双肾双夹加灌附子汤法复制高血压肝阳上亢证大鼠模型
作者：肖纯 金益强 王勇华 胡随瑜 向群辉 宋炜熙 鄢东红 张翔 刘爱平
单位：湖南医科大学附属湘雅医院中西医结合研究所 410008
关键词：肾血管性高血压；肝阳上亢证；附子汤；动物模型
中国现代医学杂志000908 本文采用双侧肾动脉狭窄术(简称双肾双夹)加灌附子汤法复制高血压肝 阳上亢证大鼠模型，结果显示：所有模型大鼠血压均明显升高，且不同程度出现激惹、眼结 合膜充血、旋转时间明显缩短(提示头晕)及口渴、消瘦等证侯特征，并有少量动物发生出血 性中风；模型大鼠血浆去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)显著升高，脑干NE明显增高，脑干5 -羟色胺(5-HT)明显下降；潜阳方能明显减轻模型大鼠各种症状，降低血浆NE、E及脑干NE， 升高脑干5-HT。提示该模型具有与人类高血压肝阳上亢证相似的基本特征。
分类号 R544.1+4
, 百拇医药
TO PRODUCE THE DISEASE MODEL OF HYPERTENSIVE RATS WITH THE LIVER-YANG HYPERACTIVITY SYNDROME WITH THE METHOD OF GOLDBLATT'S 2K2C OPERATION ON RATS AND ADMINISTERING RADIX ACONITI PRAEPARATE TO RATS
Xiao Chun Jin Yiqiang Wang Yonghua Hu Suiyu Xiang Qunhui,et al.
(Institute of Intergrated TCM and Western Medicine,Xiangya Hospital, Hunan Medical University, Changsha 410008)
Abstract:We adopted the method of Goldblatt's 2k2c operation on rats and admini stering Radix Aconiti Praeparate to rats to produce the disease model of hyperte nsive rts with the Liver-Yang Hyperactivity Syndrome (LYHS). The results showed the levels of the blood pressure of all model rats evidently rose and presented with the symptoms such as thirsty, emaciation, redder eye, shorter spinning time (suggested dizzy), dysphoria and aggression. A few rats occurred cerebral hemor rhage; the levels of plasma NE, E and brainstem EN of the rats in model group in creased significantly and contents of brainstem 5-HT remarkably reduced; Qian-Ya ng decoction treatment could significantly decrease the levels of plasma NE, E a nd brainstem NE, significantly raise the contents of brainstem 5-HT and could ev idently alleviate those symptoms and lower blood pressure of model rats. It sugg ested that the model could show similarity with hypertensive patients with LYHS.
, 百拇医药
Key words:Renal Vascular Hypertension; the Liver-Yang Hyperac tivity Syndrome; Radix Aconiti Praeparate; Animal Model
肝阳上亢证是中医肝病的主要证型之一，最常见于高血压病[1 ]，可导致脑卒中。该证型的深入研究对于高血压病、中风病的防治均有重要价值。肝阳 上亢证动物模型的复制及实验研究，是临床研究的重要补充，具有重要意义。本文采用双肾 双夹加灌附子汤法复制了高血压肝阳上亢证病证结合大鼠模型，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 药物、试剂与仪器
附子汤：由单味制附子20g组成。潜阳方：由石决明30g、钩藤15g、黄芩10g、桑寄生15g、 葛根30g、川牛膝15g等组成。二方均煎煮2次，分别合并煎液。前方总计煎煮90min，浓缩 为200ml，含生药0.1g/ml；后方配制成115ml，含生药1g/ml，其中石决明先下30min， 钩藤 单煎10min。NE、E、5-HT标准品及辛烷磺酸钠均为Sigma公司产品；高效液相色谱仪为LC-9A 型，电化学检测器为L-ECD-6A型均为日本岛津产品；Spherisorb ODS C18反相色谱柱由中国 科学院大连化学物理研究所购得；二道生理记录仪LMS-2B型，成都仪器厂生产；清醒小动物 血压测量器，HX-Ⅱ型，湖南医科大学心脏生理研究室研制提供；旋转平台，根据文献自制 [2]。
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1.2 动物及分组
取健康雄性SD大鼠75只，2～3月龄，体重190～210g，由湖南医科大学实验动物中心提供。 实验动物随机分为正常组(普通饲养，不做任何处理)，附子汤组(不做二肾二夹术，同期给 予等量附子汤)，双肾双夹组(行二肾二夹术，不灌附子汤，术中死亡1只)，肝阳上亢组(处 置见1.3.1，术中死亡1只，实验期间中风2只)及潜阳方组(处置见1.3.1，实验中死亡1只)， 每组15只。
1.3 实验方法
1.3.1 模型复制及动物处置 大鼠用3%戊巴比妥钠0.1ml/100g剂量 腹腔注射麻醉，仰卧位固定，腹正中做纵行切口。钝性分离双肾动脉，用内 径为0.2mm～0.23mm自制银夹钳夹双侧肾动脉起始部，并予4～8万u青霉素预防感 染，然后逐层关腹。肝阳上亢组于术后2周伤口完全愈合开始用附子汤灌胃，20ml/kg.d， 连续4周；潜阳方组于造模完成的实验第7周起开始治 疗，剂量20ml/kg.d，治疗持续2周。以上药物剂量均按动物体 表面积系数折算，相当70kg成人临床剂量的1.9倍。
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1.3.2 观测项目及方法 一般情况观察：包括外观、性情变化、饮水量及 旋转时间，术前、第6周末、第8周末各观察1次。外观指毛色是否光泽及双眼结合膜颜色是 否加深变红；性情变化根据易激惹程度分为3级：Ⅰ级指捉持颈部时尖叫、惊跳，Ⅱ级指捉 持颈部时咬人，Ⅲ级指提尾时尖叫、惊跳甚至咬人或同笼大鼠频繁打斗；饮水量，每个鼠笼 放 大鼠一只，用带刻度的200ml水瓶供水，24h后刻度的变化值加上灌药或蒸馏水的量即为每日 饮水量；旋转时间，将大鼠立于旋转平台上，转速45转/min，如果2min仍不跌下，则停止实 验。血压：采用杨绿化等报道的尾动脉搏动法测定[3]，于术前、第1、2、3、6、 8周末各测1次。血浆NE、E及脑干NE、5-HT测定：所有动物均于实验第8周末断头处死，将血 液在4℃3000r/min离心15min，分离出血浆，放-80℃冰箱中保存待测，采血同时迅速 剥离 脑组织，分离出脑干放入液氮中冷冻1周，再转移至-80℃冰箱中待处理。NE、E、5-HT均采 用高效液相色谱法，其中儿茶酚胺类(NE、E)按Eisenhofer法[4]稍加修改，5-HT 按唐爱国等报道方法[5]稍加修改。
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1.4 统计方法
计量资料结果用均数±标准差(
±s)表示，采用多样本均数及两两比较；计数 资料比较用χ2检验。
2 结果
2.1 一般情况观察
整个实验期间，正常组大鼠毛色光泽，双眼灵活有神，行动敏捷，对周围变化反应灵敏；肝 阳上亢组大鼠毛色逐渐失去光泽，消瘦、口渴，饮水量明显增多，旋转时间明显缩短(提示 头晕)，多数动物于加灌附子汤时起出现性情变化，第6周时达高峰(Ⅱ～Ⅲ级)，并维持至第 8周末，部分大鼠双眼结合膜颜色加深变红，与正常组、附子汤组、双肾双夹组比较，差异 有显著性意义(P<0.01)，尚有2只大鼠分别于第7、8周突然出现抽搐或偏瘫，取脑组织 病检证实为脑出血，见附图；潜阳方组经2周治疗后，上述症状均不同程度减轻。见表1。
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表1 各组动物一般情况观察 (x±s) 组别
动物数
第 6 周 末
第 8 周 末
性情变化
眼结膜
充血
饮水量(ml)
旋转时间(s)
性情变化
眼结膜
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充 血
饮水量(ml)
旋转时间(s)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
正常组
15
1
0
0
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0
33±2
120
0
0
0
0
35± 6
120
附子汤组
15
2
1
02)
, http://www.100md.com
12)
43±41)2)
12 0
1
0
02)
02)
36±5
120
双肾双夹组
14
3
, 百拇医药
2
02)
02)
48±21)2)
86.5 ±9.31)2)
2
2
01)
02)
45±31)2)
83 .7±8.21)2)
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肝阳上亢组
12
2
5
51)
41)
63±31)
48.3±7 .81)
1
6
51)
51)
, 百拇医药
61±51)
47.8±6.7 1)
潜阳方组
14
2
5
71)
51)
64±51)
50.1±9.21)
6
, 百拇医药
2
03)
13)
36± 4
95.5±4.81)2)3)
注：1)与正常组比较P<0.01
2)与肝阳上亢组比较 P<0.01
3)与第6周末比较P<0.01
附图 中风大鼠脑组织病检可见基底区出血灶或桥脑弥漫性出血灶
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2.2 血压变化
肝阳上亢组及双肾双夹组均于术后第1周起快速升高，其中双肾双夹组持续至第2周后而肝阳 上 亢组持续至第3周后血压开始平稳上升，直到第6周达高峰并持续至第8周末，与正常及附 子汤组比较差异显著(P<0.01)，其中以肝阳上亢组血压上升幅度为大；潜阳方组经2 周治疗后，血压明显下降。见表2。
表2 各组动物血压动态比较 (±s，mmHg) 组别
动物数
术前
第1周末
第2周末
第3周末
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第6周末
第8 周末
正常组
15
103±6/77±3
105±3/81±4
112±7/89±3
114±5/90±5
123±5/96±7
129±5/101±4
附子汤组
15
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102±3/74±7
106±4/82±5
116±9/91±5
119±7/92±7
125±7/98±4
133±10/105±7
双肾双夹组
14
102±9/75±4
125±5/103±81)
153±9/121±71)
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165±101/130±41)2)
179±9/148±61)2)
181±11/151±9 1)2)
肝阳上亢组
12
101±4/75±8
124±9/101±71)
152±8/126±10 1)
176±11/142±91)
194±8/164±61)
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195±15/170±121)
潜阳方组
14
102±5/76±5
121±11/97±81)
155±10/123±91)
177±7/141±71)
191±9/165±101)
175±81/141±71)2 )3)
注：1)与正常组比较P<0.01
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2)与肝阳上亢组比较P <0.01
3)第8周末与第6周末比较P<0.01
2.3 血浆NE、E及脑干NE、5-HT测定
肝阳上亢组及双肾双夹组血浆NE、E及脑干NE均升高，与其他各组比较差异显著(P<0.01)，尤以肝阳上亢组升高幅度较大，脑干5-HT亦明显下降，与其他各组 比较有显著性差异(P<0.01)；潜阳方组经2周治疗后血浆NE、E及脑干NE、5-HT恢 复正常，见表3。
表3 各组动物血浆NE、E及脑干NE、5-HT比较 (±s，pmol/g) 组别
动物数
血 浆
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脑 干
NE
E
NE(湿重)
5-HT(湿重)
正常组
15
1147.60±382.1
501.4±203.8
4461.7±1083.5
4901.2± 463.5
附子汤组
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15
1204.7±401.52)
537.8±215.92)
4520.1±1 097.22)
4815.5±420.32)
双肾双夹组
14
2103.8±396.31)2)
817.2±209.51)2)
809 5.4±2174.81)2)
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4861.3±451.72)
肝阳上亢组
12
2742.3±415.81)
1024.1±241.71)
13361. 7±3015.31)
3472.1±401.51)
潜阳方组
14
1123.7±321.72)
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489.3±215.62)
4213.4±1 761.22)
5014.2±671.32)
注：1)与正常组比较P<0.01
2)与肝阳上亢组比较 P<0.013 讨论
肝阳上亢证主要病机是由于肝肾阴虚，阴不制阳而致肝阳偏亢，其主要临床证侯为眩晕、头 痛、烦躁易怒、面红目赤或面部烘热，口苦而渴，脉弦[6]。高血压病与肝阳上亢 证之间有密切关系，金氏[7]报道150例高血压病辨证分型，属肝阳上亢证者110例 ，占73%；陈氏[1]报道170例肝阳上亢证中高血压病118例，占69%。可见高血压病 最主要证型为肝阳上亢证。陈小野[8]认为，中医证侯动物模型的评价应包括以下 几个方面的内容：从病因入手进行正面论证(正论)；从临床症状本身进行论证( 本证)；将客观指标及其他相关因素作为佐证；中药治疗，以方测证(反证)。黄文权[ 9]等采用多巴胺静脉注射法复制的肝阳上亢证免模型是国内外公开报道的第一个肝阳上 亢证动物模型。该模型虽具有性情急躁易怒等人类肝阳上亢证的部分特征，但是否存在头痛 、眩 晕、口渴、脉弦等肝阳上亢证主要证侯，文中未加说明，且该模型维持时间短，各观测指标 均于停药4d后完全恢复正常，因而其应用受到很大限制。
, 百拇医药
研究表明，双肾双夹型肾血管性高血压模型在许多方面与人类高血压相似[10～12 ]，且制作简单，易成功，价廉；血压上升较快较稳定，幅度较大；易发生脑卒中，有与 中医肝阳上亢(高血压)→肝阳化风(脑卒中)相似的发展过程。本文选用该模型作为复制 高血压肝阳上亢证模型的基础。附子为辛、甘、大热之品，“入心、肝、肾三经 ”(《本草再新》)，“其性走而不守”(《本草纲目》)，能温一身之阳，与大鼠高血压模型 并用附子，必将耗伤精血，夺肝肾之阴而致肝肾阴虚，加重肝阳偏亢。本实验中肝阳上亢组 血压升高幅度较单纯双肾双夹组大，亦说明附子在肝阳上亢组高血压形成过程中起 着重要作用。在造模过程中，动物逐渐出现双眼结合膜颜色加深变红，口渴，饮水量增多， 提尾、捉持颈部或轻轻钳夹时抵抗剧烈、尖叫、暴跳以及同笼大鼠频繁打斗、咬人等攻击行 为，旋转时间明显缩短(提示头晕)，更有少数动物出现了出血性中风，这与肝阳上亢→肝阳 化风的发展过程相吻 合。可见该模型具有与人类肝阳上 亢证相似的某些临床特征。肝阳上亢证最主要的病理生理基础为外周交感--肾上腺髓质功 能偏亢[13]，表现为血、尿儿茶酚胺增高，本实验肝阳上亢组大鼠有着与此相同 的 病理生理变化。研究证实，脑内NE、5-HT的动态平衡与中枢痛阈的升降变化 及情绪波动有密 切关系[14]：当脑内NE明显升高和(或)5-HT明显下降时，将 使痛阈明显下降造成头痛，并出现烦躁易怒、躁狂、攻击行为等，本模型大 鼠 脑内NE明显升高、5-HT明显下降，可能是肝阳上亢证发生头痛、烦躁易怒等证侯的重要机制 。潜阳方是金益强[8]等多年临床实践总结出来的经验方，其功能为平肝潜阳，主 治高血压病肝阳上亢证。本实验显示该方能显著降低动物血压，明显缓解模型动物各种症状 ，并能显著升高脑内5-HT含量，使升高的血浆NE、E及脑内NE降至正常。这无疑为该模型的论 证提供了很好的反证依据。
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综上所述，本模型具有以下特征：造模方法符合中医有关肝阳上亢证病因病机的理论； 100%的造模动物形成了稳定的高血压，且出现了类似人类肝阳上亢证的临床证侯；存在血浆 NE、E增高即外周交感-肾上腺髓质功能偏亢病理生化基础；少数模型大鼠发生出血性中风， 与肝阳上亢→肝阳化风发展过程吻合；潜阳方治疗有明显疗效。本模型具备人类高血压肝阳 上亢证的基本特征，可供进一步探讨肝阳上亢证本质及中医药理、药效学研究应用。
国家自然科学基金重点资助项目 No 39330240
参考文献
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2，Kleiser B,Reempts JV,Deuren BV,et al.Favourable effect of flunarizine on the recovery from hemiparisis in rats with intracerebral hematomas.Neuroscie nce Letters,1989;103:225～228
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3，杨绿化，李云霞.无创测量大鼠收缩压和舒张压的新仪器和新方法.中国应用生理 学杂志，1991；7(1)：62～64
4，Eisenhofer G,Goldstein DS,Stalt R,et al.Simultaneouos liquidchromatogr aphic determination of 3,4 dihydrixy-phenylalamine in plasma,and their reponses to inhibition of momoamine oxidase.Clin Chem,1986;32(11):2030～2033
5，唐爱国.高效液相色谱--电化学检测法同时测定血浆中5-羟色胺和5-羟吲哚乙 酸.色谱，1995；13(6)：472～473
6，陈国林，潘其民，赵玉秋，等.中医肝病症侯临床辩证标准的研究.中国医药学报 ，1990；5(1)：66～73
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7，金益强，胡随瑜，潘其民，等.高血压病150例辩证施治的研究.湖南医药杂志，1 978；5：6～9
8，陈小野主编.实用中医证侯动物模型学.北京：中国协和医科大学.北京医 科大学联合出版社，1993：47～52
9，黄文权，肖，鸿，袁林贵.肝阳上亢证型实验动物模型研究初探.中国中医急症， 1996；5(1)：36～37
10，黄如训，莫建伟，苏镇培，等.肾血管性高血压大鼠脑血管病变.中华神经外科 杂志，1990；6(增刊)：38
11，曾进胜，黄如训.易卒中型肾血管性高血压大鼠的心脏损害.中国高血压杂志，1 995；3(1)：18
12，张临琴，黄如训，陈颖贤，等.易卒中型肾血管性高血压大鼠的肾脏改变.中华 肾脏病杂志，1995；11(2)：85
13，金益强，黎杏群，陈国林，等.肝阳上亢证本质研究.中西医结合杂志，1988；9 (3)：136
14，韩济生主编.神经科学纲要.北京：北京医科大学*中国协和医科大学联合出版 社，1993；362：395～396
1999-12-05收稿, 百拇医药
单位：湖南医科大学附属湘雅医院中西医结合研究所 410008
关键词：肾血管性高血压；肝阳上亢证；附子汤；动物模型
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Xiao Chun Jin Yiqiang Wang Yonghua Hu Suiyu Xiang Qunhui,et al.
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Abstract:We adopted the method of Goldblatt's 2k2c operation on rats and admini stering Radix Aconiti Praeparate to rats to produce the disease model of hyperte nsive rts with the Liver-Yang Hyperactivity Syndrome (LYHS). The results showed the levels of the blood pressure of all model rats evidently rose and presented with the symptoms such as thirsty, emaciation, redder eye, shorter spinning time (suggested dizzy), dysphoria and aggression. A few rats occurred cerebral hemor rhage; the levels of plasma NE, E and brainstem EN of the rats in model group in creased significantly and contents of brainstem 5-HT remarkably reduced; Qian-Ya ng decoction treatment could significantly decrease the levels of plasma NE, E a nd brainstem NE, significantly raise the contents of brainstem 5-HT and could ev idently alleviate those symptoms and lower blood pressure of model rats. It sugg ested that the model could show similarity with hypertensive patients with LYHS.
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Key words:Renal Vascular Hypertension; the Liver-Yang Hyperac tivity Syndrome; Radix Aconiti Praeparate; Animal Model
肝阳上亢证是中医肝病的主要证型之一，最常见于高血压病[1 ]，可导致脑卒中。该证型的深入研究对于高血压病、中风病的防治均有重要价值。肝阳 上亢证动物模型的复制及实验研究，是临床研究的重要补充，具有重要意义。本文采用双肾 双夹加灌附子汤法复制了高血压肝阳上亢证病证结合大鼠模型，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 药物、试剂与仪器
附子汤：由单味制附子20g组成。潜阳方：由石决明30g、钩藤15g、黄芩10g、桑寄生15g、 葛根30g、川牛膝15g等组成。二方均煎煮2次，分别合并煎液。前方总计煎煮90min，浓缩 为200ml，含生药0.1g/ml；后方配制成115ml，含生药1g/ml，其中石决明先下30min， 钩藤 单煎10min。NE、E、5-HT标准品及辛烷磺酸钠均为Sigma公司产品；高效液相色谱仪为LC-9A 型，电化学检测器为L-ECD-6A型均为日本岛津产品；Spherisorb ODS C18反相色谱柱由中国 科学院大连化学物理研究所购得；二道生理记录仪LMS-2B型，成都仪器厂生产；清醒小动物 血压测量器，HX-Ⅱ型，湖南医科大学心脏生理研究室研制提供；旋转平台，根据文献自制 [2]。
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1.2 动物及分组
取健康雄性SD大鼠75只，2～3月龄，体重190～210g，由湖南医科大学实验动物中心提供。 实验动物随机分为正常组(普通饲养，不做任何处理)，附子汤组(不做二肾二夹术，同期给 予等量附子汤)，双肾双夹组(行二肾二夹术，不灌附子汤，术中死亡1只)，肝阳上亢组(处 置见1.3.1，术中死亡1只，实验期间中风2只)及潜阳方组(处置见1.3.1，实验中死亡1只)， 每组15只。
1.3 实验方法
1.3.1 模型复制及动物处置 大鼠用3%戊巴比妥钠0.1ml/100g剂量 腹腔注射麻醉，仰卧位固定，腹正中做纵行切口。钝性分离双肾动脉，用内 径为0.2mm～0.23mm自制银夹钳夹双侧肾动脉起始部，并予4～8万u青霉素预防感 染，然后逐层关腹。肝阳上亢组于术后2周伤口完全愈合开始用附子汤灌胃，20ml/kg.d， 连续4周；潜阳方组于造模完成的实验第7周起开始治 疗，剂量20ml/kg.d，治疗持续2周。以上药物剂量均按动物体 表面积系数折算，相当70kg成人临床剂量的1.9倍。
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1.3.2 观测项目及方法 一般情况观察：包括外观、性情变化、饮水量及 旋转时间，术前、第6周末、第8周末各观察1次。外观指毛色是否光泽及双眼结合膜颜色是 否加深变红；性情变化根据易激惹程度分为3级：Ⅰ级指捉持颈部时尖叫、惊跳，Ⅱ级指捉 持颈部时咬人，Ⅲ级指提尾时尖叫、惊跳甚至咬人或同笼大鼠频繁打斗；饮水量，每个鼠笼 放 大鼠一只，用带刻度的200ml水瓶供水，24h后刻度的变化值加上灌药或蒸馏水的量即为每日 饮水量；旋转时间，将大鼠立于旋转平台上，转速45转/min，如果2min仍不跌下，则停止实 验。血压：采用杨绿化等报道的尾动脉搏动法测定[3]，于术前、第1、2、3、6、 8周末各测1次。血浆NE、E及脑干NE、5-HT测定：所有动物均于实验第8周末断头处死，将血 液在4℃3000r/min离心15min，分离出血浆，放-80℃冰箱中保存待测，采血同时迅速 剥离 脑组织，分离出脑干放入液氮中冷冻1周，再转移至-80℃冰箱中待处理。NE、E、5-HT均采 用高效液相色谱法，其中儿茶酚胺类(NE、E)按Eisenhofer法[4]稍加修改，5-HT 按唐爱国等报道方法[5]稍加修改。
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1.4 统计方法
计量资料结果用均数±标准差(
±s)表示，采用多样本均数及两两比较；计数 资料比较用χ2检验。2 结果
2.1 一般情况观察
整个实验期间，正常组大鼠毛色光泽，双眼灵活有神，行动敏捷，对周围变化反应灵敏；肝 阳上亢组大鼠毛色逐渐失去光泽，消瘦、口渴，饮水量明显增多，旋转时间明显缩短(提示 头晕)，多数动物于加灌附子汤时起出现性情变化，第6周时达高峰(Ⅱ～Ⅲ级)，并维持至第 8周末，部分大鼠双眼结合膜颜色加深变红，与正常组、附子汤组、双肾双夹组比较，差异 有显著性意义(P<0.01)，尚有2只大鼠分别于第7、8周突然出现抽搐或偏瘫，取脑组织 病检证实为脑出血，见附图；潜阳方组经2周治疗后，上述症状均不同程度减轻。见表1。
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表1 各组动物一般情况观察 (
x±s) 组别动物数
第 6 周 末
第 8 周 末
性情变化
眼结膜
充血
饮水量(ml)
旋转时间(s)
性情变化
眼结膜
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充 血
饮水量(ml)
旋转时间(s)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
正常组
15
1
0
0
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0
33±2
120
0
0
0
0
35± 6
120
附子汤组
15
2
1
02)
, http://www.100md.com
12)
43±41)2)
12 0
1
0
02)
02)
36±5
120
双肾双夹组
14
3
, 百拇医药
2
02)
02)
48±21)2)
86.5 ±9.31)2)
2
2
01)
02)
45±31)2)
83 .7±8.21)2)
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肝阳上亢组
12
2
5
51)
41)
63±31)
48.3±7 .81)
1
6
51)
51)
, 百拇医药
61±51)
47.8±6.7 1)
潜阳方组
14
2
5
71)
51)
64±51)
50.1±9.21)
6
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2
03)
13)
36± 4
95.5±4.81)2)3)
注：1)与正常组比较P<0.01
2)与肝阳上亢组比较 P<0.01
3)与第6周末比较P<0.01
附图 中风大鼠脑组织病检可见基底区出血灶或桥脑弥漫性出血灶
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2.2 血压变化
肝阳上亢组及双肾双夹组均于术后第1周起快速升高，其中双肾双夹组持续至第2周后而肝阳 上 亢组持续至第3周后血压开始平稳上升，直到第6周达高峰并持续至第8周末，与正常及附 子汤组比较差异显著(P<0.01)，其中以肝阳上亢组血压上升幅度为大；潜阳方组经2 周治疗后，血压明显下降。见表2。
表2 各组动物血压动态比较 (
±s，mmHg) 组别动物数
术前
第1周末
第2周末
第3周末
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第6周末
第8 周末
正常组
15
103±6/77±3
105±3/81±4
112±7/89±3
114±5/90±5
123±5/96±7
129±5/101±4
附子汤组
15
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102±3/74±7
106±4/82±5
116±9/91±5
119±7/92±7
125±7/98±4
133±10/105±7
双肾双夹组
14
102±9/75±4
125±5/103±81)
153±9/121±71)
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165±101/130±41)2)
179±9/148±61)2)
181±11/151±9 1)2)
肝阳上亢组
12
101±4/75±8
124±9/101±71)
152±8/126±10 1)
176±11/142±91)
194±8/164±61)
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195±15/170±121)
潜阳方组
14
102±5/76±5
121±11/97±81)
155±10/123±91)
177±7/141±71)
191±9/165±101)
175±81/141±71)2 )3)
注：1)与正常组比较P<0.01
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2)与肝阳上亢组比较P <0.01
3)第8周末与第6周末比较P<0.01
2.3 血浆NE、E及脑干NE、5-HT测定
肝阳上亢组及双肾双夹组血浆NE、E及脑干NE均升高，与其他各组比较差异显著(P<0.01)，尤以肝阳上亢组升高幅度较大，脑干5-HT亦明显下降，与其他各组 比较有显著性差异(P<0.01)；潜阳方组经2周治疗后血浆NE、E及脑干NE、5-HT恢 复正常，见表3。
表3 各组动物血浆NE、E及脑干NE、5-HT比较 (
±s，pmol/g) 组别动物数
血 浆
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脑 干
NE
E
NE(湿重)
5-HT(湿重)
正常组
15
1147.60±382.1
501.4±203.8
4461.7±1083.5
4901.2± 463.5
附子汤组
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15
1204.7±401.52)
537.8±215.92)
4520.1±1 097.22)
4815.5±420.32)
双肾双夹组
14
2103.8±396.31)2)
817.2±209.51)2)
809 5.4±2174.81)2)
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4861.3±451.72)
肝阳上亢组
12
2742.3±415.81)
1024.1±241.71)
13361. 7±3015.31)
3472.1±401.51)
潜阳方组
14
1123.7±321.72)
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489.3±215.62)
4213.4±1 761.22)
5014.2±671.32)
注：1)与正常组比较P<0.01
2)与肝阳上亢组比较 P<0.013 讨论
肝阳上亢证主要病机是由于肝肾阴虚，阴不制阳而致肝阳偏亢，其主要临床证侯为眩晕、头 痛、烦躁易怒、面红目赤或面部烘热，口苦而渴，脉弦[6]。高血压病与肝阳上亢 证之间有密切关系，金氏[7]报道150例高血压病辨证分型，属肝阳上亢证者110例 ，占73%；陈氏[1]报道170例肝阳上亢证中高血压病118例，占69%。可见高血压病 最主要证型为肝阳上亢证。陈小野[8]认为，中医证侯动物模型的评价应包括以下 几个方面的内容：从病因入手进行正面论证(正论)；从临床症状本身进行论证( 本证)；将客观指标及其他相关因素作为佐证；中药治疗，以方测证(反证)。黄文权[ 9]等采用多巴胺静脉注射法复制的肝阳上亢证免模型是国内外公开报道的第一个肝阳上 亢证动物模型。该模型虽具有性情急躁易怒等人类肝阳上亢证的部分特征，但是否存在头痛 、眩 晕、口渴、脉弦等肝阳上亢证主要证侯，文中未加说明，且该模型维持时间短，各观测指标 均于停药4d后完全恢复正常，因而其应用受到很大限制。
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研究表明，双肾双夹型肾血管性高血压模型在许多方面与人类高血压相似[10～12 ]，且制作简单，易成功，价廉；血压上升较快较稳定，幅度较大；易发生脑卒中，有与 中医肝阳上亢(高血压)→肝阳化风(脑卒中)相似的发展过程。本文选用该模型作为复制 高血压肝阳上亢证模型的基础。附子为辛、甘、大热之品，“入心、肝、肾三经 ”(《本草再新》)，“其性走而不守”(《本草纲目》)，能温一身之阳，与大鼠高血压模型 并用附子，必将耗伤精血，夺肝肾之阴而致肝肾阴虚，加重肝阳偏亢。本实验中肝阳上亢组 血压升高幅度较单纯双肾双夹组大，亦说明附子在肝阳上亢组高血压形成过程中起 着重要作用。在造模过程中，动物逐渐出现双眼结合膜颜色加深变红，口渴，饮水量增多， 提尾、捉持颈部或轻轻钳夹时抵抗剧烈、尖叫、暴跳以及同笼大鼠频繁打斗、咬人等攻击行 为，旋转时间明显缩短(提示头晕)，更有少数动物出现了出血性中风，这与肝阳上亢→肝阳 化风的发展过程相吻 合。可见该模型具有与人类肝阳上 亢证相似的某些临床特征。肝阳上亢证最主要的病理生理基础为外周交感--肾上腺髓质功 能偏亢[13]，表现为血、尿儿茶酚胺增高，本实验肝阳上亢组大鼠有着与此相同 的 病理生理变化。研究证实，脑内NE、5-HT的动态平衡与中枢痛阈的升降变化 及情绪波动有密 切关系[14]：当脑内NE明显升高和(或)5-HT明显下降时，将 使痛阈明显下降造成头痛，并出现烦躁易怒、躁狂、攻击行为等，本模型大 鼠 脑内NE明显升高、5-HT明显下降，可能是肝阳上亢证发生头痛、烦躁易怒等证侯的重要机制 。潜阳方是金益强[8]等多年临床实践总结出来的经验方，其功能为平肝潜阳，主 治高血压病肝阳上亢证。本实验显示该方能显著降低动物血压，明显缓解模型动物各种症状 ，并能显著升高脑内5-HT含量，使升高的血浆NE、E及脑内NE降至正常。这无疑为该模型的论 证提供了很好的反证依据。
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综上所述，本模型具有以下特征：造模方法符合中医有关肝阳上亢证病因病机的理论； 100%的造模动物形成了稳定的高血压，且出现了类似人类肝阳上亢证的临床证侯；存在血浆 NE、E增高即外周交感-肾上腺髓质功能偏亢病理生化基础；少数模型大鼠发生出血性中风， 与肝阳上亢→肝阳化风发展过程吻合；潜阳方治疗有明显疗效。本模型具备人类高血压肝阳 上亢证的基本特征，可供进一步探讨肝阳上亢证本质及中医药理、药效学研究应用。
国家自然科学基金重点资助项目 No 39330240
参考文献
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1999-12-05收稿, 百拇医药