ⅲ2 型稳压稳流电泳仪(北京市六一仪器厂)，圆盘电泳槽(北京市六一仪器厂)，LD5-10 型离心机(北京医用离心机厂)。
1.3 药品：丙烯酰胺为化学纯，双丙烯酰胺为进口原装，四甲基乙二胺为生化试剂，考马斯亮蓝 R-250 和 G-250 为进口分装，其余药品均为分析纯。
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2 实验方法
2.1 试剂的配制及凝胶的制备：见文献[1，2]，凝胶浓度为 6.3%。
2.2 样品液的制备：取实验材料 0.5 g，加电极缓冲液 5 mL 研磨成匀浆，静置 30 min ，移至离心管中，按 3 000 r/min 离心 15 min，取上清液 0.5 mL 加入 0.05% 溴酚蓝示踪指示剂 1～2 滴，混匀备用。
2.3 电泳：调节电流按 1 毫安/管进行电泳， 2 min 后按 3.5 毫安/管进行电泳，待示踪指示剂行至距末端 0.5 cm 时，关闭电源，全程约 40 min。
2.4 染色：考马斯亮蓝 R-250 染色法：将胶条置固定液中固定 10 min，再置 90 ℃染色液中染色 10 min，最后用洗脱液反复洗脱，至背景清晰为止。考马斯亮蓝 G-250 染色法：将胶条置染色液中，室温条件下染色 30 min 即得。
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3 结果与讨论
3.1 沙苑子及其伪品的蛋白质电泳图谱(图1)各不相同，有显著差别，通过多次重复实验，重现性好，结果可靠，可作为鉴别依据。
图1 沙苑子及其伪品的蛋白电泳图谱3.2 我们按颜色的深浅将谱带分为2级，色深者为 Ⅰ级，色浅者为Ⅱ级。同种实验材料在相同条件下，分别用两种蛋白质染色剂考马斯亮蓝 R-250 和 G-250 染色，所得电泳图谱基本相同，只是一些细带、弱带略有差异，如沙苑子和华黄芪用 G-250 染色所得图谱与用 R-250 染色所得图谱相比，少了一些弱带。但同时，沙苑子、紫云英、沙大旺的 G-250 电泳图谱比 R-250 电泳图谱也多了一些谱带。说明 G-250 的染色效果较好，可以和 R-250 一样用于生药的电泳鉴别，也表明可能两种染色剂的染色范围略有差异，但这一点还有待进一步考证。本实验结果结合我们对多组生药的电泳鉴别结果表明，用考马斯亮蓝 G-250 进行蛋白质染色，具有操作简便、时间短、节省试剂等优点，可用于中药材的电泳鉴别。
参考文献
1，夏 雷，刘大程.中国中药杂志，1990，15(7)：11
2，马晓莉，王 晶.中草药，1998，29(6)：412
(1999-11-24收稿), 百拇医药
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