免疫印迹法检测幽门螺杆菌及VacA和CagA抗体在上消化道疾病中意义的研究
作者：马建伟 张淼发 李永明 颜文波 卢婉华 叶欣
单位：上海市东方医院 200120
关键词：幽门螺杆菌；慢性胃炎；十二指肠溃疡；免疫印迹法
中国现代医学杂志001034 目的：探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)与上消化道疾病的关系。方法：采用免疫印迹法，对慢性胃炎174例(其中浅表性胃炎62例，弥漫性胃窦胃炎57例，多灶性萎缩性胃炎55例)和十二指肠溃疡54例患者血清Hp进行检测分析，对Hp阳性的132例慢性胃炎和50例十二指肠溃疡患者进行VacA、CagA抗体检测。结果：慢性胃炎174例中检测出Hp阳性132例，阳性率为75.86%(其中浅表性胃炎Hp阳性率为75.81%，弥漫性胃窦胃炎为78.95%，多灶性萎缩性胃炎72.73%)；十二指肠溃疡患者Hp阳性率为92.59%。在182例Hp阳性者中VacA、CagA抗体检测出阳性率为53.85%，而慢性胃炎与十二指肠溃疡有显著的差异。结论：提示Hp感染与上消化道疾病的发生有重要的生物学意义。
, http://www.100md.com
分类号 R573.3
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与上消化道疾病有着一定的关系，且Hp感染引起不同疾病的严重程度，可能与HP菌株毒力有关[1]。表达细胞空泡毒素(VacA)和毒素相关蛋白(CagA)的菌株是高毒力株[2]。本文采用免疫印迹法检测上消化道疾病患者血清中Hp及Hp阳性者血清中VacA和CagA抗体，旨在探讨Hp及不同毒力Hp菌株与上消化道疾病的关系。
1 对象和方法
1.1 对象
1998年5月～2000年3月在本院因消化道症状行内窥镜检查者，同时做Hp病理切片组织染色。选取慢性胃炎174例(其中浅表性胃炎62例，弥漫性胃窦胃炎57例，多灶性萎缩性胃炎55例)，十二指肠溃疡54例。男116例，女112例。年龄9～76岁，平均年龄46.5岁。所选病例均经病理组织学确诊。
, 百拇医药
1.2 方法
取患者早晨空腹静脉血2ml，离心后取血清，-20℃保存。选用由新加坡Genelabs Diagnostics公司提供的试剂盒，Helico Blot 2.0免疫印迹法，按其操作说明书进行。
1.3 毒力菌株判断标准
参照试剂盒提供的标准血清为诊断标准，即除质控带外不出现任何条带或只出现与阳性对照不同位置的条带时为阴性；单纯Hp抗体阳性者，指有35KD或30KD，26.5KD，19.5KD中任何2条者；Hp高毒力菌株抗体阳性者，指有116KD(CagA)和89KD(VacA)或其中任何1条者。
2 结果
2.1 Hp的感染率
228例中检测Hp感染者182例，Hp阳性率79.82%，。慢性胃炎组Hp阳性率为75.86%(132/174)，其中浅表性胃炎75.81%(47/62)，弥漫性胃窦胃炎78.95%(45/57)，多灶性萎缩性胃炎72.73%(40/55)。十二指肠溃疡组Hp阳性率为92.59%(50/54)。十二指肠溃疡病组显著高于慢性胃炎组(χ2＝7.16，P<0.01)，见表1。
, 百拇医药
表1 胃肠道疾病Hp的检出率 组别
例数
Hp阳性例数
%
慢性胃炎
174
132
75.86
浅表性胃炎
62
47
75.81
弥漫性胃窦胃炎
, 百拇医药
57
45
78.95
多灶性萎缩性胃炎
55
40
72.73
十指肠溃疡
54
50
92.59
2.2 Hp感染者血清中VacA、CagA检测结果
Hp阳性者中VacA、CagA均阳性者为53.85%，均阴性者为17.58%，其中一个阳性者为28.57%。在VacA、CagA均阳性者中慢性胃炎组中各组间有差异(P<0.05)。十二指肠溃疡病组与慢性胃炎组有显著差异(χ2＝16.18，P<0.005)，见表2。表2 Hp阳性者血清中VacA、CagA检测结果 组别
, 百拇医药
Hp阳性
例数
VacA(+)
CagA(+)
VacA(+)
CagA(-)
VacA(-)
CagA(+)
VacA(-)
CagA(-)
慢性胃炎
132
, 百拇医药 59
20
24
29
浅表性胃炎
47
11
6
10
20
弥漫性胃窦胃炎
45
20
9
, http://www.100md.com
11
5
多灶性萎缩性胃炎
40
28
5
3
4
十二指肠溃疡
50
39
1
7
3
, http://www.100md.com
3 讨论
自从1983年Marshall和Warren成功地从人胃粘膜活检标本中分离培养出幽门螺杆菌以来[3]，已有一些研究表明Hp与消化道疾病有关[1]。在本研究中，慢性胃炎和十二指肠溃疡患者Hp感染的检出率分别为75.86%和92.59%，与文献报道基本一致[4]，提示Hp是慢性胃炎和十二指肠溃疡病的重要致病因子。
Hp感染后多数患者无临床症状，仅少数发生胃炎、消化性溃疡甚至胃癌，可能与感染的Hp菌株有关[5]。本研究的结果是VacA、CagA均阳性者为53.85%，均阴性者为17.58%，其中一个阳性者为28.57%，与文献报道相似。
本研究结果显示，Ⅰ型菌株在十二指肠溃疡病患者中的感染率显著高于慢性胃炎组患者(P<0.005)，Ⅰ型菌株似乎更有引起溃疡的致病力[6]。同时随着高毒力菌株感染率的增加，消化道疾病的严重程度也加重，本文中多灶性萎缩性胃炎和弥漫性胃窦胃炎及溃疡的高毒力菌株检出率显著高于浅表性胃炎，而浅表性胃炎的低毒力菌株检出率显著高于其他疾病组，提示具有CagA蛋白和VacA蛋白的Hp菌株的致病力可能更强，产生更严重的组织炎症，并刺激胃上皮产生更高的细胞活素，最主要是白细胞介素-8，并导致胃粘膜中性白细胞迁移和激活的增强[7]，造成胃粘膜上皮细胞严重的损伤和溃疡的形成。
, 百拇医药
免疫印迹法是一种特异、敏感而可靠的蛋白质检测方法，它能定位、定性分析蛋白质的各组分。本文采用的Helico Blot 2.0试剂盒是选用国际公认的Hp菌株作为抗原(包括了高毒力毒株表达的特定蛋白质组分)，具有高特异、高灵敏和快速检测的特点。由于它是一种非侵入的检测方法，易于为病人所接受。更重要的是它可以对Hp的菌株毒力进行分型，这对疾病程度的估计、预后发展及临床治疗均有重要的指导意义，不失为一种较理想的检测Hp感染的方法，值得推广应用。
参考文献
1，李海林，李若伦.幽门螺杆菌感染的若干研究进展.国外医学流行病学传染病学分册，1999；26(4)：169
2，Leunk RD,Johnson PT,David BC,et al.Cytotoxic activity in both-cultrure filtrates of camp ylobacter pylori.J Med Microbilol,1998;26(1):93
, http://www.100md.com
3，Warren JR,Marshall B.Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis.Lancet,1983;4:1273
4，Zaitoun AM.Histological study of chronic gastritis form the United Arab Emirates using the sydney system of classification.J Cliin Pathol,1994;47(9):810
5，Mcguigan JE.Helicobacter pylori.the versatile pathogen.Dig Dis,1996;14:289
6，Tummuru MK,Cover TL,Blaser MJ.Cloning and expression of a high-molecular mass major antigen o helicobacter pylori:evidence of linkage to cytotoxin production.Infect Immun,1993;61:1799
7，Crabtree JE,Farmery SM,Lindley ISD,et al.CagA/cytotoxic strains of Helicobacter pylori and interleukin 8 in gastric epithelia cell lines.J Clin Pathol,1994;47:945
(2000-05-06收稿), 百拇医药
单位：上海市东方医院 200120
关键词：幽门螺杆菌；慢性胃炎；十二指肠溃疡；免疫印迹法
中国现代医学杂志001034 目的：探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)与上消化道疾病的关系。方法：采用免疫印迹法，对慢性胃炎174例(其中浅表性胃炎62例，弥漫性胃窦胃炎57例，多灶性萎缩性胃炎55例)和十二指肠溃疡54例患者血清Hp进行检测分析，对Hp阳性的132例慢性胃炎和50例十二指肠溃疡患者进行VacA、CagA抗体检测。结果：慢性胃炎174例中检测出Hp阳性132例，阳性率为75.86%(其中浅表性胃炎Hp阳性率为75.81%，弥漫性胃窦胃炎为78.95%，多灶性萎缩性胃炎72.73%)；十二指肠溃疡患者Hp阳性率为92.59%。在182例Hp阳性者中VacA、CagA抗体检测出阳性率为53.85%，而慢性胃炎与十二指肠溃疡有显著的差异。结论：提示Hp感染与上消化道疾病的发生有重要的生物学意义。
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分类号 R573.3
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与上消化道疾病有着一定的关系，且Hp感染引起不同疾病的严重程度，可能与HP菌株毒力有关[1]。表达细胞空泡毒素(VacA)和毒素相关蛋白(CagA)的菌株是高毒力株[2]。本文采用免疫印迹法检测上消化道疾病患者血清中Hp及Hp阳性者血清中VacA和CagA抗体，旨在探讨Hp及不同毒力Hp菌株与上消化道疾病的关系。
1 对象和方法
1.1 对象
1998年5月～2000年3月在本院因消化道症状行内窥镜检查者，同时做Hp病理切片组织染色。选取慢性胃炎174例(其中浅表性胃炎62例，弥漫性胃窦胃炎57例，多灶性萎缩性胃炎55例)，十二指肠溃疡54例。男116例，女112例。年龄9～76岁，平均年龄46.5岁。所选病例均经病理组织学确诊。
, 百拇医药
1.2 方法
取患者早晨空腹静脉血2ml，离心后取血清，-20℃保存。选用由新加坡Genelabs Diagnostics公司提供的试剂盒，Helico Blot 2.0免疫印迹法，按其操作说明书进行。
1.3 毒力菌株判断标准
参照试剂盒提供的标准血清为诊断标准，即除质控带外不出现任何条带或只出现与阳性对照不同位置的条带时为阴性；单纯Hp抗体阳性者，指有35KD或30KD，26.5KD，19.5KD中任何2条者；Hp高毒力菌株抗体阳性者，指有116KD(CagA)和89KD(VacA)或其中任何1条者。
2 结果
2.1 Hp的感染率
228例中检测Hp感染者182例，Hp阳性率79.82%，。慢性胃炎组Hp阳性率为75.86%(132/174)，其中浅表性胃炎75.81%(47/62)，弥漫性胃窦胃炎78.95%(45/57)，多灶性萎缩性胃炎72.73%(40/55)。十二指肠溃疡组Hp阳性率为92.59%(50/54)。十二指肠溃疡病组显著高于慢性胃炎组(χ2＝7.16，P<0.01)，见表1。
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表1 胃肠道疾病Hp的检出率 组别
例数
Hp阳性例数
%
慢性胃炎
174
132
75.86
浅表性胃炎
62
47
75.81
弥漫性胃窦胃炎
, 百拇医药
57
45
78.95
多灶性萎缩性胃炎
55
40
72.73
十指肠溃疡
54
50
92.59
2.2 Hp感染者血清中VacA、CagA检测结果
Hp阳性者中VacA、CagA均阳性者为53.85%，均阴性者为17.58%，其中一个阳性者为28.57%。在VacA、CagA均阳性者中慢性胃炎组中各组间有差异(P<0.05)。十二指肠溃疡病组与慢性胃炎组有显著差异(χ2＝16.18，P<0.005)，见表2。表2 Hp阳性者血清中VacA、CagA检测结果 组别
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Hp阳性
例数
VacA(+)
CagA(+)
VacA(+)
CagA(-)
VacA(-)
CagA(+)
VacA(-)
CagA(-)
慢性胃炎
132
, 百拇医药 59
20
24
29
浅表性胃炎
47
11
6
10
20
弥漫性胃窦胃炎
45
20
9
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11
5
多灶性萎缩性胃炎
40
28
5
3
4
十二指肠溃疡
50
39
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7
3
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3 讨论
自从1983年Marshall和Warren成功地从人胃粘膜活检标本中分离培养出幽门螺杆菌以来[3]，已有一些研究表明Hp与消化道疾病有关[1]。在本研究中，慢性胃炎和十二指肠溃疡患者Hp感染的检出率分别为75.86%和92.59%，与文献报道基本一致[4]，提示Hp是慢性胃炎和十二指肠溃疡病的重要致病因子。
Hp感染后多数患者无临床症状，仅少数发生胃炎、消化性溃疡甚至胃癌，可能与感染的Hp菌株有关[5]。本研究的结果是VacA、CagA均阳性者为53.85%，均阴性者为17.58%，其中一个阳性者为28.57%，与文献报道相似。
本研究结果显示，Ⅰ型菌株在十二指肠溃疡病患者中的感染率显著高于慢性胃炎组患者(P<0.005)，Ⅰ型菌株似乎更有引起溃疡的致病力[6]。同时随着高毒力菌株感染率的增加，消化道疾病的严重程度也加重，本文中多灶性萎缩性胃炎和弥漫性胃窦胃炎及溃疡的高毒力菌株检出率显著高于浅表性胃炎，而浅表性胃炎的低毒力菌株检出率显著高于其他疾病组，提示具有CagA蛋白和VacA蛋白的Hp菌株的致病力可能更强，产生更严重的组织炎症，并刺激胃上皮产生更高的细胞活素，最主要是白细胞介素-8，并导致胃粘膜中性白细胞迁移和激活的增强[7]，造成胃粘膜上皮细胞严重的损伤和溃疡的形成。
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免疫印迹法是一种特异、敏感而可靠的蛋白质检测方法，它能定位、定性分析蛋白质的各组分。本文采用的Helico Blot 2.0试剂盒是选用国际公认的Hp菌株作为抗原(包括了高毒力毒株表达的特定蛋白质组分)，具有高特异、高灵敏和快速检测的特点。由于它是一种非侵入的检测方法，易于为病人所接受。更重要的是它可以对Hp的菌株毒力进行分型，这对疾病程度的估计、预后发展及临床治疗均有重要的指导意义，不失为一种较理想的检测Hp感染的方法，值得推广应用。
参考文献
1，李海林，李若伦.幽门螺杆菌感染的若干研究进展.国外医学流行病学传染病学分册，1999；26(4)：169
2，Leunk RD,Johnson PT,David BC,et al.Cytotoxic activity in both-cultrure filtrates of camp ylobacter pylori.J Med Microbilol,1998;26(1):93
, http://www.100md.com
3，Warren JR,Marshall B.Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis.Lancet,1983;4:1273
4，Zaitoun AM.Histological study of chronic gastritis form the United Arab Emirates using the sydney system of classification.J Cliin Pathol,1994;47(9):810
5，Mcguigan JE.Helicobacter pylori.the versatile pathogen.Dig Dis,1996;14:289
6，Tummuru MK,Cover TL,Blaser MJ.Cloning and expression of a high-molecular mass major antigen o helicobacter pylori:evidence of linkage to cytotoxin production.Infect Immun,1993;61:1799
7，Crabtree JE,Farmery SM,Lindley ISD,et al.CagA/cytotoxic strains of Helicobacter pylori and interleukin 8 in gastric epithelia cell lines.J Clin Pathol,1994;47:945
(2000-05-06收稿), 百拇医药