作者：鲁莹 蒋雪涛 曾仁杰
单位：鲁莹(第二军医大学药学院药剂学教研室，上海 200433)；蒋雪涛(第二军医大学药学院药剂学教研室，上海 200433)；曾仁杰(成都军区总医院药剂科)
关键词：双氯芬酸钠微乳；药代动力学；色谱法，高效液相
第二军医大学学报001025 [摘要] 目的：考察双氯芬酸钠微乳在家 兔体内的药代动力学过程。方法：家兔单次口服双氯芬酸钠微乳和双 氯芬酸钠混悬液后, 用HPLC法测定血中双氯芬酸钠浓度。结果：双氯 芬酸钠微乳和混悬液的AUC
0-∞分别为13.456和10.584 μg
.h
.ml
-1， c
max1为2.852和3.145 μg /ml， t
max1为1.438和0.750 h。结论：双氯芬酸钠微乳在家兔体内吸收过程较为平缓，可在较长时间内维 持一定的血药浓度。
[中图分类号] R 971.1 [文献标识码] A
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0980-03
Pharmacokinetics of diclofenac sodium microemulsions in rabbits
LU Ying,JIANG Xue-Tao
(Department of Pharmaceutics, College of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
ZENG Ren-Jie
(Department of Pharmacy, General Hospital, PLA Chengdu Military Area Command)
[ABSTRACT] Objective: To study the pharmacokinetic prog ress of diclofenac sodium microemulsions in rabbits. Methods: Di clofenac sodium microemulsion and diclofenac sodium suspension were single-oral ly given to rabbits. Diclofenac sodium concentrations in plasma were measured by HPLC method. Results: AUC
0-∞, c
max1 and t
max1 were 13.456 μg
.h
.ml
-1，2.852 μg/ml and 1.438 h after po diclofenac sodium microemulsion and 10.584 μg
.h
.ml
-1， 3.145 μg/m l and 0.750 h after po diclofenac sodium suspension. Conclusion: The absorption of diclofenac sodium microemulsions in rabbits is slower and can keep a higher concentration in plasma for a long time compared with those of the suspension.
[KEY WORDS]diclofenac sodium microemulsions; pharmacokinetics; chromatography high performance liquid
双氯芬酸钠(又名双氯灭痛)是苯乙酸类衍生物，属非固醇类抗炎药，通过抑制体内环氧 化酶途径而抑制花生四烯酸的合成，从而起到抗炎、镇痛、退热等作用。该药可治疗风 湿性关节炎、骨关节炎和脊椎炎，国内外对其制剂的生物利用度进行了较多的研究
[1]。已有报道用核素法、紫外分光光度法、高效液相色谱法测定双氯芬酸 钠的血药浓度
[2，3]。本文采用反相高效液相色谱法测定血浆中双氯芬酸钠浓度， 方法简便、快速，结果准确，回收率好。微乳是一种新型的药物载体
[4]，我们在 制备双氯芬酸钠微乳的基础上
[5]，考察了自制的双氯芬酸钠微乳在家兔体内的药 代动力学和生物利用度，并与对照混悬液进行了对比研究，为微乳的临床应用提供了依据。
1 材料和方法
1.1 药品和仪器 双氯芬酸钠原料(山东济宁制药厂，批号980415，含量99.9%) ；双氯芬酸钠微乳(自制，批号990315，质量浓度为3 mg/ml)；双氯芬酸钠肠溶衣片(北 京诺华制药有限公司，批号99034，25 mg/片)，肠溶衣片小心剥去外层包衣后将片芯研碎 混悬于西黄芪胶浆中制成对照混悬液，双氯芬酸钠质量浓度为3 mg/ml；吲哚美辛(分析纯 ，上海第十七制药厂，批号900106)；甲醇、乙腈(色谱纯，上海陆都化学试剂厂)；无水 乙醇(分析纯，成都市联合化工试剂研究所)；三蒸水(自制)；美国光谱物理公司：SP88 00型色谱泵，SP4400/4600型积分仪，SC-200型紫外检测器；美国雅培公司：TDX高速台式 离心机；江苏仪器厂：漩涡混合器。
1.2 色谱条件 Imegular C
18色谱柱(4.6 mm×250 mm，10 μm) 以及C
18保护柱均为中国科学院大连化学物理所国家色谱研究中心产品；流动相为甲醇∶乙腈 ∶pH 6.0磷酸盐缓冲液(25∶25∶50)，使用前垂熔漏斗过滤；内标：吲哚美辛；流速： 1.0 ml/min；检测波长：280 nm；检测灵敏度：0.005 AUFS；进样量：50 μl。
1.3 试剂的配制与样品处理 双氯芬酸钠对照储备液(1 mg/ml)及内标储备液： 分别精密称取经105℃烘干至恒重的双氯芬酸钠或吲哚美辛100 mg于100 ml容量瓶中，用甲 醇稀释至刻度，置冰箱保存。内标工作液(5 μg/ml)：取内标储备液0.5 ml于100 ml容量 瓶中，用甲醇稀释至刻度，冰箱保存备用。血浆样品的处理：取全血1 ml，3 000 r/min离心10 min，分离血浆，取血浆500 μl于塑料 离心管内，加入内标工作液100 μl，乙腈500 μl，混合漩涡振荡1 min，3 000 r/min离心 10 min后，取上清液50 μl进样。
1.4 血药浓度测定方法
1.4.1 线性关系 准确配制质量浓度为0.030，0.050，0.1，0.5，1.0， 2.0，4.0，8.0 μg/ml的血浆标准样品，按样品处理方法操作及色谱分离；经处理得标准曲 线。
1.4.2 方法的回收率和精密度 分别于500 μl空白血样中加入双氯芬酸钠对照品 ，使其浓度为0.1，2.0，6.0 μg/ml，按前述方法测定后，分别与同浓度对照品及内标溶液 直接进样的峰高比进行比较，求得双氯芬酸钠在血浆中的回收率>95.2%。准确配制含双氯芬酸钠0.1，2.0，6.0 μg/ml 3种不同浓度的血浆样品各6份，同日进行测 定，日内相对标准差(RSD)<7.7%(n=6)。连续测定5 d，日间RSD<8.6%(n=5) 。
1.5 动物实验 日本大耳兔8只(第二军医大学实验动物中心提供)，雌雄不拘，体 质量(1.84±0.21) kg，服药前禁食12 h，自由饮水。单剂量交叉口服双氯芬酸钠微乳和 混悬液(双氯芬酸钠3 mg/kg)，两次服药间隔7 d。服药时喂水5 ml，服药后禁食1 h，1 h 后正常饮食，于服药前及服药后0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，5.0，6.0，8. 0，10.0 h采血1 ml。离心分离血浆待测定。各时间点血浆样本按“血浆样品的处理”方法 处理后进行测定，将测得的峰高比(双氯芬酸钠/内标)代入标准曲线方程，求出血浆样本 中双氯芬酸钠浓度。用3P87软件对血药浓度-时间数据进行处理得到药代动力学参数(AUC 以梯形法计算，c
max1 和t
max1按实测值计算)，采用NDST软件对两 种制剂所得结果进行方差分析。
2 结 果
双氯芬酸钠血浆色谱图见图1，双氯芬酸钠保留时间为8.19 min，内标为10.92 min。
图 1 双氯芬酸钠和内标的标准色谱图
Fig 1 Typical chromatogram of diclofenac
and internal standard in plasma
2.1 标准曲线和检测限 双氯芬酸钠在血浆中的最低检测浓度为0.03 μg/ml(信 噪比S/N>3)，线性范围为0.05 ～ 8.0 μg/ml。以峰高比(Y)对浓度(c)作图 得一直线，经线性回归得方程：Y=-0.064 19+1.016 5×10
-3 c (r =0.999 5)。
2.2 药代动力学 家兔单剂量口服双氯芬酸钠(3 mg/kg)混悬液和微乳后血药浓度 -时间曲线见图2。药时数据经3P87药代动力学软件处理，结果表明双氯芬酸钠在家兔体内 药代动力学特征符合一室模型一级吸收，主要药代动力学参数见表1。方差分析结果表明两 种制剂家兔体内AUC有显著性差异，微乳组高于混悬液组。由图2可见，微乳和混悬液口服给药后血药浓度曲线均出现“双峰”现象，混悬液给药后血 药浓度迅速达峰而后急剧下降，2 h后血药浓度已降至1.5 μg/ml以下；与之相比 微乳给药后的血药浓度曲线达峰较为平缓，可以维持较长的时间，5 h后血药浓度才下降至1.5 μg/ ml。
图 2 家兔口服双氯芬酸钠微乳和
混悬液后血药浓度-时间曲线
Fig 2 Plasma concentration-time curve after
a single oral dose of diclofenac sodium
microemulsion and suspension
○: Diclofenac suspension; ●: Diclofenac microemulsion; n=8
表 1 家兔单剂量口服双氯芬酸钠
微乳和混悬液后药代动力学参数
Tab 1 Pharmacokinetic parameters after a
single oral dose of diclofenac sodium
microemulsion and suspension in rabbits(n=8,
±s)
Microemulsion
Suspension
c
max1(ρ
B/μg *ml
-1)
2.852±0.985
3.145±1.840
t
max1(t/h)
1.438±0.563
0.750±0.463
c
max2(ρ
B/μg *ml
-1)
1.965±0.705
1.684±0.685
t
max2(t/h)
3.333±1.080
1.517±0.584
AUC
0-∞(A/μg*h *ml
-1)
13.456±3.527
*
10.584±3.196
MRT(t/h)
4.662±0.852
6.026±3.612
*P<0.05 vs suspension group
3 讨 论
本实验色谱条件能准确测定血浆中双氯芬酸钠的浓度。样品用乙腈直接沉淀蛋白质后进样， 处理简单易行，重现性好，能满足药代动力学研究的需要。
双氯芬酸钠微乳和对照制剂给药后在家兔体内的血药浓度曲线出现“双峰”现象，表明药物 口服后在体内吸收迅速并且有肠肝循环。微乳组AUC显著高于混悬液组，说明对于双氯芬酸 钠类水溶性较好的药物，微乳有一定的提高药物体内生物利用度的作用。家兔口服双氯芬酸 钠微乳后血药浓度曲线较为平缓，提示微乳可能具有特殊的吸收机制：药物被包封于油包水 型微乳的内相，微乳进入体内，外层与胃肠液接触转相形成水包油乳剂结构，经过扩散、释 放而后被吸收；内层不和胃肠液接触的微乳液由于分散相粒径较小(10～100 nm)，有可能 直接以颗粒形式被细胞吞噬、融合从而吸收进入体内。由此可见，W/O型双氯芬酸钠微乳在 家兔体内可能是由扩散穿透油连续相而被吸收。因此微乳制剂体内达峰较慢，并可以在较长 时间内维持一定浓度。
微乳是否能够改善非固醇类抗炎药——双氯芬酸钠的胃肠道刺激作用，还有待进一步研究。
[作者简介]鲁莹(1974-)，女(汉族)，硕士，助教.
[参 考 文 献]
[1] Johns VA. The pharmacokinetics and metabolism of diclofenac s odium in animals and man[J]. Rheumatol Rehabilit,1979(Suppl 2):22-37.
[2] 杜迎翔, 陈玉英, 李康乐,等. 双氯灭痛血药浓度的高效液相色谱分析[J]. 中国药科大学学报,1995,26(1):23-26.
[3] 李 克, 赵飞浪, 袁倚盛,等. 反相高效液相色谱法测定人血浆中双氯灭痛[J ].药物分析杂志,1995,15(5):17-19.
[4] 鲁 莹, 刘 英, 蒋雪涛. 新型药物载体——微乳[J]. 国外医药*合 成药 生化药 制剂分册,1999,20(4):253-258.
[5] 鲁 莹, 蒋雪涛, 曾仁杰. 卵磷脂微乳的制备与理化性质考察[J]. 药学学 报, 2000,35 (1):52-55.
[收稿日期] 2000-03-09
[修回日期] 2000-07-24
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