甘氨双唑钠的稳定性及肠吸收研究
作者：钟延强 高申 林森 魏华 居红卫 鲁莹
单位：钟延强(第二军医大学药学院药剂学教研室， 上海 200433)；高申(第二军医大学药学院药剂学教研室， 上海 200433)；林森(中国药科大学1998届实习生)；魏华(解放军第411医院)；居红卫(第二军医大学药学院药剂学教研室， 上海 200433)；鲁莹(第二军医大学药学院药剂学教研室， 上海 200433)
关键词：甘氨双唑钠；稳定性；肠道吸收
第二军医大学学报001036 [中图分类号] R 979.19 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0949-03
放疗是治疗癌症的主要方法之一，放疗增敏剂则可以提高实体肿瘤组织内乏氧细胞对射 线的敏感性，能较明显地提高肿瘤放疗的近期疗效。放射增敏剂的研究自50年代后期开展以 来，合成筛选了众多类型的化合物，但比较集中在硝基咪唑类亲电子化合物的范围内[ 1]，但因其有明显的神经毒副作用，无法应用于临床治疗。
, 百拇医药
甘氨双唑钠(CMNa)是我国自行设计、筛选和研制的、具有明显放射增敏作用的新型硝基咪唑 类化合物，其化学结构如下：
目前，CMNa用于临床研究的剂型为冻干粉针剂，患者使用不便。本实验通过SD大鼠的在 体肠吸收研究[2]，探讨CMNa口服吸收的可行性。
1 材料和方法
1.1 药品、仪器和动物 CMNa(由中科院上海药物研究所提供，批号990315)； 甲硝唑(灭滴灵)原料药(由第二军医大学放射医学研究所提供)；磷酸二氢钾、氯化钠、氢 氧化钠和水合氯醛均为分析纯；甲醇和乙腈为色谱纯。美国 Waters 600工作站；PHB-Ⅰ型 便携式pH计(上海三倍电讯厂)； YSB-2型平流泵(中科院上海分院科学仪器厂)；ZRD6 -B型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器厂)。实验动物为 SD大鼠(第二军医大学实验动物中 心提供)，体质量(225±25)g。
, 百拇医药
1.2 CMNa肠液内稳定性实验
1.2.1 试液的配制 (1)人工肠液：取磷酸二氢钾6.8 g，加水500 ml使溶解， 用0.4%(0.1 mol/L)的氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1 000 m1即得。(2)磷 酸盐缓冲液：磷酸二氢钾1.7 g，加0.1 mol/L氢氧化钠75 ml，加水稀释至500 ml，调节pH 为7.1.
1.2.2 定量方法 (1)色谱条件：色谱柱为C18不锈钢柱(250 mm×3 mm ， 5 μm)，流动相为甲醇∶磷酸盐缓冲液(30∶70)，流速 1 ml/min，检测波长3 19 nm，进样量20 μl，柱温(37±0.5)℃。(2)线性关系考察：精密称量CMNa 适量于棕色容量瓶中，加入人工肠液定容，配制成0.02，0.04，0.1，0.4，0. 6和1.0 mg/ml的6份标准液，各进样20 μl。以浓度c为纵坐标，峰面积A为横坐标 ，进行线性回归，得标准曲线方程如下：c(μg/ml)=1.046 8×10-5A+0 .886 3， r=0.998 1 (n=3)。(3)方法回收率：精密称量 CMNa，用 人工肠液配制为6种质量浓度，分别为 49，98，147，196，294和392 μg/ml ，进样量20 μl，用标准曲线方程求测得浓度。该方法的平均回收率和变异系数分别为(100.17±0.40)% 和0.40%。
, 百拇医药
1.2.3 实验方法 精密称量 CMNa，适量加入人工肠液使质量浓度为20 μg/m1， 放置于(37±0.5)℃恒温水浴锅内，立即取20 μl进样，记录保留时间及峰面积，同时进样 相同浓度甲硝唑20 μl， CMNa 峰与甲硝唑峰分离良好。以后每2 h取CMNa 溶液20 μl进样 ，记录每次 CMNa 峰面积的减少量。
1.3 CMNa 肠吸收实验
1.3.1 试液的配制 (1)肠回流液：精密称取 CMNa 原料药0.047， 0.023 5 g分 别置于50 ml棕色容量瓶中，用生理盐水定容，得0.94和0.47 mg/ml 两个浓度的CMNa 肠回 流液。(2)麻醉剂：取10 g水合氯醛，使之溶于 100 ml水中即得。
1.3.2 实验方法 按文献[4]方法取成年SD大鼠20只，雌雄不拘，随机分为4组，按十二指肠组、空肠组、回肠组及十二指肠高浓 度组进行肠插管手术。具体操作如下：大鼠于实验前禁食16 h左右，腹腔注射水合氯醛(4 m l/kg)使之全身麻醉，并固定于手术台上。沿大鼠腹中线打开腹腔(约3.5 cm)，结扎胆总管 后，十二指肠从幽门下2 cm处、空肠从幽门下15 cm处、回肠自盲肠上溯20 cm处开始，各肠 段均取10 cm，分别于肠管两端在体开窗插管。各插管均采取双线结扎。
, 百拇医药
插管与平流泵连接，形成的回路如P913图1所示。各肠段回 流液均为50 ml，水浴温度(37±0.5)℃，循环流速1 ml/min，回流前用生理盐水冲洗 肠段30 min。回流过程中于15，30，45，60，90和120 min用微量注射器各取样100 μl 。回流2 h后再用生理盐水将各肠段中剩余药液洗出(约30 min)，合并入回流药液中 ，置100 ml棕色容量瓶。合并后药液经0.8 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液20 μl进样， 用标准曲线计算浓度，加上分解为甲硝唑的量，比较回流前后主药CMNa的含量。
1.3.3 方法选择性 以空白生理盐水与含药生理盐水分别进行整个肠段的回流，考 察空白生理盐水对药物定量有无干扰。结果显示空白生理盐水对结果无干扰。CMNa在生理盐 水中，以浓度c为纵坐标，峰面积A为横坐标进行线性回归，得标准曲线方程：c (μg/ml)=3.826 7×10-5 A+0.134 1, r=0.998 6;甲硝唑在生理 盐水中的标准曲线：c(μg/ml)=2.754 6×10-4 A -0.190 9， r =0.998 0 (n=5)。
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1.4 统计学处理 药物吸收百分率按如下公式计算：[(原始药量-剩余药量) /原始药量]×100%；每个肠段各实验5只大鼠，数据以
±s表示，采用配对 t检验。
2 结 果
2.1 CMNa肠液内的稳定性 将CMNa人工肠液放置不同时间后测得的峰面积代入标 准曲线，计算各时间点 CMNa含量，结果表明 CMNa 在人工肠液中8 h仍有85.23%药物未分解 ，可满足本实验设计要求。
2.2 各肠段的吸收百分率 结果表明CMNa在大鼠体内按十二指肠、空肠、回肠的 顺序其吸收百分率依次降低。十二指肠、空肠、回肠的平均吸收百分率分别为(21.85± 12.19)%，(14.30±2.42)%和(7.35±1.18)%。本实验采用高、低两个浓度，验证CMNa浓 度对十二指肠段吸收的影响。结果表明，0.47 mg/ml剂量组平均吸收百分率为( 21.85±12.19)%，0.94 mg/ml剂量组平均吸收百分率为(20.14±9.23)%(n =5)，经 t检验分析，组间差异不显著(P>0.05)。对十二指肠、空肠、回肠3组实验数 据进行配对t检验分析，空肠组与十二指肠组比较具有显著差异(P<0.05)，回肠 组与十二指肠组比较具有非常显著差异(P<0.01)，说明CMNa体内主要在十二指肠部位吸收。
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3 讨 论
CMNa在大鼠体内按十二指肠、空肠、回肠的顺序，其吸收百分率依次降低，并且平均吸 收百分率均较低，最高仅20%左右。考虑到药物吸收进入血循环后还要经过肝首过效应，因 此口服给药后的生物利用度可能更低，建议不宜制成普通口服吸收制剂。
吸收 部位的pH值是影响药物吸收的重要因素。本实验中采用中性生理盐水为循环介质，循环过程 中大量回流液使各肠段固有的生理pH值发生改变，如果将生理盐水改为与该肠段pH值相近的 缓冲液进行实验，药物在不同肠段的吸收状况是否发生改变，还有待于进一步实验考证。
此外，CMNa口服肠溶制剂的体内生物利用度也有待进一步研究。
[作者简介] 钟延强(1965-)，男(汉族)，硕士，副教授，硕士生导师.
[参 考 文 献]
, 百拇医药
[1] 骆传环，鲍云华，舒 融，等.放射增敏剂AK和MISO涂抹给药的临床试用 [J].中华放射医学与防护杂志， 1997，17(4)：229-232.
[2] 任献忠, 张均寿, 王恒斌. 红霉素肠道吸收机制及最佳吸收部位研究[J]. 中国药科大学学报, 1997,28(1):17-22.
[3] Hui YF, Kolars J, Hu Z. Intestinal clearance of H2-antagonists[J ]. Biochem Pharmacol,1994,48(2):229-231.
[4] Dackson K, Stone JA, Palin KJ. Evaluation of the mass balance assumpt ion with respect to the two-resistance model of intestinal absorption by usi ng in situ single-pass intestinal perfusion of theophylline in rats[J ]. J Pharm Sci, 1992, 81(4):321-326.
[收稿日期] 2000-04-24
[修回日期] 2000-07-18, http://www.100md.com
单位：钟延强(第二军医大学药学院药剂学教研室， 上海 200433)；高申(第二军医大学药学院药剂学教研室， 上海 200433)；林森(中国药科大学1998届实习生)；魏华(解放军第411医院)；居红卫(第二军医大学药学院药剂学教研室， 上海 200433)；鲁莹(第二军医大学药学院药剂学教研室， 上海 200433)
关键词：甘氨双唑钠；稳定性；肠道吸收
第二军医大学学报001036 [中图分类号] R 979.19 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0949-03
放疗是治疗癌症的主要方法之一，放疗增敏剂则可以提高实体肿瘤组织内乏氧细胞对射 线的敏感性，能较明显地提高肿瘤放疗的近期疗效。放射增敏剂的研究自50年代后期开展以 来，合成筛选了众多类型的化合物，但比较集中在硝基咪唑类亲电子化合物的范围内[ 1]，但因其有明显的神经毒副作用，无法应用于临床治疗。
, 百拇医药
甘氨双唑钠(CMNa)是我国自行设计、筛选和研制的、具有明显放射增敏作用的新型硝基咪唑 类化合物，其化学结构如下：
目前，CMNa用于临床研究的剂型为冻干粉针剂，患者使用不便。本实验通过SD大鼠的在 体肠吸收研究[2]，探讨CMNa口服吸收的可行性。
1 材料和方法
1.1 药品、仪器和动物 CMNa(由中科院上海药物研究所提供，批号990315)； 甲硝唑(灭滴灵)原料药(由第二军医大学放射医学研究所提供)；磷酸二氢钾、氯化钠、氢 氧化钠和水合氯醛均为分析纯；甲醇和乙腈为色谱纯。美国 Waters 600工作站；PHB-Ⅰ型 便携式pH计(上海三倍电讯厂)； YSB-2型平流泵(中科院上海分院科学仪器厂)；ZRD6 -B型药物溶出度仪(上海黄海药检仪器厂)。实验动物为 SD大鼠(第二军医大学实验动物中 心提供)，体质量(225±25)g。
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1.2 CMNa肠液内稳定性实验
1.2.1 试液的配制 (1)人工肠液：取磷酸二氢钾6.8 g，加水500 ml使溶解， 用0.4%(0.1 mol/L)的氢氧化钠溶液调节pH值至6.8，加水稀释至1 000 m1即得。(2)磷 酸盐缓冲液：磷酸二氢钾1.7 g，加0.1 mol/L氢氧化钠75 ml，加水稀释至500 ml，调节pH 为7.1.
1.2.2 定量方法 (1)色谱条件：色谱柱为C18不锈钢柱(250 mm×3 mm ， 5 μm)，流动相为甲醇∶磷酸盐缓冲液(30∶70)，流速 1 ml/min，检测波长3 19 nm，进样量20 μl，柱温(37±0.5)℃。(2)线性关系考察：精密称量CMNa 适量于棕色容量瓶中，加入人工肠液定容，配制成0.02，0.04，0.1，0.4，0. 6和1.0 mg/ml的6份标准液，各进样20 μl。以浓度c为纵坐标，峰面积A为横坐标 ，进行线性回归，得标准曲线方程如下：c(μg/ml)=1.046 8×10-5A+0 .886 3， r=0.998 1 (n=3)。(3)方法回收率：精密称量 CMNa，用 人工肠液配制为6种质量浓度，分别为 49，98，147，196，294和392 μg/ml ，进样量20 μl，用标准曲线方程求测得浓度。该方法的平均回收率和变异系数分别为(100.17±0.40)% 和0.40%。
, 百拇医药
1.2.3 实验方法 精密称量 CMNa，适量加入人工肠液使质量浓度为20 μg/m1， 放置于(37±0.5)℃恒温水浴锅内，立即取20 μl进样，记录保留时间及峰面积，同时进样 相同浓度甲硝唑20 μl， CMNa 峰与甲硝唑峰分离良好。以后每2 h取CMNa 溶液20 μl进样 ，记录每次 CMNa 峰面积的减少量。
1.3 CMNa 肠吸收实验
1.3.1 试液的配制 (1)肠回流液：精密称取 CMNa 原料药0.047， 0.023 5 g分 别置于50 ml棕色容量瓶中，用生理盐水定容，得0.94和0.47 mg/ml 两个浓度的CMNa 肠回 流液。(2)麻醉剂：取10 g水合氯醛，使之溶于 100 ml水中即得。
1.3.2 实验方法 按文献[4]方法取成年SD大鼠20只，雌雄不拘，随机分为4组，按十二指肠组、空肠组、回肠组及十二指肠高浓 度组进行肠插管手术。具体操作如下：大鼠于实验前禁食16 h左右，腹腔注射水合氯醛(4 m l/kg)使之全身麻醉，并固定于手术台上。沿大鼠腹中线打开腹腔(约3.5 cm)，结扎胆总管 后，十二指肠从幽门下2 cm处、空肠从幽门下15 cm处、回肠自盲肠上溯20 cm处开始，各肠 段均取10 cm，分别于肠管两端在体开窗插管。各插管均采取双线结扎。
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插管与平流泵连接，形成的回路如P913图1所示。各肠段回 流液均为50 ml，水浴温度(37±0.5)℃，循环流速1 ml/min，回流前用生理盐水冲洗 肠段30 min。回流过程中于15，30，45，60，90和120 min用微量注射器各取样100 μl 。回流2 h后再用生理盐水将各肠段中剩余药液洗出(约30 min)，合并入回流药液中 ，置100 ml棕色容量瓶。合并后药液经0.8 μm微孔滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液20 μl进样， 用标准曲线计算浓度，加上分解为甲硝唑的量，比较回流前后主药CMNa的含量。
1.3.3 方法选择性 以空白生理盐水与含药生理盐水分别进行整个肠段的回流，考 察空白生理盐水对药物定量有无干扰。结果显示空白生理盐水对结果无干扰。CMNa在生理盐 水中，以浓度c为纵坐标，峰面积A为横坐标进行线性回归，得标准曲线方程：c (μg/ml)=3.826 7×10-5 A+0.134 1, r=0.998 6;甲硝唑在生理 盐水中的标准曲线：c(μg/ml)=2.754 6×10-4 A -0.190 9， r =0.998 0 (n=5)。
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1.4 统计学处理 药物吸收百分率按如下公式计算：[(原始药量-剩余药量) /原始药量]×100%；每个肠段各实验5只大鼠，数据以
±s表示，采用配对 t检验。2 结 果
2.1 CMNa肠液内的稳定性 将CMNa人工肠液放置不同时间后测得的峰面积代入标 准曲线，计算各时间点 CMNa含量，结果表明 CMNa 在人工肠液中8 h仍有85.23%药物未分解 ，可满足本实验设计要求。
2.2 各肠段的吸收百分率 结果表明CMNa在大鼠体内按十二指肠、空肠、回肠的 顺序其吸收百分率依次降低。十二指肠、空肠、回肠的平均吸收百分率分别为(21.85± 12.19)%，(14.30±2.42)%和(7.35±1.18)%。本实验采用高、低两个浓度，验证CMNa浓 度对十二指肠段吸收的影响。结果表明，0.47 mg/ml剂量组平均吸收百分率为( 21.85±12.19)%，0.94 mg/ml剂量组平均吸收百分率为(20.14±9.23)%(n =5)，经 t检验分析，组间差异不显著(P>0.05)。对十二指肠、空肠、回肠3组实验数 据进行配对t检验分析，空肠组与十二指肠组比较具有显著差异(P<0.05)，回肠 组与十二指肠组比较具有非常显著差异(P<0.01)，说明CMNa体内主要在十二指肠部位吸收。
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3 讨 论
CMNa在大鼠体内按十二指肠、空肠、回肠的顺序，其吸收百分率依次降低，并且平均吸 收百分率均较低，最高仅20%左右。考虑到药物吸收进入血循环后还要经过肝首过效应，因 此口服给药后的生物利用度可能更低，建议不宜制成普通口服吸收制剂。
吸收 部位的pH值是影响药物吸收的重要因素。本实验中采用中性生理盐水为循环介质，循环过程 中大量回流液使各肠段固有的生理pH值发生改变，如果将生理盐水改为与该肠段pH值相近的 缓冲液进行实验，药物在不同肠段的吸收状况是否发生改变，还有待于进一步实验考证。
此外，CMNa口服肠溶制剂的体内生物利用度也有待进一步研究。
[作者简介] 钟延强(1965-)，男(汉族)，硕士，副教授，硕士生导师.
[参 考 文 献]
, 百拇医药
[1] 骆传环，鲍云华，舒 融，等.放射增敏剂AK和MISO涂抹给药的临床试用 [J].中华放射医学与防护杂志， 1997，17(4)：229-232.
[2] 任献忠, 张均寿, 王恒斌. 红霉素肠道吸收机制及最佳吸收部位研究[J]. 中国药科大学学报, 1997,28(1):17-22.
[3] Hui YF, Kolars J, Hu Z. Intestinal clearance of H2-antagonists[J ]. Biochem Pharmacol,1994,48(2):229-231.
[4] Dackson K, Stone JA, Palin KJ. Evaluation of the mass balance assumpt ion with respect to the two-resistance model of intestinal absorption by usi ng in situ single-pass intestinal perfusion of theophylline in rats[J ]. J Pharm Sci, 1992, 81(4):321-326.
[收稿日期] 2000-04-24
[修回日期] 2000-07-18, http://www.100md.com