银屑病患者血管内皮细胞粘附分子的免疫组化研究
银屑病患者血管内皮细胞粘附分子的免疫组化研究
毕桂姣 赵玉铭 白兆震 陈洪铎 李灵匀
摘要 目的：探讨血管内皮细胞在银屑病发病中的作用。方法：采用ABC免疫组化方法研究寻常型银屑病皮损处血管内皮细胞ICAM-1、CD34、HLA-DR、FⅧRAg和CD36的表达情况。结果：进行期寻常型银屑病患者皮损处真皮浅层血管内皮细胞ICAM-1、CD34和HLA-DR的表达明显强于静止期，而静止期则强于正常人皮肤。FⅧRAg和CD36在进行期和静止期的表达变化不明显。结论：银屑病患者皮损真皮浅层血管内皮细胞ICAM-1、CD34和HLA-DR的表达增强,且随局部病变的严重程度而变化,CD34可能也参与局部炎症细胞的粘附与浸润。
, 百拇医药 关键词：银屑病 内皮，血管 胞间粘附分子1 抗原，CD34 HLA-DR抗原
银屑病皮损的早期即有真皮微血管的变化[1]。我们采用ABC免疫过氧化酶技术检测了寻常型银屑病患者皮损处血管内皮细胞表达细胞间粘附分子1(ICAM-1)、CD34、HLA-DR、第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)和CD36的情况，现报道如下。
材料与方法
1.临床资料：寻常型银屑病患者共30例，其中男18例，女12例，年龄16～57岁，平均29.4岁；进行期25例，静止期5例，病程10d至20年不等。取材前1个月未系统或外用过皮质类固醇。取10例正常人皮肤(包括外伤手术病人的正常皮肤和皮脂腺囊肿远隔部位的皮肤)作对照。于局麻下取病损组织，分成2块；一块送常规病理诊断，另一块用OCT(美国Miles公司)包埋，液氮速冻，贮于-70℃冰箱待检。30例患者均符合寻常型银屑病的组织病理诊断。
, 百拇医药
2.试剂：ICAM-1单克隆抗体为培养上清液(美国Emory大学皮肤科)；CD34和FⅧRAg单克隆抗体(Maxim公司)为即用型;HLA-DR(Becton-Dickinson)和CD36(Ortho公司)的工作浓度均为1∶100。ABC试剂盒购自美国Vector公司。
3.染色方法：ABC免疫过氧化酶法按Vector公司提供的染色方法进行。省略第一抗体或代之以不相关抗体为对照。
4.结果判定：血管内皮细胞见桔红色物质为阳性。染色强度分5个等级：(-)无染色，即阴性；(±)轻微染色，为弱阳性；(+)染色较浅，为阳性；(++)染色较深，为中度阳性；(+++)染色深，为强阳性。采用单盲、重复观察等方法。
真皮浅层血管的判断方法：毛细血管管壁由一层内皮细胞组成，管径一般为6～8μm。真皮浅层小动脉横切面呈圆形，管壁较厚，管径30～100μm。真皮浅层小静脉横切面呈圆形或椭圆形，管壁较小动脉薄，管径达200μm。
, 百拇医药
结果
1.正常人皮肤：血管内皮细胞ICAM-1、CD34、HLA-DR、FⅧRAg和CD36均阳性，但较弱(见表1)。
2.银屑病皮损：进行期、ICAM-1和HLA-DR在真皮乳头部的血管表达较弱或几乎不表达，在乳头下浅层血管内皮细胞呈强阳性表达(+++)，且小静脉染色(+++)较小动脉(++)为深。CD34在真皮浅层血管内皮细胞的染色较深，其中乳头内血管染色最深(+++)(图1)。在真皮深层的血管内皮细胞上述3种抗原表达均为弱阳性。FⅧRAg在乳头层内毛细血管内皮及相邻的间质呈弥漫阳性反应，染色弱于乳头下浅层血管。CD36在真皮浅层血管内皮细胞表达为弱阳性，在真皮深层的一些血管则呈中度阳性表达(++)，见表1。静止期ICAM-1、HLA-DR和CD34在真皮浅层血管内皮细胞的表达均较进行期减弱(图2)，但仍强于正常人皮肤。FⅧRAg和CD36的表达类似进行期。
讨论
, 百拇医药
我们在实验中观察到进行期寻常型银屑病皮损在真皮浅层血管内皮细胞ICAM-1、CD34和HLA-DR表达增强，其中CD34在乳头部表达最强，ICAM-1在小静脉染色较小动脉为深。静止期ICAM-1、CD34和HLA-DR表达减弱。血管内皮细胞在生理条件下表达少量的ICAM-1。Das等[2]观察到，不仅银屑病皮损部而且非皮损处内皮细胞ICAM-1的表达也比正常人皮肤增强，提示非皮损处内皮细胞已经处于活化状态。我们观察到ICAM-1在浅层小静脉染色较小动脉为深，提示ICAM-1介导的炎细胞粘附、浸润以浅层小血管，特别是小静脉为主，乳头部血管亦起一定的作用。真皮内激活的T细胞和其它细胞可产生大量的IFN-γ和TNF-α，可上调ICAM-1在血管内皮细胞表达[3]。
CD34为人类早期造血干细胞抗原，亦表达于所有的血管内皮细胞上。小鼠淋巴结内静脉内皮细胞的CD34可与淋巴细胞归巢受体——L-选择素结合，在淋巴细胞沿血管壁滚动，与内皮细胞粘附并渗出至炎症部位的过程中起一定作用[4]。我们观察发现，在进行期寻常型银屑病皮损内，真皮浅层血管内皮细胞强表达CD34，其中乳头部血管内皮细胞染色最强。浅层染色增强的血管周围可见较多的浸润细胞。在静止期，真皮浅层的血管内皮细胞表达CD34减弱，且血管周围浸润细胞亦减少。我们推测银屑病皮损处，由于乳头部血管内皮细胞表达ICAM-1较弱，而表达CD34较强，故CD34可能在浸润细胞经乳头部血管浸入表皮的过程中起较大的作用。我们观察到进行期寻常型银屑病皮损真皮浅层的血管内皮细胞HLA-DR表达明显增强，在真皮乳头下血管表达更明显，静止期血管内皮细胞的表达减弱。本实验还观察到，进行期真皮浅层血管内皮细胞表达HLA-DR较静止期强，血管周围的浸润细胞亦较静止期多，说明血管内皮细胞表达HLA-DR的强弱与免疫发病机理、局部病变的严重程度有关。
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表1 正常人皮肤和银屑病皮损血管内皮细胞的染色情况
ICAM-1
CD34
HLA-DR
Cap
A
V
Cap
A
V
Cap
A
V
, 百拇医药
正常人皮肤
-
+
+
-
+
+
-
+
+
银屑病皮损静止期
±
+～++
+～++
, 百拇医药
++
+～++
+～++
±
+～++
+～++
银屑病皮损进行期
+
++
+++
+++
, 百拇医药
+
注：Cap:乳头内毛细血管，A：真皮浅层小动脉，V：真皮浅层小静脉
志谢沈阳市第七人民医院王玉华、宋勇和黄精华医师帮助收集病例
作者单位:毕桂姣(110001 沈阳,中国医科大学附属第一临床学院)
赵玉铭(110001 沈阳,中国医科大学附属第一临床学院)
白兆震(110001 沈阳,中国医科大学附属第一临床学院)
陈洪铎(110001 沈阳,中国医科大学附属第一临床学院)
, http://www.100md.com
李灵匀(沈阳市第七人民医院皮肤科)
参考文献
1，Lowe PM, Lee ML, Jackson CJ, et al. The endothelium in psoriasis. Br J Dermatol,1995,132: 497- 505.
2，Das PK, de- Boer OJ, Visser A, et al. Differential expression of ICAM- 1， E- selection and VCAM- 1 by endothelial cells in psoriasis and contact dermatitis. Acta Derm Venereol (Stockh), 1994, 186 :21- 22.
3，Baker BS, Fry L. The immunology of psoriasis. Br J Dermatol, 1992,126:1- 9.
4，Baumhueter S, Singer MS, Henzel W, et al. Binding of L- selectin to the vascular sialomucin CD34. Science,1993,262:436- 438., http://www.100md.com
毕桂姣 赵玉铭 白兆震 陈洪铎 李灵匀
摘要 目的：探讨血管内皮细胞在银屑病发病中的作用。方法：采用ABC免疫组化方法研究寻常型银屑病皮损处血管内皮细胞ICAM-1、CD34、HLA-DR、FⅧRAg和CD36的表达情况。结果：进行期寻常型银屑病患者皮损处真皮浅层血管内皮细胞ICAM-1、CD34和HLA-DR的表达明显强于静止期，而静止期则强于正常人皮肤。FⅧRAg和CD36在进行期和静止期的表达变化不明显。结论：银屑病患者皮损真皮浅层血管内皮细胞ICAM-1、CD34和HLA-DR的表达增强,且随局部病变的严重程度而变化,CD34可能也参与局部炎症细胞的粘附与浸润。
, 百拇医药 关键词：银屑病 内皮，血管 胞间粘附分子1 抗原，CD34 HLA-DR抗原
银屑病皮损的早期即有真皮微血管的变化[1]。我们采用ABC免疫过氧化酶技术检测了寻常型银屑病患者皮损处血管内皮细胞表达细胞间粘附分子1(ICAM-1)、CD34、HLA-DR、第Ⅷ因子相关抗原(FⅧRAg)和CD36的情况，现报道如下。
材料与方法
1.临床资料：寻常型银屑病患者共30例，其中男18例，女12例，年龄16～57岁，平均29.4岁；进行期25例，静止期5例，病程10d至20年不等。取材前1个月未系统或外用过皮质类固醇。取10例正常人皮肤(包括外伤手术病人的正常皮肤和皮脂腺囊肿远隔部位的皮肤)作对照。于局麻下取病损组织，分成2块；一块送常规病理诊断，另一块用OCT(美国Miles公司)包埋，液氮速冻，贮于-70℃冰箱待检。30例患者均符合寻常型银屑病的组织病理诊断。
, 百拇医药
2.试剂：ICAM-1单克隆抗体为培养上清液(美国Emory大学皮肤科)；CD34和FⅧRAg单克隆抗体(Maxim公司)为即用型;HLA-DR(Becton-Dickinson)和CD36(Ortho公司)的工作浓度均为1∶100。ABC试剂盒购自美国Vector公司。
3.染色方法：ABC免疫过氧化酶法按Vector公司提供的染色方法进行。省略第一抗体或代之以不相关抗体为对照。
4.结果判定：血管内皮细胞见桔红色物质为阳性。染色强度分5个等级：(-)无染色，即阴性；(±)轻微染色，为弱阳性；(+)染色较浅，为阳性；(++)染色较深，为中度阳性；(+++)染色深，为强阳性。采用单盲、重复观察等方法。
真皮浅层血管的判断方法：毛细血管管壁由一层内皮细胞组成，管径一般为6～8μm。真皮浅层小动脉横切面呈圆形，管壁较厚，管径30～100μm。真皮浅层小静脉横切面呈圆形或椭圆形，管壁较小动脉薄，管径达200μm。
, 百拇医药
结果
1.正常人皮肤：血管内皮细胞ICAM-1、CD34、HLA-DR、FⅧRAg和CD36均阳性，但较弱(见表1)。
2.银屑病皮损：进行期、ICAM-1和HLA-DR在真皮乳头部的血管表达较弱或几乎不表达，在乳头下浅层血管内皮细胞呈强阳性表达(+++)，且小静脉染色(+++)较小动脉(++)为深。CD34在真皮浅层血管内皮细胞的染色较深，其中乳头内血管染色最深(+++)(图1)。在真皮深层的血管内皮细胞上述3种抗原表达均为弱阳性。FⅧRAg在乳头层内毛细血管内皮及相邻的间质呈弥漫阳性反应，染色弱于乳头下浅层血管。CD36在真皮浅层血管内皮细胞表达为弱阳性，在真皮深层的一些血管则呈中度阳性表达(++)，见表1。静止期ICAM-1、HLA-DR和CD34在真皮浅层血管内皮细胞的表达均较进行期减弱(图2)，但仍强于正常人皮肤。FⅧRAg和CD36的表达类似进行期。
讨论
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我们在实验中观察到进行期寻常型银屑病皮损在真皮浅层血管内皮细胞ICAM-1、CD34和HLA-DR表达增强，其中CD34在乳头部表达最强，ICAM-1在小静脉染色较小动脉为深。静止期ICAM-1、CD34和HLA-DR表达减弱。血管内皮细胞在生理条件下表达少量的ICAM-1。Das等[2]观察到，不仅银屑病皮损部而且非皮损处内皮细胞ICAM-1的表达也比正常人皮肤增强，提示非皮损处内皮细胞已经处于活化状态。我们观察到ICAM-1在浅层小静脉染色较小动脉为深，提示ICAM-1介导的炎细胞粘附、浸润以浅层小血管，特别是小静脉为主，乳头部血管亦起一定的作用。真皮内激活的T细胞和其它细胞可产生大量的IFN-γ和TNF-α，可上调ICAM-1在血管内皮细胞表达[3]。
CD34为人类早期造血干细胞抗原，亦表达于所有的血管内皮细胞上。小鼠淋巴结内静脉内皮细胞的CD34可与淋巴细胞归巢受体——L-选择素结合，在淋巴细胞沿血管壁滚动，与内皮细胞粘附并渗出至炎症部位的过程中起一定作用[4]。我们观察发现，在进行期寻常型银屑病皮损内，真皮浅层血管内皮细胞强表达CD34，其中乳头部血管内皮细胞染色最强。浅层染色增强的血管周围可见较多的浸润细胞。在静止期，真皮浅层的血管内皮细胞表达CD34减弱，且血管周围浸润细胞亦减少。我们推测银屑病皮损处，由于乳头部血管内皮细胞表达ICAM-1较弱，而表达CD34较强，故CD34可能在浸润细胞经乳头部血管浸入表皮的过程中起较大的作用。我们观察到进行期寻常型银屑病皮损真皮浅层的血管内皮细胞HLA-DR表达明显增强，在真皮乳头下血管表达更明显，静止期血管内皮细胞的表达减弱。本实验还观察到，进行期真皮浅层血管内皮细胞表达HLA-DR较静止期强，血管周围的浸润细胞亦较静止期多，说明血管内皮细胞表达HLA-DR的强弱与免疫发病机理、局部病变的严重程度有关。
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表1 正常人皮肤和银屑病皮损血管内皮细胞的染色情况
ICAM-1
CD34
HLA-DR
Cap
A
V
Cap
A
V
Cap
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正常人皮肤
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银屑病皮损静止期
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银屑病皮损进行期
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注：Cap:乳头内毛细血管，A：真皮浅层小动脉，V：真皮浅层小静脉
志谢沈阳市第七人民医院王玉华、宋勇和黄精华医师帮助收集病例
作者单位:毕桂姣(110001 沈阳,中国医科大学附属第一临床学院)
赵玉铭(110001 沈阳,中国医科大学附属第一临床学院)
白兆震(110001 沈阳,中国医科大学附属第一临床学院)
陈洪铎(110001 沈阳,中国医科大学附属第一临床学院)
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李灵匀(沈阳市第七人民医院皮肤科)
参考文献
1，Lowe PM, Lee ML, Jackson CJ, et al. The endothelium in psoriasis. Br J Dermatol,1995,132: 497- 505.
2，Das PK, de- Boer OJ, Visser A, et al. Differential expression of ICAM- 1， E- selection and VCAM- 1 by endothelial cells in psoriasis and contact dermatitis. Acta Derm Venereol (Stockh), 1994, 186 :21- 22.
3，Baker BS, Fry L. The immunology of psoriasis. Br J Dermatol, 1992,126:1- 9.
4，Baumhueter S, Singer MS, Henzel W, et al. Binding of L- selectin to the vascular sialomucin CD34. Science,1993,262:436- 438., http://www.100md.com