中药对模拟颈神经炎大鼠血浆前列腺素E2作用的放免测定观察
张军 孙树椿
摘 要 目的 观察中药颈椎Ⅰ号对模拟颈神经根炎大鼠血浆中PGE2含量的影响。方法 将72只模拟颈神经根炎Wistar大鼠随机分为四组：颈椎Ⅰ号中剂量组、颈椎Ⅰ号高剂量组、颈复康组及空白对照组，分别给予颈椎Ⅰ号中剂量、高剂量、颈复康及凉开水，于造模后3天、7天、14天，取血浆进行PGE2含量的放射免疫测定。结果 颈椎Ⅰ号中剂量、高剂量可以明显减轻模拟鼠血浆中PGE2含量。结论 颈椎Ⅰ号对模拟颈神经根炎具有良好的抗炎功效。
关键词：中草药 颈 神经根炎 放射免疫测定
我们从1995年8月以来，在临床上应用中药颈椎Ⅰ号对神经根型颈椎病急性期的治疗进行了系统观察，并与颈复康进行了对照。结果发现，中药颈椎Ⅰ号疗效好，起效快，尤其在消除急性期炎症、水肿引发的疼痛表现最为突出。我们在以往的工作中，经P物质、电生理学等方面的试验，说明了该品种的镇痛、促进神经修复的机理所在[1～4]。为进一步评论该药的疗效，我们仍采用模拟颈神经根炎的动物模型[1～3]，通过放射免疫方法，对大鼠血浆内前列腺素E2(以下简称PGE2)的含量进行了测定，以说明颈椎Ⅰ号抗炎、消肿的作用机理。
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1 材料和方法
1.1 药物 中药颈椎Ⅰ号(由三七、川芎、元胡、羌活等7味中药组成)饮片(由本院药房提供)，按临床用药比例，制成135%、270%水煎浓缩液两种，每毫升含生药分别为1.35 g和2.7 g。颈复康由河北省承德中药厂生产，10 克/袋，冀卫药准字(1985)1814号，按临床用药比例，用温开水制成60%药液，每毫升含0.6 g。
1.2 动物 Wistar大白鼠72只，体重150±2.5 g，雌雄各半，由中国中医研究院动物中心提供。
1.3 模型制作 模拟颈神经根炎的大鼠模型，仍然按照文献所记载的方法进行，将浸有福尔马林的定量滤纸片放在颈6、7神经根腋下[1～3]。
1.4 实验分组及给药剂量 将72只模型鼠随机分为颈椎Ⅰ号中剂量组、高剂量组、颈复康组及空白组4组，每组18只。给药剂量按人与大鼠体表面积换算，颈椎Ⅰ号中剂量组：每日灌胃135%颈椎Ⅰ号水煎浓缩液6 ml。颈椎Ⅰ号高剂量组：每日灌胃270%颈椎Ⅰ号水煎浓缩液6 ml。颈复康组：每日灌胃60%颈复康药液6 ml。空白组：每日灌胃6 ml凉开水。4组动物均在同样的环境中饲养，自由饮水，摄食，饲料由中国中医研究院动物中心提供。
, 百拇医药
1.5 PGE2的放射免疫测定法 按汪钟等建立的前列腺素放射免疫测定法进行[5，6]。PGE2放射免疫测定药盒由中国医学科学院基础医学研究所药理室提供。
(1) 样品处理 分别在造模后3天、7天、14天三个时间段，每次从各组中随机取出6只，经心脏取血加入肝素—消炎痛—生理盐水溶液(抗凝和抑制PG合成)置于4℃离心(2500转/分钟)10分钟分离血浆，取1ml血浆加1mol/LHCl酸化调pH至3.5～4。用乙酸乙酯5 ml提取，以2500转/分钟，离心(4℃)20分钟重复提取和离心两次，收集两次提取液，氮气吹干，加1ml无水乙醇分样吹干后，置于-20℃冰箱待放射免疫测定。
(2) 样品测定 设总计数管(T)，空白管即非特异性结合管(NSB)，最高结合管(BO)，标准管和样品管。放射免疫测定(RIA)加液程序为0.1 mol/1PBS pH7.4，之后加入抗血清，最后加入3H-PG或3H-PGM(5000 cpm±)。加入BSA-C之前4℃温育3小时。然后加BSA-C分离，置旋涡器混匀10秒钟，再于4 ℃放10分钟，离心(12500转/分，20分钟，4 ℃)，将上清液倒入闪烁杯中，加入闪烁液混匀，放置4小时以上，在液闪仪(FJ-2100型液闪仪，由西安262厂生产)上测放射强度。计算采用T、BO、NSB标准线的斜率、截距，经Casio FX502P程序处理得出结果，并进行组间t检验。
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2 结果(见表1)
(1) 在造模3天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组血浆中PGE2的含量明显低于空白组，经统计分析，差异具有非常显著性意义(P<0.001)，亦低于颈复康组(P<0.05)；颈复康组血浆中PGE2的含量也低于空白组，两者相比较，差异具有显著性意义(P<0.01)。说明在造模3天，颈椎Ⅰ号与颈复康对模拟颈神经根炎大鼠血浆中PGE2的含量均具有减少作用，但颈椎Ⅰ号两个剂量组的作用优于颈复康组。
表1 造模3天血浆中PGE2的含量变化(X±s)
组别
动物数(只)
PGE2(pg/ml)
, 百拇医药
3天
7天
14天
空白组
6
610.14±38.75
542.34±22.51
403.23±29.44
颈椎Ⅰ号中剂量组
6
513.95±31.61
403.51±21.61
, 百拇医药
327.61±25.12
颈椎Ⅰ号高剂量组
6
502.51±37.80
396.28±20.03
324.80±22.37
颈复康组
6
551.46±32.07
451.46±19.24
351.42±32.46
(2)在造模7天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组及颈复康组血浆中PGE2的含量明显低于空白组，经统计分析，差异具有非常显著性意义(P<0.001)。颈椎Ⅰ号中、高剂量组的含量又低于与颈复康组，两者相比较，差异具有显著性意义(P<0.01)。说明在造模7天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组与颈复康组对模拟颈神经根炎大鼠血浆中PGE2的含量均具有减轻作用，但颈椎Ⅰ号两个剂量组作用仍优于颈复康组。
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(3)在造模14天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组血浆中PGE2的含量明显低于空白组，经统计分析，差异具有显著性意义(P<0.01)，颈复康组血浆中PGE2的含量也低于空白组，两者相比较，具有显著性差异(P<0.05)。颈椎Ⅰ号中、高剂量组与颈复康组相比较，差异无意义(P>0.05)。从而说明在造模14天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组与颈复康组对模拟颈神经根炎大鼠血浆中PGE2的含量均具有减少作用，颈椎Ⅰ号两个剂量组的作用略好于颈复康组，但统计学无明显差异。
3 讨论
(1)近年来的研究表明[1～4]：神经根型颈椎病急性期根性症状的产生与神经根炎症及传导特性损害密切相关。在神经根管狭窄的基础上，损伤继发的生理、生化改变，出现代谢紊乱、代谢产物瘀积(如突出髓核中蛋白样物质，酸性产物蓄积)，生物活性物质释放(组织胺、前列腺素、磷酯酶A2、P物质等化学性物质)会刺激神经根。导致神经根充血、水肿、炎症反应及传导特性损害，提高了根性症状的敏感性。此外，突出椎间盘所溢出的降解产物如神经肽类物质可引起神经根外膜的直接损害；椎管内脂肪结缔组织、韧带因劳损变性肥厚产生无菌性炎症反应，这些组织均可刺激神经根产生炎症并引起根性症状。
, 百拇医药
(2)炎症本身是一个比较复杂的生理、生化反应过程，分别与白细胞趋化、前列腺素、组织胺、5-羟色胺、各种酶类等的水平增高有关[4]。PGE2为促炎介质，具有致热、增强血管通透性、加速溶酶体释放、促进白细胞趋化作用，对于介导炎症反应，特别是早期炎症反应发挥重要作用。炎症的全过程中都存在着PGE2的合成与释放。PGE2不引起明显疼痛，而是使痛觉传入神经末梢对组织胺、缓激肽的反应更敏感，对疼痛的产生起到超敏状态[7～9]。本试验中模型空白组，在造模3天血浆中PGE2含量最高，说明本模型早期炎症反应较重，与本模型在早期疼痛较敏感等方面的试验结果相吻合[1～3]，说明模拟颈神经根炎的方法引起了大鼠血浆中PGE2含量升高，可以介导炎症反应出现。
(3)本实验结果显示：颈椎Ⅰ号通过降低血浆中PGE2的含量，减轻了炎症反应机制，控制了炎症的变化发展。同时，使炎性疼痛的超敏情况有所控制，说明颈椎Ⅰ号具有明显的抗炎、消肿功效。而且，在造模3天、7天这两个阶段，颈椎Ⅰ号组对血浆中PGE2含量的改变明显优于颈复康组。从而充分解释了临床上颈椎Ⅰ号的起效快、抗炎消肿作用好的优势。此外，进一步说明了该中药能控制炎症反应，具有消肿、镇痛的作用，与阻止PGE2的合成和释放密切有关。
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张军(中国中医研究院骨伤科研究所，北京 100700)
孙树椿(中国中医研究院骨伤科研究所，北京 100700)
参考文献
[1] 张军，尚秀兰，孙树椿.中药治疗模拟颈神经根炎神经根内SP放免观察.中国中医骨伤科，1998，6(2)：4.
[2] 张军，尚秀兰，孙树椿.颈椎Ⅰ号治疗模拟颈神经根炎电生理学研究.中国中医骨伤科，1998，6(3)：1.
[3] 张军，孙树椿.中药颈椎Ⅰ号治疗模拟颈神经根炎病理学观察.中国骨伤，1999，(6)：13.
[4] 张军，尚秀兰，孙树椿.神经根型颈椎病的解剖学基础和发病机理研究.中国中医骨伤科，1999，7(1)：1.
, 百拇医药
[5] 汪钟.血栓素B2放射免疫分析.中国医学科学院学报，1986，8(2)：141.
[6] 段金虹.山莨菪碱、川芎嗪预防肺水肿时大鼠动脉血浆及支气管肺泡灌洗液中6-Keto-PGF1α和TXB2含量的变化.中国药理学通报，1995，11(3)：206.
[7] Kuslich SD，Vistrom CL，Michael CJ.The tissue origin of low back and sciatica：a report of pain responses to tissue stimulation during operation on the lumbar spine using local anesthesia.Orthop Clin North Am，1991，22(2)：181.
[8] Olmarker K，Holm S，Kydevik B.Importance of compression onset rate for the degree of impairment of impulse propagation in experimental compression injury of the porcine cauda equina.Spine，1990，15(5)：416.
[9] Saal JS，Frason RC，Dobrow R.High level of inflammatory phospholipase：an activity in lumbar disc herniations.Spine，1990，15(7)：674., 百拇医药
摘 要 目的 观察中药颈椎Ⅰ号对模拟颈神经根炎大鼠血浆中PGE2含量的影响。方法 将72只模拟颈神经根炎Wistar大鼠随机分为四组：颈椎Ⅰ号中剂量组、颈椎Ⅰ号高剂量组、颈复康组及空白对照组，分别给予颈椎Ⅰ号中剂量、高剂量、颈复康及凉开水，于造模后3天、7天、14天，取血浆进行PGE2含量的放射免疫测定。结果 颈椎Ⅰ号中剂量、高剂量可以明显减轻模拟鼠血浆中PGE2含量。结论 颈椎Ⅰ号对模拟颈神经根炎具有良好的抗炎功效。
关键词：中草药 颈 神经根炎 放射免疫测定
我们从1995年8月以来，在临床上应用中药颈椎Ⅰ号对神经根型颈椎病急性期的治疗进行了系统观察，并与颈复康进行了对照。结果发现，中药颈椎Ⅰ号疗效好，起效快，尤其在消除急性期炎症、水肿引发的疼痛表现最为突出。我们在以往的工作中，经P物质、电生理学等方面的试验，说明了该品种的镇痛、促进神经修复的机理所在[1～4]。为进一步评论该药的疗效，我们仍采用模拟颈神经根炎的动物模型[1～3]，通过放射免疫方法，对大鼠血浆内前列腺素E2(以下简称PGE2)的含量进行了测定，以说明颈椎Ⅰ号抗炎、消肿的作用机理。
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1 材料和方法
1.1 药物 中药颈椎Ⅰ号(由三七、川芎、元胡、羌活等7味中药组成)饮片(由本院药房提供)，按临床用药比例，制成135%、270%水煎浓缩液两种，每毫升含生药分别为1.35 g和2.7 g。颈复康由河北省承德中药厂生产，10 克/袋，冀卫药准字(1985)1814号，按临床用药比例，用温开水制成60%药液，每毫升含0.6 g。
1.2 动物 Wistar大白鼠72只，体重150±2.5 g，雌雄各半，由中国中医研究院动物中心提供。
1.3 模型制作 模拟颈神经根炎的大鼠模型，仍然按照文献所记载的方法进行，将浸有福尔马林的定量滤纸片放在颈6、7神经根腋下[1～3]。
1.4 实验分组及给药剂量 将72只模型鼠随机分为颈椎Ⅰ号中剂量组、高剂量组、颈复康组及空白组4组，每组18只。给药剂量按人与大鼠体表面积换算，颈椎Ⅰ号中剂量组：每日灌胃135%颈椎Ⅰ号水煎浓缩液6 ml。颈椎Ⅰ号高剂量组：每日灌胃270%颈椎Ⅰ号水煎浓缩液6 ml。颈复康组：每日灌胃60%颈复康药液6 ml。空白组：每日灌胃6 ml凉开水。4组动物均在同样的环境中饲养，自由饮水，摄食，饲料由中国中医研究院动物中心提供。
, 百拇医药
1.5 PGE2的放射免疫测定法 按汪钟等建立的前列腺素放射免疫测定法进行[5，6]。PGE2放射免疫测定药盒由中国医学科学院基础医学研究所药理室提供。
(1) 样品处理 分别在造模后3天、7天、14天三个时间段，每次从各组中随机取出6只，经心脏取血加入肝素—消炎痛—生理盐水溶液(抗凝和抑制PG合成)置于4℃离心(2500转/分钟)10分钟分离血浆，取1ml血浆加1mol/LHCl酸化调pH至3.5～4。用乙酸乙酯5 ml提取，以2500转/分钟，离心(4℃)20分钟重复提取和离心两次，收集两次提取液，氮气吹干，加1ml无水乙醇分样吹干后，置于-20℃冰箱待放射免疫测定。
(2) 样品测定 设总计数管(T)，空白管即非特异性结合管(NSB)，最高结合管(BO)，标准管和样品管。放射免疫测定(RIA)加液程序为0.1 mol/1PBS pH7.4，之后加入抗血清，最后加入3H-PG或3H-PGM(5000 cpm±)。加入BSA-C之前4℃温育3小时。然后加BSA-C分离，置旋涡器混匀10秒钟，再于4 ℃放10分钟，离心(12500转/分，20分钟，4 ℃)，将上清液倒入闪烁杯中，加入闪烁液混匀，放置4小时以上，在液闪仪(FJ-2100型液闪仪，由西安262厂生产)上测放射强度。计算采用T、BO、NSB标准线的斜率、截距，经Casio FX502P程序处理得出结果，并进行组间t检验。
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2 结果(见表1)
(1) 在造模3天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组血浆中PGE2的含量明显低于空白组，经统计分析，差异具有非常显著性意义(P<0.001)，亦低于颈复康组(P<0.05)；颈复康组血浆中PGE2的含量也低于空白组，两者相比较，差异具有显著性意义(P<0.01)。说明在造模3天，颈椎Ⅰ号与颈复康对模拟颈神经根炎大鼠血浆中PGE2的含量均具有减少作用，但颈椎Ⅰ号两个剂量组的作用优于颈复康组。
表1 造模3天血浆中PGE2的含量变化(X±s)
组别
动物数(只)
PGE2(pg/ml)
, 百拇医药
3天
7天
14天
空白组
6
610.14±38.75
542.34±22.51
403.23±29.44
颈椎Ⅰ号中剂量组
6
513.95±31.61
403.51±21.61
, 百拇医药
327.61±25.12
颈椎Ⅰ号高剂量组
6
502.51±37.80
396.28±20.03
324.80±22.37
颈复康组
6
551.46±32.07
451.46±19.24
351.42±32.46
(2)在造模7天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组及颈复康组血浆中PGE2的含量明显低于空白组，经统计分析，差异具有非常显著性意义(P<0.001)。颈椎Ⅰ号中、高剂量组的含量又低于与颈复康组，两者相比较，差异具有显著性意义(P<0.01)。说明在造模7天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组与颈复康组对模拟颈神经根炎大鼠血浆中PGE2的含量均具有减轻作用，但颈椎Ⅰ号两个剂量组作用仍优于颈复康组。
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(3)在造模14天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组血浆中PGE2的含量明显低于空白组，经统计分析，差异具有显著性意义(P<0.01)，颈复康组血浆中PGE2的含量也低于空白组，两者相比较，具有显著性差异(P<0.05)。颈椎Ⅰ号中、高剂量组与颈复康组相比较，差异无意义(P>0.05)。从而说明在造模14天，颈椎Ⅰ号中、高剂量组与颈复康组对模拟颈神经根炎大鼠血浆中PGE2的含量均具有减少作用，颈椎Ⅰ号两个剂量组的作用略好于颈复康组，但统计学无明显差异。
3 讨论
(1)近年来的研究表明[1～4]：神经根型颈椎病急性期根性症状的产生与神经根炎症及传导特性损害密切相关。在神经根管狭窄的基础上，损伤继发的生理、生化改变，出现代谢紊乱、代谢产物瘀积(如突出髓核中蛋白样物质，酸性产物蓄积)，生物活性物质释放(组织胺、前列腺素、磷酯酶A2、P物质等化学性物质)会刺激神经根。导致神经根充血、水肿、炎症反应及传导特性损害，提高了根性症状的敏感性。此外，突出椎间盘所溢出的降解产物如神经肽类物质可引起神经根外膜的直接损害；椎管内脂肪结缔组织、韧带因劳损变性肥厚产生无菌性炎症反应，这些组织均可刺激神经根产生炎症并引起根性症状。
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(2)炎症本身是一个比较复杂的生理、生化反应过程，分别与白细胞趋化、前列腺素、组织胺、5-羟色胺、各种酶类等的水平增高有关[4]。PGE2为促炎介质，具有致热、增强血管通透性、加速溶酶体释放、促进白细胞趋化作用，对于介导炎症反应，特别是早期炎症反应发挥重要作用。炎症的全过程中都存在着PGE2的合成与释放。PGE2不引起明显疼痛，而是使痛觉传入神经末梢对组织胺、缓激肽的反应更敏感，对疼痛的产生起到超敏状态[7～9]。本试验中模型空白组，在造模3天血浆中PGE2含量最高，说明本模型早期炎症反应较重，与本模型在早期疼痛较敏感等方面的试验结果相吻合[1～3]，说明模拟颈神经根炎的方法引起了大鼠血浆中PGE2含量升高，可以介导炎症反应出现。
(3)本实验结果显示：颈椎Ⅰ号通过降低血浆中PGE2的含量，减轻了炎症反应机制，控制了炎症的变化发展。同时，使炎性疼痛的超敏情况有所控制，说明颈椎Ⅰ号具有明显的抗炎、消肿功效。而且，在造模3天、7天这两个阶段，颈椎Ⅰ号组对血浆中PGE2含量的改变明显优于颈复康组。从而充分解释了临床上颈椎Ⅰ号的起效快、抗炎消肿作用好的优势。此外，进一步说明了该中药能控制炎症反应，具有消肿、镇痛的作用，与阻止PGE2的合成和释放密切有关。
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张军(中国中医研究院骨伤科研究所，北京 100700)
孙树椿(中国中医研究院骨伤科研究所，北京 100700)
参考文献
[1] 张军，尚秀兰，孙树椿.中药治疗模拟颈神经根炎神经根内SP放免观察.中国中医骨伤科，1998，6(2)：4.
[2] 张军，尚秀兰，孙树椿.颈椎Ⅰ号治疗模拟颈神经根炎电生理学研究.中国中医骨伤科，1998，6(3)：1.
[3] 张军，孙树椿.中药颈椎Ⅰ号治疗模拟颈神经根炎病理学观察.中国骨伤，1999，(6)：13.
[4] 张军，尚秀兰，孙树椿.神经根型颈椎病的解剖学基础和发病机理研究.中国中医骨伤科，1999，7(1)：1.
, 百拇医药
[5] 汪钟.血栓素B2放射免疫分析.中国医学科学院学报，1986，8(2)：141.
[6] 段金虹.山莨菪碱、川芎嗪预防肺水肿时大鼠动脉血浆及支气管肺泡灌洗液中6-Keto-PGF1α和TXB2含量的变化.中国药理学通报，1995，11(3)：206.
[7] Kuslich SD，Vistrom CL，Michael CJ.The tissue origin of low back and sciatica：a report of pain responses to tissue stimulation during operation on the lumbar spine using local anesthesia.Orthop Clin North Am，1991，22(2)：181.
[8] Olmarker K，Holm S，Kydevik B.Importance of compression onset rate for the degree of impairment of impulse propagation in experimental compression injury of the porcine cauda equina.Spine，1990，15(5)：416.
[9] Saal JS，Frason RC，Dobrow R.High level of inflammatory phospholipase：an activity in lumbar disc herniations.Spine，1990，15(7)：674., 百拇医药