白色念珠菌可能具有荚膜结构
白色念珠菌可能具有荚膜结构
李绣辉 马廉兰 曾祥风
关键词：白色念珠菌(Candida albicans) 荚膜 白色念珠菌(Candida albicans)又称白假丝酵母，是常见的条件致病性真菌。传统认为白色念珠菌无荚膜，我们在试验中曾发现似有荚膜结构，为此，进一步进行白色念珠菌是否具有荚膜的试验。
材料与方法
菌株：白色念珠菌、肺炎双球菌、乙型副伤寒杆菌和新型隐球菌，均为本教研室保存菌种。均按常规做过鉴定，还证实了白色念珠菌形成芽管；接种于玉米粉培养基中形成厚膜孢子。
培养基：沙保琼脂、血琼脂、营养琼脂。
, http://www.100md.com 实验动物：昆明小鼠(本院实验动物中心供给)BALB/c小鼠(江西省实验动物中心提供)。
免疫血清：白色念珠菌全菌体抗原静脉免疫家兔，自行制成特异性抗血清(效价1∶8192以上)备作荚膜肿胀试验用。
染色镜检：培养物涂片作墨汁负染色法和Hiss荚膜染色法染色〔1〕，用光学显微镜镜检观察荚膜。昆明小鼠腹腔分别注射白色念珠菌、肺炎双球菌和乙型副伤寒杆菌菌液(相当于9亿/ml细菌数浊度)0.5ml，接种后第3天、第6天、第9天各取注射白色念珠菌的小鼠腹腔液涂片染色镜检。第3天作对照鼠腹腔液涂片染色镜检。BALB/c小鼠腹腔注射50%乙醇提取的黄连、黄芩、川贝母、五蓓子等药液0.2ml，对照鼠注射等量生理盐水，3h后腹腔注射白色念珠菌菌液(浓度同前)0.5ml，作用30min后取小鼠腹腔液推片，经瑞氏染色法，Hiss荚膜染色法染色，在高倍镜与油镜下观察小鼠吞噬细胞的吞噬功能及白色念珠菌的荚膜。
, 百拇医药
荚膜肿胀试验：白色念珠菌的沙保琼脂培养物用1∶8稀释的特异性免疫血清处理后，美蓝染色，盖片镜检。用新型隐球菌为对照。
电镜检查：白色念珠菌的沙保琼脂培养物，经常规制备超薄切片，用透射电镜观察。
结果与讨论
1.染色镜检：白色念珠菌在沙保琼脂和血琼脂的培养物涂片染色镜检均见菌体周围有厚度约0.6～1.0μm不着色、边界明显的透亮圈(图1)；新型隐球菌的沙保琼脂培养物菌体周围有厚度与白色念珠菌相似的透亮圈。接种白色念珠菌的小鼠于第6天和第9天腹腔液涂片染色镜检见菌体周围有厚度约0.8～1.0μm不着色，边界清楚的透亮圈；对照菌肺炎双球菌周围有清楚的透亮圈，乙型副伤寒杆菌则无。吞噬试验的实验组和对照组的小鼠腹腔液涂片见吞噬细胞内外的白色念珠菌周围均有不着色的透亮圈(图2)。
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图1 白色念珠菌沙保琼脂培养物Hiss荚膜染色法染色(×1000)
图2 吞噬试验小鼠腹腔液涂片吞噬细胞内外白色念珠菌的荚膜结构(瑞氏染色×400)
a. 吞噬细胞内白色念珠菌； b. 吞噬细胞外白色念珠菌
2.荚膜肿胀试验：白色念珠菌的沙保琼脂培养物在生理盐水中均匀混悬，加特异性免疫血清后立即出现凝聚现象。美蓝染色，盖片在油镜下观察，见菌聚集成堆，菌体周围显示一清晰的透亮圈，随后菌体周围透亮圈厚度增大1～3倍，作用至1h还能看清增宽的透亮圈(图3)。白色念珠菌加正常兔血清，新型隐球菌加白色念珠菌免疫血清处理均不发生凝集，菌体周围显示的透亮圈不增宽。
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3.电镜观察：超薄切片在透射电镜下观察，放大4000倍以上可看到细胞质内的结构如细胞核、线粒体等，细胞质膜、细胞壁及包绕细胞壁的一层较疏松结构，不能排除为荚膜物质，在同一视野中类似物质在不同细胞中厚度有差异(图4)，放大20000倍细胞壁的多层结构显示更清楚(图5)。
图3 白色念珠菌荚膜肿胀试验(美蓝染色×1000)
60min显示的荚膜反应
图4 电镜超薄切片技术显示白色念珠菌的荚膜结构(×4000)
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a. 具有荚膜细胞； b. 失去荚膜的细胞
图5 电镜超薄切片技术显示白色念珠菌的荚膜结构(×20000)
荚膜是某些细菌细胞壁外的一层粘液性特殊结构，厚度≥0.2μm边界明显者称荚膜，厚度<0.2μm者称微荚膜。普通染色只能见到菌体周围有未着色的透亮圈，用墨汁作负染色荚膜显示更为清楚〔2〕。引起人类深部感染的酵母型真菌新型隐球菌也具有荚膜，用墨汁负染色镜检显示清楚〔3〕。我们用墨汁负染色法、Hiss荚膜染色法和瑞氏染色法对白色念珠菌培养物和接种白色念珠菌的小鼠腹腔液涂片染色镜检均见白色念珠菌菌体周围有厚度>0.2μm，边界明显的透亮圈，为了排除培养基成分、动物血液或血清包裹于菌体等非荚膜因素可能造成的假象，又用白色念珠菌的沙保琼脂培养物作超薄切片电镜下观察及特异性荚膜肿胀试验以图确证，实验结果证实该白色念珠菌具有类似荚膜结构。因此，我们认为白色念珠菌在适宜形成荚膜的条件下可能具有荚膜。
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作者单位：李绣辉(赣南医学院微生物学教研室)
马廉兰(赣南医学院微生物学教研室)
曾祥风(赣南医学院微生物学教研室)
参考文献
1 孙荫. 细菌形态检查. 见：冯仁丰主编. 实用医学检验学. 上海：上海科学技术出版社, 1996, 592-593.
2 管远志. 细菌的结构. 见：陆德源主编. 医学微生物学. 第4版. 北京：人民卫生出版社, 1996, 18.
3 林特夫. 主要病原性真菌. 见：陆德源主编. 医学微生物学. 第4版. 北京：人民卫生出版社, 1996, 210., 百拇医药
李绣辉 马廉兰 曾祥风
关键词：白色念珠菌(Candida albicans) 荚膜 白色念珠菌(Candida albicans)又称白假丝酵母，是常见的条件致病性真菌。传统认为白色念珠菌无荚膜，我们在试验中曾发现似有荚膜结构，为此，进一步进行白色念珠菌是否具有荚膜的试验。
材料与方法
菌株：白色念珠菌、肺炎双球菌、乙型副伤寒杆菌和新型隐球菌，均为本教研室保存菌种。均按常规做过鉴定，还证实了白色念珠菌形成芽管；接种于玉米粉培养基中形成厚膜孢子。
培养基：沙保琼脂、血琼脂、营养琼脂。
, http://www.100md.com 实验动物：昆明小鼠(本院实验动物中心供给)BALB/c小鼠(江西省实验动物中心提供)。
免疫血清：白色念珠菌全菌体抗原静脉免疫家兔，自行制成特异性抗血清(效价1∶8192以上)备作荚膜肿胀试验用。
染色镜检：培养物涂片作墨汁负染色法和Hiss荚膜染色法染色〔1〕，用光学显微镜镜检观察荚膜。昆明小鼠腹腔分别注射白色念珠菌、肺炎双球菌和乙型副伤寒杆菌菌液(相当于9亿/ml细菌数浊度)0.5ml，接种后第3天、第6天、第9天各取注射白色念珠菌的小鼠腹腔液涂片染色镜检。第3天作对照鼠腹腔液涂片染色镜检。BALB/c小鼠腹腔注射50%乙醇提取的黄连、黄芩、川贝母、五蓓子等药液0.2ml，对照鼠注射等量生理盐水，3h后腹腔注射白色念珠菌菌液(浓度同前)0.5ml，作用30min后取小鼠腹腔液推片，经瑞氏染色法，Hiss荚膜染色法染色，在高倍镜与油镜下观察小鼠吞噬细胞的吞噬功能及白色念珠菌的荚膜。
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荚膜肿胀试验：白色念珠菌的沙保琼脂培养物用1∶8稀释的特异性免疫血清处理后，美蓝染色，盖片镜检。用新型隐球菌为对照。
电镜检查：白色念珠菌的沙保琼脂培养物，经常规制备超薄切片，用透射电镜观察。
结果与讨论
1.染色镜检：白色念珠菌在沙保琼脂和血琼脂的培养物涂片染色镜检均见菌体周围有厚度约0.6～1.0μm不着色、边界明显的透亮圈(图1)；新型隐球菌的沙保琼脂培养物菌体周围有厚度与白色念珠菌相似的透亮圈。接种白色念珠菌的小鼠于第6天和第9天腹腔液涂片染色镜检见菌体周围有厚度约0.8～1.0μm不着色，边界清楚的透亮圈；对照菌肺炎双球菌周围有清楚的透亮圈，乙型副伤寒杆菌则无。吞噬试验的实验组和对照组的小鼠腹腔液涂片见吞噬细胞内外的白色念珠菌周围均有不着色的透亮圈(图2)。
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图1 白色念珠菌沙保琼脂培养物Hiss荚膜染色法染色(×1000)
图2 吞噬试验小鼠腹腔液涂片吞噬细胞内外白色念珠菌的荚膜结构(瑞氏染色×400)
a. 吞噬细胞内白色念珠菌； b. 吞噬细胞外白色念珠菌
2.荚膜肿胀试验：白色念珠菌的沙保琼脂培养物在生理盐水中均匀混悬，加特异性免疫血清后立即出现凝聚现象。美蓝染色，盖片在油镜下观察，见菌聚集成堆，菌体周围显示一清晰的透亮圈，随后菌体周围透亮圈厚度增大1～3倍，作用至1h还能看清增宽的透亮圈(图3)。白色念珠菌加正常兔血清，新型隐球菌加白色念珠菌免疫血清处理均不发生凝集，菌体周围显示的透亮圈不增宽。
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3.电镜观察：超薄切片在透射电镜下观察，放大4000倍以上可看到细胞质内的结构如细胞核、线粒体等，细胞质膜、细胞壁及包绕细胞壁的一层较疏松结构，不能排除为荚膜物质，在同一视野中类似物质在不同细胞中厚度有差异(图4)，放大20000倍细胞壁的多层结构显示更清楚(图5)。
图3 白色念珠菌荚膜肿胀试验(美蓝染色×1000)
60min显示的荚膜反应
图4 电镜超薄切片技术显示白色念珠菌的荚膜结构(×4000)
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a. 具有荚膜细胞； b. 失去荚膜的细胞
图5 电镜超薄切片技术显示白色念珠菌的荚膜结构(×20000)
荚膜是某些细菌细胞壁外的一层粘液性特殊结构，厚度≥0.2μm边界明显者称荚膜，厚度<0.2μm者称微荚膜。普通染色只能见到菌体周围有未着色的透亮圈，用墨汁作负染色荚膜显示更为清楚〔2〕。引起人类深部感染的酵母型真菌新型隐球菌也具有荚膜，用墨汁负染色镜检显示清楚〔3〕。我们用墨汁负染色法、Hiss荚膜染色法和瑞氏染色法对白色念珠菌培养物和接种白色念珠菌的小鼠腹腔液涂片染色镜检均见白色念珠菌菌体周围有厚度>0.2μm，边界明显的透亮圈，为了排除培养基成分、动物血液或血清包裹于菌体等非荚膜因素可能造成的假象，又用白色念珠菌的沙保琼脂培养物作超薄切片电镜下观察及特异性荚膜肿胀试验以图确证，实验结果证实该白色念珠菌具有类似荚膜结构。因此，我们认为白色念珠菌在适宜形成荚膜的条件下可能具有荚膜。
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作者单位：李绣辉(赣南医学院微生物学教研室)
马廉兰(赣南医学院微生物学教研室)
曾祥风(赣南医学院微生物学教研室)
参考文献
1 孙荫. 细菌形态检查. 见：冯仁丰主编. 实用医学检验学. 上海：上海科学技术出版社, 1996, 592-593.
2 管远志. 细菌的结构. 见：陆德源主编. 医学微生物学. 第4版. 北京：人民卫生出版社, 1996, 18.
3 林特夫. 主要病原性真菌. 见：陆德源主编. 医学微生物学. 第4版. 北京：人民卫生出版社, 1996, 210., 百拇医药