右心导管术对静脉血中循环内皮细胞的影响及临床意义
作者：方宏 冯义柏 刘坚 方盈 陈志坚 王祥 李裕舒
单位：同济医科大学心血管病研究所 同济医科大学附属协和医院心内科 武汉，430022
关键词：循环内皮细胞；右心导管术
临床心血管病杂志000806 摘要 目的：观察右心导管术对静脉内皮的影响，明确其机制及临床意义。方法：12例行右心导管术的患者，手术前后分别采静脉血4.5 ml，用五步法分离脱落的静脉内皮细胞，免疫荧光法鉴别，光镜计数。结果：右心导管术后循环内皮细胞计数明显高于术前(P<0.001)，但其数量变化与手术时间无线性关系。结论：右心导管术对静脉内皮有机械损伤。
Effect of right heart catheterization on venous
endothelial cells and clinic significance
, 百拇医药
FANG Hong，FENG Yi-bai，FANG Yin
CHENG Zhi-jian，WANG Qiang，LI Yu-shu
(Institute of Cardiovascular Disease,Tongji Medical University, Wuhan 430022)
LIU Jian
(Department of Caroliology,Yellow Stone Steel Hospital,Hubei)
Abstract Objective:To observe the effect of right heart catheterization on venous blood endothelium cells and clinic significance.Method:4.5 ml blood were obtained from 12 cases who were performed right heart catheterization before and after operation.Isolation was carried out according to the five stage method.These cells were confirmed by immunofluorescence and counted under optical microscope.Result:The venous endothelial cells after operation was significantly higher than those before operation.There wasn′t linear correlation between the number change of circulating endothelial cells and operating duration. Conclusion:Right heart catheterization may injure venous endothelium.
, 百拇医药
Key word Circulating endothelial cells Right heart catheterization
近年来随着心血管介入术的广泛开展，医源性血管损伤越来越多见。近来我们观察了12例行右心导管检查的患者静脉血中循环内皮细胞(CEC)的变化规律，以求弄清右心导管术对血管内皮的轻度损伤及危害。
1 对象与方法
1.1 对象
选行右心导管术患者12例，男8例，女4例，年龄(17.45±2.38)岁。法洛四联征6例，室间隔缺损3例，艾森曼格综合征3例。手术时间：20 min 9例，30～60 min 3例，其中2例穿刺45 min，1例送导管及多角度摄影40 min。
1.2 方法
, http://www.100md.com
CEC分离与计数：于手术前后采静脉血4.5 ml，加入抗凝剂用五步法分离，离心机为Biofuge 28RS。其步骤是〔1〕：抗凝血离心20 min(4℃，395 g)，收集上清液1 ml，加入0.1% ADP 0.2 ml，用YKH-Ⅲ液体快速混合器振荡10 min，将上述混合液离心20 min(40℃，395 g)，取上清液离心20 min (4℃，2 100 g)，弃上清，加0.1 ml的生理盐水备检。取一小滴(0.9 μl)备检液滴入细胞计数池，Nikon HT-DX光学显微镜下计数，同一标本计数4次，取其平均值。CEC形态学观察采用ⅧR：Ag间接免疫荧光法鉴别后，加Giemsa染色液复染，光镜下观察、摄影。
2 结果
12例患者右心导管术前、后CEC的数量分别为1.53±0.97,3.56±1.62,术后显著高于术前(P<0.001)。CEC的增加程度与操作时间无相关性(P>0.05)。
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CEC形态学与鉴别：CEC形态特殊、多样，体积较大，直径最大为(47.32±11.32)μm，最小为(36.34±10.40)μm，形状大多极不规则，可呈多边形、类椭圆形、梭形。绝大多数无核，胞体皱缩、折叠、扭曲，有多个凸起，胞浆内可见条絮状、颗粒状物质；少数核固缩，呈点状，胞浆较少；极少数胞核清楚、胞浆丰富。免疫荧光标记的CEC形状不规则，轮廓清楚，无核，呈黄绿色，对照组则仅有点状非特异荧光。Giemsa复染后，胞质内可见颗粒状物质，细胞边缘清楚，形态与荧光标记的细胞类似。
3 讨论
CEC数量变化与血管内皮的损伤有相关性，是反映血管内皮受损的重要指标之一〔1〕。本实验利用
其来了解右心导管术对静脉内皮的影响。结果显示术前、术后CEC数量有明显的差异(P<0.001),术后高于术前，表明右心导管术对静脉内皮有损害。引发内皮损伤的主要原因从理论上来说是机械因素，通过刺、挫、擦、刮、戳等造成内皮细胞脱落。同时导管的伸入，影响到血流也可损害内皮。按常理推测，手术时间应与CEC数量变化成正相关，时间越长，CEC数量则越多。然而，我们从实验中观察到的结果发现：CEC数量与时间并无直线相关性，说明CEC的数量并不一定因手术时间的长短而改变。根据我们临床观察，影响右心导管术进程的因素有：①穿刺困难；②导管难到位；③多角度摄影等。由本实验可以看出，定位不准，多次穿刺，是影响手术的首要原因，由于其并未直接损伤动、静脉内皮，CEC肯定不会有很大变化；导管的操作手法不熟练或血管、心脏畸形均可致导管难以到位，虽然也会有影响，但导管表面多光滑，头钝圆，因此对内皮的损伤可能较轻；多次注射造影剂，因多不直接对准管壁，亦不可能造成很大损害。因此，右心导管术的损伤作用可能主要发生在心导管术上鞘和插导引钢丝时，刺、戳的损伤作用大于擦、刮。
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CEC有三种形态，其中不规则，核缺失、固缩者占大多数，这提示我们右心导管术可能对生理功能减低的内皮细胞损伤相对较大。静脉内皮受损，内皮细胞脱落，胶原暴露，激活血小板，导致血小板粘附聚集。对于损伤浅者，不形成明显血栓；损伤较深者，则1周后可形成明显血小板性血栓〔2〕。右心导管可引发静脉血栓形成、肺梗死等并发症〔3〕。CEC的数量变化正好可以使我们了解右心导管术对静脉内皮的损伤程度，明确右心导管术各步骤在造成静脉内皮受损的过程中所起的作用。有助于弄清右心导管术后，血栓形成等并发症的机制，预测病情的进展，防止术后此类并发症的发生。
参考文献
1，阮长耿，王兆钺，王鸿利，等主编.内皮细胞形态学检测方法.见：李家增，王鸿利，韩忠朝主编.血液实验学.上海：上海科学技术出版社，1997.289～290
2，Willerson J T.Conversion from chronic to acute coronary heart disease syndromes:Role of platelets and platelet products.Tex Heart Inst J,1995,22:13～19
3，张维君，姜腾勇，胡旭东主编.心导管学.北京：人民卫生出版社，1997.649～650
(收稿 2000-06-08), 百拇医药
单位：同济医科大学心血管病研究所 同济医科大学附属协和医院心内科 武汉，430022
关键词：循环内皮细胞；右心导管术
临床心血管病杂志000806 摘要 目的：观察右心导管术对静脉内皮的影响，明确其机制及临床意义。方法：12例行右心导管术的患者，手术前后分别采静脉血4.5 ml，用五步法分离脱落的静脉内皮细胞，免疫荧光法鉴别，光镜计数。结果：右心导管术后循环内皮细胞计数明显高于术前(P<0.001)，但其数量变化与手术时间无线性关系。结论：右心导管术对静脉内皮有机械损伤。
Effect of right heart catheterization on venous
endothelial cells and clinic significance
, 百拇医药
FANG Hong，FENG Yi-bai，FANG Yin
CHENG Zhi-jian，WANG Qiang，LI Yu-shu
(Institute of Cardiovascular Disease,Tongji Medical University, Wuhan 430022)
LIU Jian
(Department of Caroliology,Yellow Stone Steel Hospital,Hubei)
Abstract Objective:To observe the effect of right heart catheterization on venous blood endothelium cells and clinic significance.Method:4.5 ml blood were obtained from 12 cases who were performed right heart catheterization before and after operation.Isolation was carried out according to the five stage method.These cells were confirmed by immunofluorescence and counted under optical microscope.Result:The venous endothelial cells after operation was significantly higher than those before operation.There wasn′t linear correlation between the number change of circulating endothelial cells and operating duration. Conclusion:Right heart catheterization may injure venous endothelium.
, 百拇医药
Key word Circulating endothelial cells Right heart catheterization
近年来随着心血管介入术的广泛开展，医源性血管损伤越来越多见。近来我们观察了12例行右心导管检查的患者静脉血中循环内皮细胞(CEC)的变化规律，以求弄清右心导管术对血管内皮的轻度损伤及危害。
1 对象与方法
1.1 对象
选行右心导管术患者12例，男8例，女4例，年龄(17.45±2.38)岁。法洛四联征6例，室间隔缺损3例，艾森曼格综合征3例。手术时间：20 min 9例，30～60 min 3例，其中2例穿刺45 min，1例送导管及多角度摄影40 min。
1.2 方法
, http://www.100md.com
CEC分离与计数：于手术前后采静脉血4.5 ml，加入抗凝剂用五步法分离，离心机为Biofuge 28RS。其步骤是〔1〕：抗凝血离心20 min(4℃，395 g)，收集上清液1 ml，加入0.1% ADP 0.2 ml，用YKH-Ⅲ液体快速混合器振荡10 min，将上述混合液离心20 min(40℃，395 g)，取上清液离心20 min (4℃，2 100 g)，弃上清，加0.1 ml的生理盐水备检。取一小滴(0.9 μl)备检液滴入细胞计数池，Nikon HT-DX光学显微镜下计数，同一标本计数4次，取其平均值。CEC形态学观察采用ⅧR：Ag间接免疫荧光法鉴别后，加Giemsa染色液复染，光镜下观察、摄影。
2 结果
12例患者右心导管术前、后CEC的数量分别为1.53±0.97,3.56±1.62,术后显著高于术前(P<0.001)。CEC的增加程度与操作时间无相关性(P>0.05)。
, http://www.100md.com
CEC形态学与鉴别：CEC形态特殊、多样，体积较大，直径最大为(47.32±11.32)μm，最小为(36.34±10.40)μm，形状大多极不规则，可呈多边形、类椭圆形、梭形。绝大多数无核，胞体皱缩、折叠、扭曲，有多个凸起，胞浆内可见条絮状、颗粒状物质；少数核固缩，呈点状，胞浆较少；极少数胞核清楚、胞浆丰富。免疫荧光标记的CEC形状不规则，轮廓清楚，无核，呈黄绿色，对照组则仅有点状非特异荧光。Giemsa复染后，胞质内可见颗粒状物质，细胞边缘清楚，形态与荧光标记的细胞类似。
3 讨论
CEC数量变化与血管内皮的损伤有相关性，是反映血管内皮受损的重要指标之一〔1〕。本实验利用
其来了解右心导管术对静脉内皮的影响。结果显示术前、术后CEC数量有明显的差异(P<0.001),术后高于术前，表明右心导管术对静脉内皮有损害。引发内皮损伤的主要原因从理论上来说是机械因素，通过刺、挫、擦、刮、戳等造成内皮细胞脱落。同时导管的伸入，影响到血流也可损害内皮。按常理推测，手术时间应与CEC数量变化成正相关，时间越长，CEC数量则越多。然而，我们从实验中观察到的结果发现：CEC数量与时间并无直线相关性，说明CEC的数量并不一定因手术时间的长短而改变。根据我们临床观察，影响右心导管术进程的因素有：①穿刺困难；②导管难到位；③多角度摄影等。由本实验可以看出，定位不准，多次穿刺，是影响手术的首要原因，由于其并未直接损伤动、静脉内皮，CEC肯定不会有很大变化；导管的操作手法不熟练或血管、心脏畸形均可致导管难以到位，虽然也会有影响，但导管表面多光滑，头钝圆，因此对内皮的损伤可能较轻；多次注射造影剂，因多不直接对准管壁，亦不可能造成很大损害。因此，右心导管术的损伤作用可能主要发生在心导管术上鞘和插导引钢丝时，刺、戳的损伤作用大于擦、刮。
, http://www.100md.com
CEC有三种形态，其中不规则，核缺失、固缩者占大多数，这提示我们右心导管术可能对生理功能减低的内皮细胞损伤相对较大。静脉内皮受损，内皮细胞脱落，胶原暴露，激活血小板，导致血小板粘附聚集。对于损伤浅者，不形成明显血栓；损伤较深者，则1周后可形成明显血小板性血栓〔2〕。右心导管可引发静脉血栓形成、肺梗死等并发症〔3〕。CEC的数量变化正好可以使我们了解右心导管术对静脉内皮的损伤程度，明确右心导管术各步骤在造成静脉内皮受损的过程中所起的作用。有助于弄清右心导管术后，血栓形成等并发症的机制，预测病情的进展，防止术后此类并发症的发生。
参考文献
1，阮长耿，王兆钺，王鸿利，等主编.内皮细胞形态学检测方法.见：李家增，王鸿利，韩忠朝主编.血液实验学.上海：上海科学技术出版社，1997.289～290
2，Willerson J T.Conversion from chronic to acute coronary heart disease syndromes:Role of platelets and platelet products.Tex Heart Inst J,1995,22:13～19
3，张维君，姜腾勇，胡旭东主编.心导管学.北京：人民卫生出版社，1997.649～650
(收稿 2000-06-08), 百拇医药