高效毛细管电泳法用于环丙沙星原料药的杂质限量分析
作者：尹茶 吴玉田
单位：尹茶(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；吴玉田(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)
关键词：环丙沙星；电泳，高效毛细管；杂质限量分析
第二军医大学学报001015 [摘要] 目的: 建立环丙沙星杂质限量检 查的高效毛细管电泳(HPCE)方法。方法: 通过pH值、进样时间及其他 电泳条件的考察，确定检测环丙沙星及其杂质的HPCE优选方法，并对该方法进行考察。结果：方法精密度RSD为0.23%(迁移时间)和2.49%(峰面积)；检测限为1.21 μmol/L。杂质含量与样品溶液稀释保持一致。结论: HPCE法可成功 地用于环丙沙星原料药的杂质限量分析。
[中图分类号] R 927.11 [文献标识码] A
, 百拇医药
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0950-02
Impurity limit test of raw material of ciprofloxacin by high performance capill ary electrophoresis
YIN Cha, WU Yu-Tian
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy , Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
[ABSTRACT] Objective: To develop a high performance capillar y electrophoresis(HPCE) method for the impurity limit test of raw material of ci profloxacin. Methods: An optimal method was established by study ing on pH value, sampling time and other electrophoretic conditions. Res ults: The RSD of migration time was 0.23% and of the peak area was 2.49% . The limit of detection was 1.21 μmol/L. The impurity profile and content was consistent with the dilution of sample concentration. Conclusion: HPCE method proves to be suitable for impurity limit test of raw material of c iprofloxacin.
, 百拇医药
[KEY WORDS] ciprofloxacin; electrophoresis， high performance capilla ry ; impurity limit test
药物的纯度反映了其质量的优劣，只有药物纯度有了保证才能谈到其使用的有效性和安 全性。对原料药进行杂质限量分析是控制其纯度的一个非常重要的方面，也称为纯度检查。 高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis， HPCE)是近20年来发 展迅速的一项分析技术，具有高分离效率、低消耗、分析时间短、抗污染能力强、操作简便 、自动化程度高等突出特点，在医药领域中的应用日益广泛[1，2]。环丙沙星是喹 诺酮类抗生素中药理活性较强的一个，中国药典(1995版二部)规定用薄层层析法(TLC) 对此类药物进行杂质限量检查[3]，但TLC法分离效果差，且重现性不好。钟化人等 [4]以高效液相色谱法(HPLC)考察诺氟沙星及其有关物质，虽然能获得比较满意 的结果，但需用酸性较强(pH 3.0)的缓冲液组成流动相，这会严重降低色谱柱的寿命。本 研究建立了对环丙沙星原料药进行杂质限量检查的HPCE法，并对该方法进行了考察。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器与试药 毛细管离子分析仪(Capillary Ion Analyzer，美国 Waters公 司)。熔融石英毛细管(60 cm×75 μm，ID，河北永年光导纤维厂)。环丙沙星原料药由 中国药品生物制品检定所提供(批号 981022-1)，所用化学试剂均为分析纯。
1.2 电泳方法 电解液为25 mmol/L硼砂-磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，电压20 kV ，温度25℃，虹吸进样10 s，柱上紫外检测波长214 nm。
1.3 溶液配制 以0.1 mol/L NaOH为溶剂，分别配制质量浓度为0.004，0.02，0. 08，0.2，0.4，0.6 g/L的环丙沙星溶液。
1.4 杂质限量分析 以0.4 g/L的环丙沙星溶液，重复进样3次，以校正峰面积值 分别计算各杂质的百分浓度。
, http://www.100md.com
2 结果和讨论
2.1 分析条件的选择 当pH值为7.0～9.1时，环丙沙星及其杂质的分离情况不断变 化，有时出3个杂质峰(pH 8.5)，有时出2个杂质峰(pH 9.1)，最终选择电解液pH值为8. 5，因为此时峰形对称且环丙沙星与杂质峰能完全分离。此外，实验中发现当电压降低到15 kV时柱效会变差，最终确定的电压为20 kV。电泳图谱见图1。
图 1 环丙沙星原料药的电泳图谱
Fig 1 Electrophoretogram of raw material of ciprofloxacin
Peak 1～3：Unknown impurities
, http://www.100md.com 2.2 进样时间与柱效的关系 如增加进样时间则灵敏度提高，这对杂质的检出有 利，但同时会使柱效下降。为确定适当的进样时间对二者的关系进行了考察。结果表明，随 进样时间增加柱效缓缓下降，当进样时间分别为1，2，3，5，10，15，20，30 s时，计算柱 效分别为180 558，138 240，124 501，108 454，87 554，44 521，26 910及21 770， 最终选择进样时间为10 s。
2.3 方法的评价 在4～600 mg/L 质量浓度范围内，主峰的峰面积(Y)与浓 度(X, mg/L)的线性关系良好，回归方程为Y＝310.05 X -440.58，r＝ 0.999 1，可用于环丙沙星的含量测定。将质量浓度为40 mg/L的环丙沙星溶液重复进样 9次，计算而得迁移时间的精密度RSD＝0.23 %，峰面积的RSD＝2.49 %。若用内标法 ，RSD能被控制在更低水平。不断稀释环丙沙星溶液，当信噪比(S/N)为3时，最低检测浓 度为1.21 μmol/L。
, http://www.100md.com
2.4 杂质含量与样品稀释的一致性 由于在HPCE中峰面积与迁移时间线性相关， 所以计算杂质含量时应用校正峰面积(峰面积/迁移时间)。否则，主峰前的杂质的含量偏 低，而主峰后的杂质含量偏高。表1的结果表明，杂质含量在样品溶液从0.6 g/L稀释到0.2 g/L浓度范围内是一致的，在高样品浓度下，另外一杂质也能被检测到，其峰面积百分比为0 .12 %。重复以溶剂(0.1 mol/L NaOH)进样，未见干扰峰。
表 1 杂质含量与样品浓度稀释的一致性
Tab 1 Consistency of impurity
content with sample dilution
Sample(ρB/g.L-1)
, 百拇医药
0.6
0.4
0.2
Number of impurities
4
3
3
Total % impuritiesa
1.50
1.35
1.36
Greatest impurity (%)
, 百拇医药
0.82
0.80
0.80
RMT of greatest impurityb
0.93
0.93
0.92
Second greatest impurity (%)
0.33
0.32
0.33
RMT of second greatest impurity
, 百拇医药
1.08
1.08
1.09
a %=% total corrected area; b RMT = Relative migration time [基金项目] 国家自然科学基金资助项目(39770904).
[作者简介] 尹茶(1971-)，女(汉族)，博士，助理研究员.
[参 考 文 献]
[1] Liebich HM, Lehmann R, Stefano CD, et al. Analysis of tra ditional Chinese anticancer drugs by capillary electrophoresis[J]. J Chromato gr A,1998,795:388-393.
, 百拇医药
[2] Naylor S, Benson LM, Tomlinson AJ. Application of capillary electroph oresis and related techniques to drug metabolism studies[J]. J Chromatogr A, 1996,735:415-438.
[3] 中华人民共和国卫生部药典委员会编. 中华人民共和国药典.1995年版， 二部 [M].北京：化学工业出版社,1995.779-780.
[4] 钟化人, 才宝琴, 李青翠, 等. 诺氟沙星有关物质的检测与考察[J]. 药物 分析杂志,1993,13 (1):27-30.
[收稿日期] 2000-03-30
[修回日期] 2000-07-25, 百拇医药
单位：尹茶(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)；吴玉田(第二军医大学药学院药物分析教研室，上海 200433)
关键词：环丙沙星；电泳，高效毛细管；杂质限量分析
第二军医大学学报001015 [摘要] 目的: 建立环丙沙星杂质限量检 查的高效毛细管电泳(HPCE)方法。方法: 通过pH值、进样时间及其他 电泳条件的考察，确定检测环丙沙星及其杂质的HPCE优选方法，并对该方法进行考察。结果：方法精密度RSD为0.23%(迁移时间)和2.49%(峰面积)；检测限为1.21 μmol/L。杂质含量与样品溶液稀释保持一致。结论: HPCE法可成功 地用于环丙沙星原料药的杂质限量分析。
[中图分类号] R 927.11 [文献标识码] A
, 百拇医药
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0950-02
Impurity limit test of raw material of ciprofloxacin by high performance capill ary electrophoresis
YIN Cha, WU Yu-Tian
(Department of Pharmaceutical Analysis, College of Pharmacy , Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)
[ABSTRACT] Objective: To develop a high performance capillar y electrophoresis(HPCE) method for the impurity limit test of raw material of ci profloxacin. Methods: An optimal method was established by study ing on pH value, sampling time and other electrophoretic conditions. Res ults: The RSD of migration time was 0.23% and of the peak area was 2.49% . The limit of detection was 1.21 μmol/L. The impurity profile and content was consistent with the dilution of sample concentration. Conclusion: HPCE method proves to be suitable for impurity limit test of raw material of c iprofloxacin.
, 百拇医药
[KEY WORDS] ciprofloxacin; electrophoresis， high performance capilla ry ; impurity limit test
药物的纯度反映了其质量的优劣，只有药物纯度有了保证才能谈到其使用的有效性和安 全性。对原料药进行杂质限量分析是控制其纯度的一个非常重要的方面，也称为纯度检查。 高效毛细管电泳(high performance capillary electrophoresis， HPCE)是近20年来发 展迅速的一项分析技术，具有高分离效率、低消耗、分析时间短、抗污染能力强、操作简便 、自动化程度高等突出特点，在医药领域中的应用日益广泛[1，2]。环丙沙星是喹 诺酮类抗生素中药理活性较强的一个，中国药典(1995版二部)规定用薄层层析法(TLC) 对此类药物进行杂质限量检查[3]，但TLC法分离效果差，且重现性不好。钟化人等 [4]以高效液相色谱法(HPLC)考察诺氟沙星及其有关物质，虽然能获得比较满意 的结果，但需用酸性较强(pH 3.0)的缓冲液组成流动相，这会严重降低色谱柱的寿命。本 研究建立了对环丙沙星原料药进行杂质限量检查的HPCE法，并对该方法进行了考察。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 仪器与试药 毛细管离子分析仪(Capillary Ion Analyzer，美国 Waters公 司)。熔融石英毛细管(60 cm×75 μm，ID，河北永年光导纤维厂)。环丙沙星原料药由 中国药品生物制品检定所提供(批号 981022-1)，所用化学试剂均为分析纯。
1.2 电泳方法 电解液为25 mmol/L硼砂-磷酸盐缓冲液(pH 8.5)，电压20 kV ，温度25℃，虹吸进样10 s，柱上紫外检测波长214 nm。
1.3 溶液配制 以0.1 mol/L NaOH为溶剂，分别配制质量浓度为0.004，0.02，0. 08，0.2，0.4，0.6 g/L的环丙沙星溶液。
1.4 杂质限量分析 以0.4 g/L的环丙沙星溶液，重复进样3次，以校正峰面积值 分别计算各杂质的百分浓度。
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2 结果和讨论
2.1 分析条件的选择 当pH值为7.0～9.1时，环丙沙星及其杂质的分离情况不断变 化，有时出3个杂质峰(pH 8.5)，有时出2个杂质峰(pH 9.1)，最终选择电解液pH值为8. 5，因为此时峰形对称且环丙沙星与杂质峰能完全分离。此外，实验中发现当电压降低到15 kV时柱效会变差，最终确定的电压为20 kV。电泳图谱见图1。
图 1 环丙沙星原料药的电泳图谱
Fig 1 Electrophoretogram of raw material of ciprofloxacin
Peak 1～3：Unknown impurities
, http://www.100md.com 2.2 进样时间与柱效的关系 如增加进样时间则灵敏度提高，这对杂质的检出有 利，但同时会使柱效下降。为确定适当的进样时间对二者的关系进行了考察。结果表明，随 进样时间增加柱效缓缓下降，当进样时间分别为1，2，3，5，10，15，20，30 s时，计算柱 效分别为180 558，138 240，124 501，108 454，87 554，44 521，26 910及21 770， 最终选择进样时间为10 s。
2.3 方法的评价 在4～600 mg/L 质量浓度范围内，主峰的峰面积(Y)与浓 度(X, mg/L)的线性关系良好，回归方程为Y＝310.05 X -440.58，r＝ 0.999 1，可用于环丙沙星的含量测定。将质量浓度为40 mg/L的环丙沙星溶液重复进样 9次，计算而得迁移时间的精密度RSD＝0.23 %，峰面积的RSD＝2.49 %。若用内标法 ，RSD能被控制在更低水平。不断稀释环丙沙星溶液，当信噪比(S/N)为3时，最低检测浓 度为1.21 μmol/L。
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2.4 杂质含量与样品稀释的一致性 由于在HPCE中峰面积与迁移时间线性相关， 所以计算杂质含量时应用校正峰面积(峰面积/迁移时间)。否则，主峰前的杂质的含量偏 低，而主峰后的杂质含量偏高。表1的结果表明，杂质含量在样品溶液从0.6 g/L稀释到0.2 g/L浓度范围内是一致的，在高样品浓度下，另外一杂质也能被检测到，其峰面积百分比为0 .12 %。重复以溶剂(0.1 mol/L NaOH)进样，未见干扰峰。
表 1 杂质含量与样品浓度稀释的一致性
Tab 1 Consistency of impurity
content with sample dilution
Sample(ρB/g.L-1)
, 百拇医药
0.6
0.4
0.2
Number of impurities
4
3
3
Total % impuritiesa
1.50
1.35
1.36
Greatest impurity (%)
, 百拇医药
0.82
0.80
0.80
RMT of greatest impurityb
0.93
0.93
0.92
Second greatest impurity (%)
0.33
0.32
0.33
RMT of second greatest impurity
, 百拇医药
1.08
1.08
1.09
a %=% total corrected area; b RMT = Relative migration time [基金项目] 国家自然科学基金资助项目(39770904).
[作者简介] 尹茶(1971-)，女(汉族)，博士，助理研究员.
[参 考 文 献]
[1] Liebich HM, Lehmann R, Stefano CD, et al. Analysis of tra ditional Chinese anticancer drugs by capillary electrophoresis[J]. J Chromato gr A,1998,795:388-393.
, 百拇医药
[2] Naylor S, Benson LM, Tomlinson AJ. Application of capillary electroph oresis and related techniques to drug metabolism studies[J]. J Chromatogr A, 1996,735:415-438.
[3] 中华人民共和国卫生部药典委员会编. 中华人民共和国药典.1995年版， 二部 [M].北京：化学工业出版社,1995.779-780.
[4] 钟化人, 才宝琴, 李青翠, 等. 诺氟沙星有关物质的检测与考察[J]. 药物 分析杂志,1993,13 (1):27-30.
[收稿日期] 2000-03-30
[修回日期] 2000-07-25, 百拇医药