痂下水肿液对体外巨噬细胞的激活作用
作者：陈静 任加良 周一平
单位：第一军医大学南方医院烧伤科 510515
关键词：
广东医学001154 痂下水肿液(subeschar tissue fluid, STF)被称为“生物活性库”，含有高于血浆水平的内毒素、TNF-α等活性物质[1]。临床上，烧伤患者在水肿液吸收阶段常出现体温升高、心率呼吸增快等全身性炎症反应表现。为阐明STF与机体免疫系统的关系，我们观测了STF对体外培养巨噬细
表1 STF及HHS对巨噬细胞活性与TNF-α及IL-1的影响
±s 组 别
n
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细胞活性(A值)
TNF-α(pg/ml)
IL-1(A值)
STF组
6
622.5±75.5
145.15±22.91
0.790±0.044
HHS组
6
436.2±73.8
, http://www.100md.com
76.55±9.72
0.632±0.125
空白组
6
428.4±65.6
67.75±1.89
0.649±0.063
与HHS值及空白组比较 P<0.01胞的作用。1 资料与方法
1.1 一般资料 严重烧伤患者6例，其中男性3例，女性3例；平均年龄(37±4.6)岁。烧伤总面积50%～90%，其中深Ⅱ～Ⅲ度占30%～65%。伤后2～5 d手术切痂时无菌收集STF，按比例混合后置-80℃保存备用。同时取6例健康志愿者外周血血清(HHS)按比例混合作正常对照。
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1.2 实验分组 分实验组(混合STF)、对照组(混合HHS)及空白组(生理盐水)，每组各6只Wistar大鼠(体重200～250 g，第一军医大学实验动物中心提供)，分别提取腹腔巨噬细胞。
1.3 腹腔巨噬细胞活性的测定 提取腹腔巨噬细胞后接种在96孔培养板上，2小时后贴壁，弃原培养液，分别加入含20%STF、HHS或生理盐水的RPMI 1640完全培养液，100 μl/孔，每样本做2个平行孔，继续培养48 h后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测细胞活性(A值)。
1.4 腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1能力的测定 巨噬细胞提取后接种在24孔培养板(NUNC公司)上，1 ml/孔，2 h贴壁后，弃原培养液，分别加入含20%STF、HHS或生理盐水的RPMI 1640培养液，培养12 h，收集上清液，测TNF-α含量[利用ELISA试剂盒(军事医学科学院)]；同样方法培养48 h，收集上清液，测IL-1活性。IL-1活性检测，参照文献[2]加以改进，以BalB/c小鼠(8～10周龄，第一军医大学实验动物中心)胸腺细胞受IL-1样本刺激后细胞活性的变化(MTT法检测的A值)来表示IL-1的相对活性。
, http://www.100md.com
1.5 统计学处理 结果以AVOVA法在微机上处理，数据均表示为±s。
2 结果
与SFT共同培养后，巨噬细胞活性增高；分泌TNF-α和IL-1的能力增强。而HHS对巨噬细胞的活性与分泌TNF-α及IL-1的能力无显著性影响。见表1。
3 讨论
我们通过观测了STF对腹腔巨噬细胞活性与分泌TNF-α及IL-1能力的影响，发现STF可增强巨噬细胞的活性，说明STF对激活巨噬细胞具有一定作用。TNF-α及IL-1是巨噬细胞体现其炎症细胞作用的两种重要细胞因子，也是全身性炎症反应综合征的主要参与者。TNF-α是单核细胞受刺激产生最早的细胞因子之一，可促进巨噬细胞合成、释放包括其自身在内许多细胞因子，如IL-1，IL-6，IL-8，PAF等，构成SIRS中瀑布式炎症反应的重要机制。TNF-α作用广泛，对组织细胞，尤其内皮细胞具有直接毒性，可加重组织缺氧，TNF-α可作为内生性致热原导致机体发热。IL-1是巨噬细胞分泌的另一重要单核因子，可引起机体的急性期反应(如发热、WBC增多、急性蛋白合成等)和器官损伤，也是SIRS发生和发展的重要参与者。我们在另一实验中已经证实，STF攻击动物可诱发SIRS的发生[3]。所以，STF对体外巨噬细胞作用的发现，有助于理解STF诱导SIRS的机制。
, 百拇医药
STF增强巨噬细胞分泌TNF-α及IL-1能力与STF中高水平内毒素和TNF-α有关，因二者均是TNF-α及IL-1合成、分泌的强有力刺激物。关于内毒素促进TNF-α分泌所需的时间，根据Clancy等报道[4]，内毒素在1 h内即可促进机体产生TNF，从而发挥TNF在炎症反应中的重要作用。这与另文中STF诱导SIRS所需时间相一致[3]。
本实验以HHS为正常对照，以排除STF中含有的血浆样物质对实验的可能影响。结果表明，HHS组与空白组(生理盐水)差异无显著性，进一步说明STF对巨噬细胞的影响与其含有多种活性物质有关[1]。
参考文献
1，李志清，周一平，任加良，等.豚鼠烧伤后痂下水肿液和血浆中TNF-α、IL-6和IL-8变化. 中华整形烧伤外科杂志，1999，15(2)：158
, 百拇医药
2，尚红生，丁桂凤，邓玉兰，等. P388D1传代细胞株产生IL-1效应的初步探讨. 中国免疫学杂志，1988，4(1)：9
3，Chen J, Zhou YP, Rong XZ. An experimental study on systemic inflammatory response syndrome induced by subeschar tissue fluid. BURNS, 2000, 26:149
4，Clancy KD, Lorenz K, Hahn E, et al. Down-regulation of tissue specific TNF-α in the liver and lung after burn injury and endotoxemia. J Trauma, 1997,42(2):169
(收稿日期：2000-04-24), 百拇医药
单位：第一军医大学南方医院烧伤科 510515
关键词：
广东医学001154 痂下水肿液(subeschar tissue fluid, STF)被称为“生物活性库”，含有高于血浆水平的内毒素、TNF-α等活性物质[1]。临床上，烧伤患者在水肿液吸收阶段常出现体温升高、心率呼吸增快等全身性炎症反应表现。为阐明STF与机体免疫系统的关系，我们观测了STF对体外培养巨噬细
表1 STF及HHS对巨噬细胞活性与TNF-α及IL-1的影响
±s 组 别n
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细胞活性(A值)
TNF-α(pg/ml)
IL-1(A值)
STF组
6
622.5±75.5
145.15±22.91
0.790±0.044
HHS组
6
436.2±73.8
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76.55±9.72
0.632±0.125
空白组
6
428.4±65.6
67.75±1.89
0.649±0.063
与HHS值及空白组比较 P<0.01胞的作用。1 资料与方法
1.1 一般资料 严重烧伤患者6例，其中男性3例，女性3例；平均年龄(37±4.6)岁。烧伤总面积50%～90%，其中深Ⅱ～Ⅲ度占30%～65%。伤后2～5 d手术切痂时无菌收集STF，按比例混合后置-80℃保存备用。同时取6例健康志愿者外周血血清(HHS)按比例混合作正常对照。
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1.2 实验分组 分实验组(混合STF)、对照组(混合HHS)及空白组(生理盐水)，每组各6只Wistar大鼠(体重200～250 g，第一军医大学实验动物中心提供)，分别提取腹腔巨噬细胞。
1.3 腹腔巨噬细胞活性的测定 提取腹腔巨噬细胞后接种在96孔培养板上，2小时后贴壁，弃原培养液，分别加入含20%STF、HHS或生理盐水的RPMI 1640完全培养液，100 μl/孔，每样本做2个平行孔，继续培养48 h后以四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测细胞活性(A值)。
1.4 腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1能力的测定 巨噬细胞提取后接种在24孔培养板(NUNC公司)上，1 ml/孔，2 h贴壁后，弃原培养液，分别加入含20%STF、HHS或生理盐水的RPMI 1640培养液，培养12 h，收集上清液，测TNF-α含量[利用ELISA试剂盒(军事医学科学院)]；同样方法培养48 h，收集上清液，测IL-1活性。IL-1活性检测，参照文献[2]加以改进，以BalB/c小鼠(8～10周龄，第一军医大学实验动物中心)胸腺细胞受IL-1样本刺激后细胞活性的变化(MTT法检测的A值)来表示IL-1的相对活性。
, http://www.100md.com
1.5 统计学处理 结果以AVOVA法在微机上处理，数据均表示为
±s。2 结果
与SFT共同培养后，巨噬细胞活性增高；分泌TNF-α和IL-1的能力增强。而HHS对巨噬细胞的活性与分泌TNF-α及IL-1的能力无显著性影响。见表1。
3 讨论
我们通过观测了STF对腹腔巨噬细胞活性与分泌TNF-α及IL-1能力的影响，发现STF可增强巨噬细胞的活性，说明STF对激活巨噬细胞具有一定作用。TNF-α及IL-1是巨噬细胞体现其炎症细胞作用的两种重要细胞因子，也是全身性炎症反应综合征的主要参与者。TNF-α是单核细胞受刺激产生最早的细胞因子之一，可促进巨噬细胞合成、释放包括其自身在内许多细胞因子，如IL-1，IL-6，IL-8，PAF等，构成SIRS中瀑布式炎症反应的重要机制。TNF-α作用广泛，对组织细胞，尤其内皮细胞具有直接毒性，可加重组织缺氧，TNF-α可作为内生性致热原导致机体发热。IL-1是巨噬细胞分泌的另一重要单核因子，可引起机体的急性期反应(如发热、WBC增多、急性蛋白合成等)和器官损伤，也是SIRS发生和发展的重要参与者。我们在另一实验中已经证实，STF攻击动物可诱发SIRS的发生[3]。所以，STF对体外巨噬细胞作用的发现，有助于理解STF诱导SIRS的机制。
, 百拇医药
STF增强巨噬细胞分泌TNF-α及IL-1能力与STF中高水平内毒素和TNF-α有关，因二者均是TNF-α及IL-1合成、分泌的强有力刺激物。关于内毒素促进TNF-α分泌所需的时间，根据Clancy等报道[4]，内毒素在1 h内即可促进机体产生TNF，从而发挥TNF在炎症反应中的重要作用。这与另文中STF诱导SIRS所需时间相一致[3]。
本实验以HHS为正常对照，以排除STF中含有的血浆样物质对实验的可能影响。结果表明，HHS组与空白组(生理盐水)差异无显著性，进一步说明STF对巨噬细胞的影响与其含有多种活性物质有关[1]。
参考文献
1，李志清，周一平，任加良，等.豚鼠烧伤后痂下水肿液和血浆中TNF-α、IL-6和IL-8变化. 中华整形烧伤外科杂志，1999，15(2)：158
, 百拇医药
2，尚红生，丁桂凤，邓玉兰，等. P388D1传代细胞株产生IL-1效应的初步探讨. 中国免疫学杂志，1988，4(1)：9
3，Chen J, Zhou YP, Rong XZ. An experimental study on systemic inflammatory response syndrome induced by subeschar tissue fluid. BURNS, 2000, 26:149
4，Clancy KD, Lorenz K, Hahn E, et al. Down-regulation of tissue specific TNF-α in the liver and lung after burn injury and endotoxemia. J Trauma, 1997,42(2):169
(收稿日期：2000-04-24), 百拇医药