急性肺损伤肺组织和血浆NO、ET-1变化的研究
作者：薛玉凤 赵聚宾 张杰 夏欣 孙爱励
单位：河北省医学科学院，石家庄 050021
关键词：一氧化氮；内皮素-1；白细胞介素8；急性肺损伤
中国急救医学001005 [摘 要] 目的 探讨急性肺损伤(ALI)时肺组织和血浆一氧化氮(NO)、 内皮素-1(ET-1)和白细胞介素8(IL-8)水平的变化和作用。方法 采用间隔24 h两次注射大肠杆菌内毒素(LPS)的方法，复制家兔内毒素性急性肺损伤模型。结果 ALI组血浆、肺组织匀浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中NO、ET-1和IL-8水平显著升高(P<0.01)，BALF内中性粒细胞(PMN)明显增多，肺系数(LPL)、肺水含量及通透指数均升高。血浆NO和IL-8浓度于静脉注射LPS后120 min达峰值，ET-1升高较早，60 min达峰值，随后衰减，致伤6 h，基本恢复接近正常水平。结论 NO、ET-1和IL-8是参与急性肺损伤不同时相的体液因子，三者共同参与ALI的发病。探讨急性肺损伤(ALI)时肺组织和血浆一氧化氮(NO)、 内皮素-1(ET-1)和白细胞介素8(IL-8)水平的变化和作用。方法 采用间隔24 h两次注射大肠杆菌内毒素(LPS)的方法，复制家兔内毒素性急性肺损伤模型。结果 ALI组血浆、肺组织匀浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中NO、ET-1和IL-8水平显著升高(P<0.01)，BALF内中性粒细胞(PMN)明显增多，肺系数(LPL)、肺水含量及通透指数均升高。血浆NO和IL-8浓度于静脉注射LPS后120 min达峰值，ET-1升高较早，60 min达峰值，随后衰减，致伤6 h，基本恢复接近正常水平。结论 NO、ET-1和IL-8是参与急性肺损伤不同时相的体液因子，三者共同参与ALI的发病。
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[中图分类号] R 563 [文献标识码] A [文章编号] 1002-1949(2000)10-0579-03
Research of changes of nitric oxide and endothelin-1 levels in lung and plasma with acute lung injury
XUE Yu-feng
(Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China)
ZHAO Ju-bin
(Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China)
, 百拇医药
ZHANG-Jie,et al
(Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China)
[Abstract] Objective To explore the changes of nitric oxide(NO) and endothelin-1(ET-1) levels and its potential functions in acute lung injury(ALI).Methods The rabbits model was induced by injecting E.Coli endotoxin twice at 24 hours interval.Results NO,ET-1 and interleukin-8(IL-8) levels in plasma,lung tissue and bronchoalveolar lavage fluid(BALF)increased markedly (P<0.01)in ALI group.WBC in BALF,lung index,and lung permeability index(LPI) also increased significantly (P<0.01).In ALI group,the plasma concentrations of all NO,ET-1 and IL-8,but their temporal dynamics were different.The increase of plasma NO and IL-8 concentration reach its peak at 120 min after endotoxin injection.While plasma ET-1 concentration increased much earlier,at 60 min post-endotoxin and its plasma concentration had reached its peak level,then waned,but restored that level approach to normal rabbit at 6 hours post-injury in lung.Conclusion NO，ET-1 and IL-8 might be an important liquit factor in different phases of ALI.All NO,ET-1 and IL-8 maybe involve in pathogenesis of ALI.
, 百拇医药
[Key words] Nitric oxide; Endothelin-1； Interleukin-8; Acute lung injury
一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮素(endothelin,ET)为作用相反的血管活性因子，分别舒、缩血管及抑制、增强心肌收缩力[1～3]。NO和ET与肺损伤的关系近年越来越引起人们的关注。革兰氏阴性菌感染是急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的最常见病因。我们用内毒素(LPS)复制了家兔急性肺损伤模型，观察NO、ET-1和IL-8(interleukin-8)水平的动态变化规律，初步探讨NO、ET-1和IL-8在家兔内毒素性急性肺损伤中的作用及其机理。
1 材料与方法
1.1 材料 冻干精制E.Coli O111B4，LPS(1 mg/支，上海生物制品研究所生产)，ET-1由北京东亚免疫技术研究所提供，NO试剂盒由南京建成生物研究所提供，IL-8检测盒为荷兰Amsterdam红十字输血机构产品，地塞米松(Dex)为湖北天门制药厂产品，DG-3022酶联检测仪、721单光束分光光度计均为国产。
, 百拇医药
1.2 方法
1.2.1 ALI动物模型复制 选用健康新西兰家兔24只，雌雄兼用，体重2.0～2.6 kg，随机分为3组，每组8只。NS组：经兔耳静脉0、12、24 h分别注射生理盐水(normal saline,NS) 5 ml/kg体重。LPS组：0、12、24 h分别静脉注射LPS 15 μg/kg，NS 5ml/kg,LPS 35 μg/kg。LPS+Dex组：LPS和NS给药方法和用药同LPS组，在注射NS同时，经静脉给予Dex 1 mg/kg体重。各组分别于注射LPS或NS前24 h及注射后不同时点(0、1、2、3、6 h)取血，作WBC计数，检测NO、ET-1和IL-8含量，最后一次采血完毕后放血活杀，行支气管肺泡灌洗，并检查WBC和PMN数目。取肺组织做光镜病理检查。
1.2.2 血WBC计数及分类 常规方法。
1.2.3 肺系数和肺水含量测定 动物处死后立即开胸取肺，称重，测左肺湿重/干重(W/D)比值。取右肺中叶1 g称湿重，置烤箱中干燥24 h(90℃)至干重恒定，测定肺水含量，肺系数(LPI)＝肺重(g)/体重(kg)×100，肺水含量＝(肺湿重-肺干重)×100/肺湿重。
, 百拇医药
1.2.4 支气管肺泡灌洗 以2 ml/g NS(4℃)灌洗左肺叶支气管肺泡，反复抽注5次，回收灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),3 000 r/min离心30 min，取上清液冻存备用。用甲紫染色计数吞噬细胞总数，瑞氏染色作细胞分类计数。肺通透指数(lung index,LI)＝血浆蛋白含量/BALF蛋白含量。
1.2.5 测定方法 ET-1测定：采用放射免疫法，取1 ml全血，加抑肽酶400 IU，10% EDTA二钠30 μl，抗凝，3 000 r/min(4℃)离心10 min,取血浆，-20℃保存，测定前室温复融，3 000 r/min离心5 min,取上清液，按ET-1放射免疫测定盒说明书操作。NO测定：硝酸还原酶显色法，因NO化学性质活泼，体内代谢转化为硝酸盐(NO-3)和亚硝酸盐(NO-2)，血清NO-3、NO-2浓度之和才能准确代表体内NO水平。采用硝酸还原酶特异性将NO-3还原为NO-2，通过显色深浅测定其浓度高低。IL-8采用双抗体夹心ELISA法，具体操作按说明书。Lowry法测定BALF和血浆蛋白含量。
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1.2.6 统计处理 实验数据以
±s表示，用t检验和方差分析测试均数差异显著性，并进行分析。
2 结果
2.1 外周血及BALF中WBC和PMN数目变化 两次注射LPS后2 h，血WBC总数和PMN数目均有所下降，此后持续回升。BALF中WBC、PMN和肺泡巨噬细胞(PAM)数目，在注射LPS后均比注射前增加(P<0.01)。LPS+Dex组WBC、PMN和PAM分别比LPS组下降，但高于NS组(P<0.05)。见表1。
表1 BALF中WBC、PMN和PAM的变化(±s,n=8) 分 组
WBC(×108/L)
, 百拇医药
PMN(×108/L)
PAM(×108/L)
蛋白含量(mg/L)
NS组
2.08±0.36
0.07±0.01
1.74±0.28
3.79±0.57
LPS组
4.82±0.51＃
1.83±0.41＃
, 百拇医药
2.73±0.69＃
8.25±1.03＃
LPS+Dex组
3.21±0.38＃
0.86±0.64＃
2.08±0.26＃
6.08±0.89＃
与NS组相比P<0.05；P<0.01；与LPS组相比＃P<0.05
2.2 家兔肺水肿参数变化 LPS组肺系数、肺水含量、肺通透指数和W/D比值均明显高于正常对照组(P<0.01)，而LPS+Dex组则低于LPS组，高于NS组(P<0.05)。见表2。表2 家兔肺水肿参数变化(±s,n=8) 分 组
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lung index
lung water(%)
LPI(×10-3)
W/D
NS组
0.46±0.04
74.29±0.61
4.08±0.22
4.89±0.26
LPS组
0.81±0.07＃
, 百拇医药
87.02±1.31＃
9.13±0.53＃
5.92±0.31＃
LPS+Dex组
0.68±0.05＃
79.36±0.45＃
6.81±0.37＃
5.37±0.43＃
与NS组相比P<0.05；P<0.01；与LPS组相比＃P<0.05
, 百拇医药
2.3 肺组织及BALF中NO、ET-1和IL-8水平变化(见表3、4) 肺组织和BALF中NO、ET-1及IL-8含量LPS组均明显高于NS组(P<0.01)，也显著高于LPS+Dex组(P<0.05)。表3 各组BALF中NO、ET-1和
IL-8水平的变化(±s,n=8) 分 组
NO(μmol/L)
ET-1(ng/L)
IL-8(ng/L)
NS组
6.38±0.61
274.29±79.71
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31.82±11.02
LPS组
14.01±1.89＃
580.02±91.38＃
1094.67±83.69＃
LPS+Dex组
9.21±0.91＃
420.19±65.36＃
358.32±49.61＃
与NS组相比P<0.05；P<0.01；与LPS组相比＃P<0.05表4 各组肺组织NO、ET-1和
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IL-8水平的变化(±s,n=8)
分 组
NO(μmol/L)
ET-1(ng/L)
IL-8(ng/L)
NS组
17.69±3.27
512.86±83.26
52.86±13.31
LPS组
74.81±12.49＃
, 百拇医药
1169.31±115.07＃
1218.25±129.24＃
LPS+Dex组
29.69±7.36＃
861.26±113.17＃
437.81±116.39＃
与NS组相比P<0.05；P<0.01；与LPS组相比＃P<0.05
2.4 不同时点血浆NO、ET-1和IL-8水平变化 见图1、2、3。
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图1 血浆NO水平变化
图2 血浆ET-1水平变化
图3 血浆IL-8水平变化
2.5 肺形态学改变 LPS致伤后肺组织肿胀，体积膨大，表面有散在点状血灶，切面有较多淡红色泡沫液体溢出。光镜下可见肺泡壁增厚，隔增宽，肺间质和肺泡水肿，PAM浸润，内皮细胞肿胀脱落，PMN扣押，肺泡完整性破坏，肺泡腔出血。LPS+Dex组上述变化较轻，微小血栓形成及灶性出血少见。
3 讨论
本实验采用间隔24 h静脉注射LPS诱导全身性Shwartzman反应，成功复制了家兔内毒素肺损伤模型。ALI主要表现为呼吸窘迫综合征(repiratory distress syndrome,RDS)[4]的发病机理，至今尚未完全阐明。IL-8是近年发现的一种强有力的PMN趋化和激活因子，该因子能在下呼吸道募集PMN，起着启动和加重炎症反应的作用[5]，并与RDS密切相关。实验发现，两次注射LPS后，外周血WBC和PMN增多，肺内大量PMN聚集、浸润，蛋白含量增加。正常BALF中细胞以PAM为主，PMN非常少，蛋白含量较低，当注射LPS后，导致微循环内白细胞贴壁、粘着，由于细胞活化释放大量活性氧、细胞因子等，造成血管内皮损伤，微血管病，PMN进入肺泡，蛋白含量增加。本实验LPS组中WBC、PMN、蛋白和IL-8含量均显著高于NS组，证明IL-8是参与急性肺损伤的主要趋化和激活因子。
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NO和ET-1是内皮细胞分泌的两种重要血管活性物质。ET-1为内源性强烈缩血管物质，参与脓毒血症、休克及肺损伤等发病过程[6] 。NO主要由NO合成酶(NOS)催化L-精氨酸产生，是内皮细胞衍生的重要舒血管物质。NO一方面通过舒张血管平滑肌，降低外周血管阻力，维持正常血压，减少血小板聚集，从而改善微循环；另一方面，NO合成释放过多，除引起血管过度扩张、血压下降、血流淤滞、组织利用氧减少、促发组织缺氧、休克、发生DIC[2]器官衰竭外，还引起过氧硝酸盐离子(ONOO-)和氢氧离子(OH-)的产生，后者对细胞有直接毒害作用。本研究显示，ALI时，肺组织、BALF和血浆ET-1及NO大量产生，加重了肺组织水肿、出血，肺组织结构受损，大量炎性细胞浸润，肺W/D比值增加，当给予Dex时，能抑制血浆和肺内NO和ET-1的产生，同时减轻肺组织水肿、出血等病理改变，表明肺内ET-1和NO含量改变可能是造成内毒素性肺损伤的因素之一。
本实验LPS组血浆、肺组织及BALF中IL-8和NO水平显著高于正常对照组，与肺组织损害程度一致，呈显著正相关，但血浆和肺组织ET-1浓度对ALI的影响尚未见文献报道。本研究结果显示，ALI时，血浆NO、ET-1和IL-8浓度均明显升高，但动态变化规律不同。当家兔体内二次注入LPS后，血浆ET-1浓度迅速升高，60 min达基础值两倍以上，而后回落，但高于基础水平。血浆NO和IL-8浓度于二次注入LPS后120 min升高最明显，此结果与Stuchr报道一致[7]。说明三者协同参与了内毒素性急性肺损伤。从实验结果反映肺损伤的各项指标都与NO、ET-1和IL-8含量密切相关，表明NO、ET-1和IL-8参与介导内毒素性急性肺损伤。
, 百拇医药
[参考文献]
[1]Palmer RMJ.The discovery of nitric oxide in vessel wall:a unifying concept in the pathogensis of sepsis[J].Arch Surg,1993,128:396-401.
[2]Moncads S,Palmer RMJ,Higgs EA.Nitric oxide:physiology pathophysiology and pharmacology[J].Pharmacol Rev,1991,43:109-113.
[3]Yanagisawa M,Kurihara H,Kimura S,et al.A novel potent vasoconstrictor peptide produce by vascular endothelial cells[J].Nature,1988,332:411-416.
, 百拇医药
[4]任世光，马兰，陈忻，等.内毒素促成呼吸窘迫综合征主要途径的实验研究[J].中国急救医学，1984，4(2)：5-7.
[5]Goodman RB,Forstrom JY,Osborn SG,et al.Identification of two neutropil chemotactic peptides produced by porcine alveolar macrophages[J].J Biol Chem,1991,266:8455-8460.
[6]于严，董林旺，汤健，等.内皮素和循环休克[M].见：汤健，唐朝枢.心肺内分泌学.北京：北京科学技术出版社，1991.178-180.
[7]Stuchr D,Mauletta MA.Mammalion nitrate biosynthesis:mouse macrophages produce nitrite and nitrate in response to Escherichia coli lipopolysacharide[J].Pro Natl Acad Sci USA,1985,82:7738-7742.
[收稿：1999-10-08], 百拇医药
单位：河北省医学科学院，石家庄 050021
关键词：一氧化氮；内皮素-1；白细胞介素8；急性肺损伤
中国急救医学001005 [摘 要] 目的 探讨急性肺损伤(ALI)时肺组织和血浆一氧化氮(NO)、 内皮素-1(ET-1)和白细胞介素8(IL-8)水平的变化和作用。方法 采用间隔24 h两次注射大肠杆菌内毒素(LPS)的方法，复制家兔内毒素性急性肺损伤模型。结果 ALI组血浆、肺组织匀浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中NO、ET-1和IL-8水平显著升高(P<0.01)，BALF内中性粒细胞(PMN)明显增多，肺系数(LPL)、肺水含量及通透指数均升高。血浆NO和IL-8浓度于静脉注射LPS后120 min达峰值，ET-1升高较早，60 min达峰值，随后衰减，致伤6 h，基本恢复接近正常水平。结论 NO、ET-1和IL-8是参与急性肺损伤不同时相的体液因子，三者共同参与ALI的发病。探讨急性肺损伤(ALI)时肺组织和血浆一氧化氮(NO)、 内皮素-1(ET-1)和白细胞介素8(IL-8)水平的变化和作用。方法 采用间隔24 h两次注射大肠杆菌内毒素(LPS)的方法，复制家兔内毒素性急性肺损伤模型。结果 ALI组血浆、肺组织匀浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中NO、ET-1和IL-8水平显著升高(P<0.01)，BALF内中性粒细胞(PMN)明显增多，肺系数(LPL)、肺水含量及通透指数均升高。血浆NO和IL-8浓度于静脉注射LPS后120 min达峰值，ET-1升高较早，60 min达峰值，随后衰减，致伤6 h，基本恢复接近正常水平。结论 NO、ET-1和IL-8是参与急性肺损伤不同时相的体液因子，三者共同参与ALI的发病。
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[中图分类号] R 563 [文献标识码] A [文章编号] 1002-1949(2000)10-0579-03
Research of changes of nitric oxide and endothelin-1 levels in lung and plasma with acute lung injury
XUE Yu-feng
(Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China)
ZHAO Ju-bin
(Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China)
, 百拇医药
ZHANG-Jie,et al
(Hebei Academy of Medical Sciences,Shijiazhuang 050021,China)
[Abstract] Objective To explore the changes of nitric oxide(NO) and endothelin-1(ET-1) levels and its potential functions in acute lung injury(ALI).Methods The rabbits model was induced by injecting E.Coli endotoxin twice at 24 hours interval.Results NO,ET-1 and interleukin-8(IL-8) levels in plasma,lung tissue and bronchoalveolar lavage fluid(BALF)increased markedly (P<0.01)in ALI group.WBC in BALF,lung index,and lung permeability index(LPI) also increased significantly (P<0.01).In ALI group,the plasma concentrations of all NO,ET-1 and IL-8,but their temporal dynamics were different.The increase of plasma NO and IL-8 concentration reach its peak at 120 min after endotoxin injection.While plasma ET-1 concentration increased much earlier,at 60 min post-endotoxin and its plasma concentration had reached its peak level,then waned,but restored that level approach to normal rabbit at 6 hours post-injury in lung.Conclusion NO，ET-1 and IL-8 might be an important liquit factor in different phases of ALI.All NO,ET-1 and IL-8 maybe involve in pathogenesis of ALI.
, 百拇医药
[Key words] Nitric oxide; Endothelin-1； Interleukin-8; Acute lung injury
一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮素(endothelin,ET)为作用相反的血管活性因子，分别舒、缩血管及抑制、增强心肌收缩力[1～3]。NO和ET与肺损伤的关系近年越来越引起人们的关注。革兰氏阴性菌感染是急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的最常见病因。我们用内毒素(LPS)复制了家兔急性肺损伤模型，观察NO、ET-1和IL-8(interleukin-8)水平的动态变化规律，初步探讨NO、ET-1和IL-8在家兔内毒素性急性肺损伤中的作用及其机理。
1 材料与方法
1.1 材料 冻干精制E.Coli O111B4，LPS(1 mg/支，上海生物制品研究所生产)，ET-1由北京东亚免疫技术研究所提供，NO试剂盒由南京建成生物研究所提供，IL-8检测盒为荷兰Amsterdam红十字输血机构产品，地塞米松(Dex)为湖北天门制药厂产品，DG-3022酶联检测仪、721单光束分光光度计均为国产。
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1.2 方法
1.2.1 ALI动物模型复制 选用健康新西兰家兔24只，雌雄兼用，体重2.0～2.6 kg，随机分为3组，每组8只。NS组：经兔耳静脉0、12、24 h分别注射生理盐水(normal saline,NS) 5 ml/kg体重。LPS组：0、12、24 h分别静脉注射LPS 15 μg/kg，NS 5ml/kg,LPS 35 μg/kg。LPS+Dex组：LPS和NS给药方法和用药同LPS组，在注射NS同时，经静脉给予Dex 1 mg/kg体重。各组分别于注射LPS或NS前24 h及注射后不同时点(0、1、2、3、6 h)取血，作WBC计数，检测NO、ET-1和IL-8含量，最后一次采血完毕后放血活杀，行支气管肺泡灌洗，并检查WBC和PMN数目。取肺组织做光镜病理检查。
1.2.2 血WBC计数及分类 常规方法。
1.2.3 肺系数和肺水含量测定 动物处死后立即开胸取肺，称重，测左肺湿重/干重(W/D)比值。取右肺中叶1 g称湿重，置烤箱中干燥24 h(90℃)至干重恒定，测定肺水含量，肺系数(LPI)＝肺重(g)/体重(kg)×100，肺水含量＝(肺湿重-肺干重)×100/肺湿重。
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1.2.4 支气管肺泡灌洗 以2 ml/g NS(4℃)灌洗左肺叶支气管肺泡，反复抽注5次，回收灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF),3 000 r/min离心30 min，取上清液冻存备用。用甲紫染色计数吞噬细胞总数，瑞氏染色作细胞分类计数。肺通透指数(lung index,LI)＝血浆蛋白含量/BALF蛋白含量。
1.2.5 测定方法 ET-1测定：采用放射免疫法，取1 ml全血，加抑肽酶400 IU，10% EDTA二钠30 μl，抗凝，3 000 r/min(4℃)离心10 min,取血浆，-20℃保存，测定前室温复融，3 000 r/min离心5 min,取上清液，按ET-1放射免疫测定盒说明书操作。NO测定：硝酸还原酶显色法，因NO化学性质活泼，体内代谢转化为硝酸盐(NO-3)和亚硝酸盐(NO-2)，血清NO-3、NO-2浓度之和才能准确代表体内NO水平。采用硝酸还原酶特异性将NO-3还原为NO-2，通过显色深浅测定其浓度高低。IL-8采用双抗体夹心ELISA法，具体操作按说明书。Lowry法测定BALF和血浆蛋白含量。
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1.2.6 统计处理 实验数据以
±s表示，用t检验和方差分析测试均数差异显著性，并进行分析。2 结果
2.1 外周血及BALF中WBC和PMN数目变化 两次注射LPS后2 h，血WBC总数和PMN数目均有所下降，此后持续回升。BALF中WBC、PMN和肺泡巨噬细胞(PAM)数目，在注射LPS后均比注射前增加(P<0.01)。LPS+Dex组WBC、PMN和PAM分别比LPS组下降，但高于NS组(P<0.05)。见表1。
表1 BALF中WBC、PMN和PAM的变化(
±s,n=8) 分 组WBC(×108/L)
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PMN(×108/L)
PAM(×108/L)
蛋白含量(mg/L)
NS组
2.08±0.36
0.07±0.01
1.74±0.28
3.79±0.57
LPS组
4.82±0.51＃
1.83±0.41＃
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2.73±0.69＃
8.25±1.03＃
LPS+Dex组
3.21±0.38＃
0.86±0.64＃
2.08±0.26＃
6.08±0.89＃
与NS组相比P<0.05；P<0.01；与LPS组相比＃P<0.05
2.2 家兔肺水肿参数变化 LPS组肺系数、肺水含量、肺通透指数和W/D比值均明显高于正常对照组(P<0.01)，而LPS+Dex组则低于LPS组，高于NS组(P<0.05)。见表2。表2 家兔肺水肿参数变化(
±s,n=8) 分 组, http://www.100md.com
lung index
lung water(%)
LPI(×10-3)
W/D
NS组
0.46±0.04
74.29±0.61
4.08±0.22
4.89±0.26
LPS组
0.81±0.07＃
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87.02±1.31＃
9.13±0.53＃
5.92±0.31＃
LPS+Dex组
0.68±0.05＃
79.36±0.45＃
6.81±0.37＃
5.37±0.43＃
与NS组相比P<0.05；P<0.01；与LPS组相比＃P<0.05
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2.3 肺组织及BALF中NO、ET-1和IL-8水平变化(见表3、4) 肺组织和BALF中NO、ET-1及IL-8含量LPS组均明显高于NS组(P<0.01)，也显著高于LPS+Dex组(P<0.05)。表3 各组BALF中NO、ET-1和
IL-8水平的变化(
±s,n=8) 分 组NO(μmol/L)
ET-1(ng/L)
IL-8(ng/L)
NS组
6.38±0.61
274.29±79.71
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31.82±11.02
LPS组
14.01±1.89＃
580.02±91.38＃
1094.67±83.69＃
LPS+Dex组
9.21±0.91＃
420.19±65.36＃
358.32±49.61＃
与NS组相比P<0.05；P<0.01；与LPS组相比＃P<0.05表4 各组肺组织NO、ET-1和
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IL-8水平的变化(
±s,n=8)分 组
NO(μmol/L)
ET-1(ng/L)
IL-8(ng/L)
NS组
17.69±3.27
512.86±83.26
52.86±13.31
LPS组
74.81±12.49＃
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1169.31±115.07＃
1218.25±129.24＃
LPS+Dex组
29.69±7.36＃
861.26±113.17＃
437.81±116.39＃
与NS组相比P<0.05；P<0.01；与LPS组相比＃P<0.05
2.4 不同时点血浆NO、ET-1和IL-8水平变化 见图1、2、3。
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图1 血浆NO水平变化
图2 血浆ET-1水平变化
图3 血浆IL-8水平变化
2.5 肺形态学改变 LPS致伤后肺组织肿胀，体积膨大，表面有散在点状血灶，切面有较多淡红色泡沫液体溢出。光镜下可见肺泡壁增厚，隔增宽，肺间质和肺泡水肿，PAM浸润，内皮细胞肿胀脱落，PMN扣押，肺泡完整性破坏，肺泡腔出血。LPS+Dex组上述变化较轻，微小血栓形成及灶性出血少见。
3 讨论
本实验采用间隔24 h静脉注射LPS诱导全身性Shwartzman反应，成功复制了家兔内毒素肺损伤模型。ALI主要表现为呼吸窘迫综合征(repiratory distress syndrome,RDS)[4]的发病机理，至今尚未完全阐明。IL-8是近年发现的一种强有力的PMN趋化和激活因子，该因子能在下呼吸道募集PMN，起着启动和加重炎症反应的作用[5]，并与RDS密切相关。实验发现，两次注射LPS后，外周血WBC和PMN增多，肺内大量PMN聚集、浸润，蛋白含量增加。正常BALF中细胞以PAM为主，PMN非常少，蛋白含量较低，当注射LPS后，导致微循环内白细胞贴壁、粘着，由于细胞活化释放大量活性氧、细胞因子等，造成血管内皮损伤，微血管病，PMN进入肺泡，蛋白含量增加。本实验LPS组中WBC、PMN、蛋白和IL-8含量均显著高于NS组，证明IL-8是参与急性肺损伤的主要趋化和激活因子。
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NO和ET-1是内皮细胞分泌的两种重要血管活性物质。ET-1为内源性强烈缩血管物质，参与脓毒血症、休克及肺损伤等发病过程[6] 。NO主要由NO合成酶(NOS)催化L-精氨酸产生，是内皮细胞衍生的重要舒血管物质。NO一方面通过舒张血管平滑肌，降低外周血管阻力，维持正常血压，减少血小板聚集，从而改善微循环；另一方面，NO合成释放过多，除引起血管过度扩张、血压下降、血流淤滞、组织利用氧减少、促发组织缺氧、休克、发生DIC[2]器官衰竭外，还引起过氧硝酸盐离子(ONOO-)和氢氧离子(OH-)的产生，后者对细胞有直接毒害作用。本研究显示，ALI时，肺组织、BALF和血浆ET-1及NO大量产生，加重了肺组织水肿、出血，肺组织结构受损，大量炎性细胞浸润，肺W/D比值增加，当给予Dex时，能抑制血浆和肺内NO和ET-1的产生，同时减轻肺组织水肿、出血等病理改变，表明肺内ET-1和NO含量改变可能是造成内毒素性肺损伤的因素之一。
本实验LPS组血浆、肺组织及BALF中IL-8和NO水平显著高于正常对照组，与肺组织损害程度一致，呈显著正相关，但血浆和肺组织ET-1浓度对ALI的影响尚未见文献报道。本研究结果显示，ALI时，血浆NO、ET-1和IL-8浓度均明显升高，但动态变化规律不同。当家兔体内二次注入LPS后，血浆ET-1浓度迅速升高，60 min达基础值两倍以上，而后回落，但高于基础水平。血浆NO和IL-8浓度于二次注入LPS后120 min升高最明显，此结果与Stuchr报道一致[7]。说明三者协同参与了内毒素性急性肺损伤。从实验结果反映肺损伤的各项指标都与NO、ET-1和IL-8含量密切相关，表明NO、ET-1和IL-8参与介导内毒素性急性肺损伤。
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[收稿：1999-10-08], 百拇医药