急性白血病患者白细胞免疫表型的分析
作者：杨志钊 何洁冰 梁锦胜
单位：(广东省中山市人民医院检验中心 528400)
关键词：白血病；免疫表型
广东医学001025
【摘要】目的 探讨各类白血病的免疫表型的分布和特征。方法 用11种单克隆抗体(CD)，用流式细胞仪对17例白血病患者骨髓单个核细胞进行测定。结果 各型白血病主要表达本系列特异抗原，B-ALL可见表达髓系抗原，髓系也可见表达淋系抗原，M3较少表达CD34和HLA-DR；1例杂合型白血病(HAL)表达CD+34CD+13CD+33CD+19。结论 白血病细胞具有高度异质性；FAB与免疫分型同时结合可互相补充，提高诊断率；HAL的诊断不能单纯靠免疫表型。
, 百拇医药
急性白血病，尤其是分化较差的原始细胞白血病，单纯的形态学诊断已无法满足临床的需要。应用单克隆抗体检测白细胞的表面标志，能较客观地反映细胞的来源及分化发育阶段，较准确地鉴别急性白血病的类型。本文对17例白血病的免疫表型进行了分析，其结果如下。
1 资料与方法
1.1 实验对象 17例患者均经形态学和组织化学确诊。其中男9例，女8例；年龄5～65岁，平均(43.9±17.7)岁。按FAB分型，ALL 5例，M2a 3例，M3 4例，M5 2例，M1、M4及分类不明各1例。
1.2 试剂及仪器
1.2.1 单克隆抗体(CD)的选择 识别B淋巴细胞的有：CD19，CD20，CD22；识别T淋巴细胞的有：CD3，CD7；识别髓系细胞的有：CD13，CD33，CD14，CD41；非系列特异性的有：CD34，HLA-DR。由法国IOTEST公司生产。
, 百拇医药
1.2.2 仪器 COULTER XL FCM流式细胞仪。
1.3 方法 所有病例均为初诊，取肝素抗凝骨髓，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，用流式细胞仪检测白血病细胞表面标志。淋系标志≥30%为阳性，髓系标志≥20%为阳性。被检标本中白血病细胞≥70%。
2 结果
17例白血病患者的免疫表型见表1。17例白血病中急淋5例，除表达本系列标记外，4例B-ALL中有1例表达髓系标记CD13。急非淋12例，均特异性表达髓系共同标记CD33和CD13；M1 1例，除表达髓系标记外还表达CD41和CD22；4例M3均不表达HLA-DR，只有1例表达CD34，有2例分别表达淋系标记CD7和CD22；M4和M5各1例，均同时表达髓系标记和单核细胞标记CD14；M7 1例，表达髓系共同标记和巨核系标记CD41；杂合型白血病1例，同时表达淋系和髓系标记。
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表1 17例患者的临床形态学分型及免疫学分型结果 最终
诊断
例数
免疫表型
FAB诊断
B-ALL
4
CD+19CD+20CD+22CD+34HLA-DR+CD-/+13
ALL
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T-ALL
1
CD+3CD+7CD+34HLA-DR+
ALL
M1
1
CD+34HLA-DR+CD+13CD+33CD+41CD+22
, 百拇医药
M1
M2a
3
CD+34HLA-DR+CD+33CD+13
M2a
M3
4
CD+13CD+33CD-/+34CD-/+7CD-/+22
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M3
M4
1
CD+34CD+13CD+33CD+14
M4
M5
1
CD+34CD+13CD+33CD+14
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M5
M7
1
CD+34CD+13CD+33CD+41
不明
HAL
1
CD+34CD+13CD+33CD+19
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M5
3 讨论
FAB分型标准主要是以形态学为基础，由于白血病细胞的异质性，难免给临床鉴别ALL和AML带来一定的困难。而免疫学分型是基于细胞表面固有的标志，既客观又有很好的重复性。尤其在FAB难以分类的病例免疫分型具有更大的鉴别意义，而且AML-M0是唯一只有通过免疫表型分析才能确诊的一个亚型[1]。
本组5例ALL中B-ALL占4/5，和文献报道基本一致[2]。髓系急性白血病均共同表达CD13和CD33，但各亚型间的免疫表型无明显区别。CD14和CD15阳性有助于M4和M5的诊断，但阴性不能排除其诊断；和文献结果一样[1]，M3的特征免疫表型是CD+13CD+33，较少表达HLA-DR和CD34，这表明了M3的白血病细胞起源于分化相对较成熟的祖细胞，和邵剑锋等[3]报道一致。本组M1同时表达CD41，说明了粒系和巨核系起源于同一祖细胞。M7的白血病细胞形态不典型，组化结果也不特异；电镜下血小板过氧化酶(PPO)染色是M7最敏感和特异的确诊指标，但因电镜下能普及而受很大限制；免疫表型是目前确诊M7的主要手段，其免疫表型特点是CD34、CD33或CD13阳性，但最特异的标记是因子Ⅷ相关抗原和血小板糖蛋白GPⅢa(CD61)和GPⅡb/Ⅲa复合物(CD41)[2]。本组部分B-ALL和AML表达其他系列的标志，即“髓系抗原阳性的ALL(M+ALL)”或 “淋系抗原阳性的AML(Ly+AML)”，说明了白血病是高度异质性，非专一性的恶性克隆性疾病。有作者认为淋、髓系抗原的共性是早期造血分化过程中的一个阶段，是恶性转化过程中保留了早期造血细胞的标志特征[4]。
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杂合型白血病的诊断主要依靠表面抗原的积分[5]。对于本组的1例杂合型白血病，细胞呈大小两群，其过氧化酶阳性率22%，而且大细胞群过氧化酶阳性，小细胞群过氧化酶阴性；糖原染色阳性大细胞呈弥漫分布，阳性小细胞呈粗颗粒状，积分126分；免疫表型：CD+34CD+13CD+33CD+19；用DA方案化疗1个疗程后白血病细胞由92%下降到71%，而且基本为单一的小细胞群，同时抗氧化酶其阳性率转为0，后来兼用VP方案，最后达到缓解。该病例符合Gale提出的杂合型白血病的诊断标准[6]，同时治疗结果也证实了这一诊断。作者认为，杂合型白血病的诊断不能单纯依靠免疫表型，尤其在条件较差的基层单位，应同时结合组化的结果，并且对形态、组化和治疗效果进行动态分析。
参考文献
, 百拇医药
1，肖志坚，郝玉书.免疫表型分析与急白血病诊断.中华血液学杂志，1996，18(1)：
2，汤美华，陈 璋，钱林生，等.应用单克隆抗体鉴别40例FAB标准难以分类的急性白血病.中华血液学杂志，1991，12(1)：6
3，邵剑锋，陈珊珊，傅家传，等.白血病免疫分型分析.白血病杂志，1997，12：250
4，Bender JG,Unverzagt KL,Walker DE,et al.Indentification and comparison of CD+34 cells and their subpopulation from normal peripheral blood and bone marrow using FCM.Blood,1991,77:2591
5，张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1998.207～210
6，Gale PR.Ben-Bassat I Hybrid acute leukaemia.Br J Haematol,1987,65:261
(收稿日期：1999-12-28), 百拇医药
单位：(广东省中山市人民医院检验中心 528400)
关键词：白血病；免疫表型
广东医学001025
【摘要】目的 探讨各类白血病的免疫表型的分布和特征。方法 用11种单克隆抗体(CD)，用流式细胞仪对17例白血病患者骨髓单个核细胞进行测定。结果 各型白血病主要表达本系列特异抗原，B-ALL可见表达髓系抗原，髓系也可见表达淋系抗原，M3较少表达CD34和HLA-DR；1例杂合型白血病(HAL)表达CD+34CD+13CD+33CD+19。结论 白血病细胞具有高度异质性；FAB与免疫分型同时结合可互相补充，提高诊断率；HAL的诊断不能单纯靠免疫表型。
, 百拇医药
急性白血病，尤其是分化较差的原始细胞白血病，单纯的形态学诊断已无法满足临床的需要。应用单克隆抗体检测白细胞的表面标志，能较客观地反映细胞的来源及分化发育阶段，较准确地鉴别急性白血病的类型。本文对17例白血病的免疫表型进行了分析，其结果如下。
1 资料与方法
1.1 实验对象 17例患者均经形态学和组织化学确诊。其中男9例，女8例；年龄5～65岁，平均(43.9±17.7)岁。按FAB分型，ALL 5例，M2a 3例，M3 4例，M5 2例，M1、M4及分类不明各1例。
1.2 试剂及仪器
1.2.1 单克隆抗体(CD)的选择 识别B淋巴细胞的有：CD19，CD20，CD22；识别T淋巴细胞的有：CD3，CD7；识别髓系细胞的有：CD13，CD33，CD14，CD41；非系列特异性的有：CD34，HLA-DR。由法国IOTEST公司生产。
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1.2.2 仪器 COULTER XL FCM流式细胞仪。
1.3 方法 所有病例均为初诊，取肝素抗凝骨髓，用淋巴细胞分离液分离单个核细胞，用流式细胞仪检测白血病细胞表面标志。淋系标志≥30%为阳性，髓系标志≥20%为阳性。被检标本中白血病细胞≥70%。
2 结果
17例白血病患者的免疫表型见表1。17例白血病中急淋5例，除表达本系列标记外，4例B-ALL中有1例表达髓系标记CD13。急非淋12例，均特异性表达髓系共同标记CD33和CD13；M1 1例，除表达髓系标记外还表达CD41和CD22；4例M3均不表达HLA-DR，只有1例表达CD34，有2例分别表达淋系标记CD7和CD22；M4和M5各1例，均同时表达髓系标记和单核细胞标记CD14；M7 1例，表达髓系共同标记和巨核系标记CD41；杂合型白血病1例，同时表达淋系和髓系标记。
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表1 17例患者的临床形态学分型及免疫学分型结果 最终
诊断
例数
免疫表型
FAB诊断
B-ALL
4
CD+19CD+20CD+22CD+34HLA-DR+CD-/+13
ALL
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T-ALL
1
CD+3CD+7CD+34HLA-DR+
ALL
M1
1
CD+34HLA-DR+CD+13CD+33CD+41CD+22
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M1
M2a
3
CD+34HLA-DR+CD+33CD+13
M2a
M3
4
CD+13CD+33CD-/+34CD-/+7CD-/+22
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M3
M4
1
CD+34CD+13CD+33CD+14
M4
M5
1
CD+34CD+13CD+33CD+14
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M5
M7
1
CD+34CD+13CD+33CD+41
不明
HAL
1
CD+34CD+13CD+33CD+19
, http://www.100md.com
M5
3 讨论
FAB分型标准主要是以形态学为基础，由于白血病细胞的异质性，难免给临床鉴别ALL和AML带来一定的困难。而免疫学分型是基于细胞表面固有的标志，既客观又有很好的重复性。尤其在FAB难以分类的病例免疫分型具有更大的鉴别意义，而且AML-M0是唯一只有通过免疫表型分析才能确诊的一个亚型[1]。
本组5例ALL中B-ALL占4/5，和文献报道基本一致[2]。髓系急性白血病均共同表达CD13和CD33，但各亚型间的免疫表型无明显区别。CD14和CD15阳性有助于M4和M5的诊断，但阴性不能排除其诊断；和文献结果一样[1]，M3的特征免疫表型是CD+13CD+33，较少表达HLA-DR和CD34，这表明了M3的白血病细胞起源于分化相对较成熟的祖细胞，和邵剑锋等[3]报道一致。本组M1同时表达CD41，说明了粒系和巨核系起源于同一祖细胞。M7的白血病细胞形态不典型，组化结果也不特异；电镜下血小板过氧化酶(PPO)染色是M7最敏感和特异的确诊指标，但因电镜下能普及而受很大限制；免疫表型是目前确诊M7的主要手段，其免疫表型特点是CD34、CD33或CD13阳性，但最特异的标记是因子Ⅷ相关抗原和血小板糖蛋白GPⅢa(CD61)和GPⅡb/Ⅲa复合物(CD41)[2]。本组部分B-ALL和AML表达其他系列的标志，即“髓系抗原阳性的ALL(M+ALL)”或 “淋系抗原阳性的AML(Ly+AML)”，说明了白血病是高度异质性，非专一性的恶性克隆性疾病。有作者认为淋、髓系抗原的共性是早期造血分化过程中的一个阶段，是恶性转化过程中保留了早期造血细胞的标志特征[4]。
, http://www.100md.com
杂合型白血病的诊断主要依靠表面抗原的积分[5]。对于本组的1例杂合型白血病，细胞呈大小两群，其过氧化酶阳性率22%，而且大细胞群过氧化酶阳性，小细胞群过氧化酶阴性；糖原染色阳性大细胞呈弥漫分布，阳性小细胞呈粗颗粒状，积分126分；免疫表型：CD+34CD+13CD+33CD+19；用DA方案化疗1个疗程后白血病细胞由92%下降到71%，而且基本为单一的小细胞群，同时抗氧化酶其阳性率转为0，后来兼用VP方案，最后达到缓解。该病例符合Gale提出的杂合型白血病的诊断标准[6]，同时治疗结果也证实了这一诊断。作者认为，杂合型白血病的诊断不能单纯依靠免疫表型，尤其在条件较差的基层单位，应同时结合组化的结果，并且对形态、组化和治疗效果进行动态分析。
参考文献
, 百拇医药
1，肖志坚，郝玉书.免疫表型分析与急白血病诊断.中华血液学杂志，1996，18(1)：
2，汤美华，陈 璋，钱林生，等.应用单克隆抗体鉴别40例FAB标准难以分类的急性白血病.中华血液学杂志，1991，12(1)：6
3，邵剑锋，陈珊珊，傅家传，等.白血病免疫分型分析.白血病杂志，1997，12：250
4，Bender JG,Unverzagt KL,Walker DE,et al.Indentification and comparison of CD+34 cells and their subpopulation from normal peripheral blood and bone marrow using FCM.Blood,1991,77:2591
5，张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1998.207～210
6，Gale PR.Ben-Bassat I Hybrid acute leukaemia.Br J Haematol,1987,65:261
(收稿日期：1999-12-28), 百拇医药