细菌内毒素检查法测定注射用美洛西林钠的热原
作者：明金兰 朱会琴
单位：(宁夏药品检验所，宁夏 银川 750004)
关键词：美洛西林钠；细菌内毒素；热原
宁夏医学杂志001035 【摘要】 用细菌内毒素检查法对注射用美洛西林钠Mezloc illin Sodium for Injection(简 称M)进行了热原检查方法的研究。实验结果表明，对样品浓度为20mg/ml的水溶液有抑制作 用，而对10mg/ml、5mg/ml的水溶液无抑制作用。认为可用细菌内毒素检查法进行该药品的 热原检查。
【中图分类号】 R927.12 【文献标识码】 B
文章编号：1001-5949(2000)10-0632-01
注射用美洛西林钠的热原检查目前采用的是兔法检测。美国药典XXⅢ 版已采用细菌内毒素法 。该药在临床上常以较大剂量用于静脉输注和推注，发生输液反应需要确证是否属于热原反 应时，用兔法检查是很不方便的，本文参照文献[1，2]，对样品进行了稀释并进 行了增强/抑制试验研究。现报告如下。
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1 材料与方法
1.1 试剂与试药：冻干鲎试剂0.1ml/支，福建省平潭县东方试剂厂出品，批号981101，灵敏度为0.25EU /ml， 经标定与厂方提供的灵敏度相符；内毒素工作标准品，由中国药品生物制品检定所提供，批 号9901，50EU/支；试剂实验用水，内毒素含量<0.03EU/ml，福建省福州新北生化工业有限 公司出品，批号981101，(以下简称为水)；注射用美洛西林钠，山东天达药业有限公司生产 ，该药家兔法测定均为阴性。
1.2 方法
1.2.1 细菌内毒素检查法按文献[3]操作。
1.2.2 增强/抑制试验：样品(M)的细菌内毒素限量计算：参照文献[1]规定M的热 原试验家兔注射量(M)为100mg/ml*1ml/kg和我国细菌内毒素的致热阈(K)5EU/kg[4] ，计算M的细菌内毒素理论限值(L)：
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M的最大有效稀释倍数(MVD)的计算
P为M的重量200mg/ml，MVC为最小有效浓度。文中使用鲎试剂灵敏度(λ=0.25EU/ml) ，故：
将MVC代入MVD公式：
所以，应将样品稀释40倍。
样品稀释：取样品1g/瓶加水5ml使成200mg/ml，再取溶液1ml加水至5ml混匀，然后做倍 比稀释成20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml。
增强/抑制试验：取M的20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml的溶液各0.1ml加到含0.1mg/支鲎试剂冻 干品中，振摇使试剂溶解，再加入0.5EU/ml细菌内毒素溶液0.1ml混匀后用封口胶封口。
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样品管的制备：取水0.1ml，加入0.1ml/支鲎试剂中使试剂溶解，再加入0.1ml M的5mg/ml的 溶液，混匀后用封口胶封口，将同时依法制备的阴性对照管和阳性对照管与增强/抑制试管 及样品管同时置(37±1℃)水溶中培养1h后取出观察结果。对抽检的批号980507、980706、9 80909、981108的四批供试品的测定结果显示，阳性对照管与增强/抑制试管(除20mg/ml的浓 度外)均为阳性，样品管、阴性对照管与增强/抑制试验的20mg/ml的浓度管均为阴性。每项 做4管。
2 讨论
美洛西林钠为半合成青霉素类，具有广谱抗菌作用，临床上多用于革兰氏阳性菌及大 肠杆 菌等阴性杆菌中敏感菌株所致的感染。成人常用量2～6g/日。用细菌内毒素检查法测定其热 原是有意义的，在实验中测得样品水溶液pH值为6.5，符合鲎试剂测定所要求的的pH值范围 6.25～7.25。细菌内毒素检查法具有灵敏、快速、操作简便等优点，无论做为法定(药典) 检验，还是为临床上确定该药物的热原反应的方法都是可行的。本法与家兔法测定结果一致 。
参考文献
[1]卫生部药品标准WS-131[S].(X-113)-96(1)
[2]U.S.P[S].XXⅢ，1024
[3]中国药典[S].1995年版二部，附录76
[4]夏振民.药品细菌内毒素检查的限值[J].药物分析杂志，1995，15(3)：54
收稿：2000-02-29, 百拇医药
单位：(宁夏药品检验所，宁夏 银川 750004)
关键词：美洛西林钠；细菌内毒素；热原
宁夏医学杂志001035 【摘要】 用细菌内毒素检查法对注射用美洛西林钠Mezloc illin Sodium for Injection(简 称M)进行了热原检查方法的研究。实验结果表明，对样品浓度为20mg/ml的水溶液有抑制作 用，而对10mg/ml、5mg/ml的水溶液无抑制作用。认为可用细菌内毒素检查法进行该药品的 热原检查。
【中图分类号】 R927.12 【文献标识码】 B
文章编号：1001-5949(2000)10-0632-01
注射用美洛西林钠的热原检查目前采用的是兔法检测。美国药典XXⅢ 版已采用细菌内毒素法 。该药在临床上常以较大剂量用于静脉输注和推注，发生输液反应需要确证是否属于热原反 应时，用兔法检查是很不方便的，本文参照文献[1，2]，对样品进行了稀释并进 行了增强/抑制试验研究。现报告如下。
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1 材料与方法
1.1 试剂与试药：冻干鲎试剂0.1ml/支，福建省平潭县东方试剂厂出品，批号981101，灵敏度为0.25EU /ml， 经标定与厂方提供的灵敏度相符；内毒素工作标准品，由中国药品生物制品检定所提供，批 号9901，50EU/支；试剂实验用水，内毒素含量<0.03EU/ml，福建省福州新北生化工业有限 公司出品，批号981101，(以下简称为水)；注射用美洛西林钠，山东天达药业有限公司生产 ，该药家兔法测定均为阴性。
1.2 方法
1.2.1 细菌内毒素检查法按文献[3]操作。
1.2.2 增强/抑制试验：样品(M)的细菌内毒素限量计算：参照文献[1]规定M的热 原试验家兔注射量(M)为100mg/ml*1ml/kg和我国细菌内毒素的致热阈(K)5EU/kg[4] ，计算M的细菌内毒素理论限值(L)：
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M的最大有效稀释倍数(MVD)的计算
P为M的重量200mg/ml，MVC为最小有效浓度。文中使用鲎试剂灵敏度(λ=0.25EU/ml) ，故：
将MVC代入MVD公式：
所以，应将样品稀释40倍。
样品稀释：取样品1g/瓶加水5ml使成200mg/ml，再取溶液1ml加水至5ml混匀，然后做倍 比稀释成20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml。
增强/抑制试验：取M的20mg/ml、10mg/ml、5mg/ml的溶液各0.1ml加到含0.1mg/支鲎试剂冻 干品中，振摇使试剂溶解，再加入0.5EU/ml细菌内毒素溶液0.1ml混匀后用封口胶封口。
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样品管的制备：取水0.1ml，加入0.1ml/支鲎试剂中使试剂溶解，再加入0.1ml M的5mg/ml的 溶液，混匀后用封口胶封口，将同时依法制备的阴性对照管和阳性对照管与增强/抑制试管 及样品管同时置(37±1℃)水溶中培养1h后取出观察结果。对抽检的批号980507、980706、9 80909、981108的四批供试品的测定结果显示，阳性对照管与增强/抑制试管(除20mg/ml的浓 度外)均为阳性，样品管、阴性对照管与增强/抑制试验的20mg/ml的浓度管均为阴性。每项 做4管。
2 讨论
美洛西林钠为半合成青霉素类，具有广谱抗菌作用，临床上多用于革兰氏阳性菌及大 肠杆 菌等阴性杆菌中敏感菌株所致的感染。成人常用量2～6g/日。用细菌内毒素检查法测定其热 原是有意义的，在实验中测得样品水溶液pH值为6.5，符合鲎试剂测定所要求的的pH值范围 6.25～7.25。细菌内毒素检查法具有灵敏、快速、操作简便等优点，无论做为法定(药典) 检验，还是为临床上确定该药物的热原反应的方法都是可行的。本法与家兔法测定结果一致 。
参考文献
[1]卫生部药品标准WS-131[S].(X-113)-96(1)
[2]U.S.P[S].XXⅢ，1024
[3]中国药典[S].1995年版二部，附录76
[4]夏振民.药品细菌内毒素检查的限值[J].药物分析杂志，1995，15(3)：54
收稿：2000-02-29, 百拇医药