前炎症细胞因子诱导人胸膜细胞释放纤溶酶原激活物抑制剂-1的研究
作者：闵锐 李淑云 王虹 张劲松 王彤
单位：南京医科大学第一附属医院呼吸内科210029
关键词：胸膜；间皮细胞；细胞因子；Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂
江苏医药001206 【摘要】 目的 研究前炎症细胞因子对人胸膜间皮细胞(HPMC)释放纤溶酶原激活物 抑制剂(PAI-1)的诱导效应。方法 渗出性胸膜腔积液的6份原代 HPMC置于DMEM/F12培养液中体外孵育，观察前炎症细胞因子白细胞介素-1β (IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对HPMC纤溶活动的影响。对分离的 HPMC纯度进行光镜下细胞学形态、电镜下超微结构和免疫组化染色的鉴定，加入IL- 1β或TNF-α诱导培养第三代HPMC 24小时后对HPMC培养液中PAI-1活 性 采用底物显色法进行测定。结果 与对照组相比，下列三种浓度水平的I L-1β或TNF-α诱导培养24 小时后均能显著增加HPMC培养液中的PAI-1活性，即0.2μg/L(IL-1β ：q＝3.76，P<0.05；TNF-α：q＝4.91，P<0. 01)，2.0μg/L(IL-1β：q＝10.72，P<0.01；TNF -α：q＝14.49，P<0.01) and 20μg/L(IL-1β： q＝22.81，P<0.01；TNF-α：q＝23.47，P<0.0 1)，而IL-1β和TNF-α对HPMC的诱导效应之间没有显著性差异。 结论 前炎症细胞因子在体内可能调节着HPMC释放PAI-1，由此影响着纤 维蛋白在胸膜腔内的沉积而向纤维化发展。
, http://www.100md.com
Proinflammatory cytokine-induced release of plasminogen activator inhibitor-1 by human pleural mesothelial cells
MIN Rui，LI Shuyun，WANG Hong，et al.
(Departme nt of Pulmonology，The First Affiliated H ospital of Nanjing Medical University，Na njing 210029)
【Abstract】 Objective To investigate effects of two proinflamm atory cytokines on the production of pla sminogen activator inhibitor-1(PAI-1) by human pleural mesothelial cells(HPMC).[ WTHZ〗Methods Six primary cultures of H PMC isolated from patients with exudativ e pleural effusions were incubated in DM EM/F12 medium to examine the effect of i nterleukin-1β(IL-1β) or tumor necrosis f actor-α(TNF-α) on the fibrinolytic prope rties of HPMC in vitro.The purity of the cell population was assessed by morphol ogic，ultrastuctural and immunohistochemi cal characteristics.PAI-1 activity in th e conditioned media of third passage HPM C was detected using chromogenic substra te method.Results Compared with controls，PAI-1 activity in the cond itioned media of HPMC was significantly increased by stimulation with IL-1β or T NF-α for 24 hours at the level of 0.2μg/ L(IL-1β：q＝3.76，P<0.05；TNF-α：q＝4.91 ，P<0.0 1)，2.0μg/L(IL-1β：q＝10.72，P<0.01；TNF- α：q＝ 14.49，P<0.01) and 20μg/L(IL-1β：q＝22. 81，P< 0.01；TNF-α：q＝23.47，P<0.01)，but there wa s no significant difference between resp onses to IL-1β and TNF-α.Conclusion The results suggest that proinflamm atory cytokines mediate the release of P AI-1 by HPMC in vivo，and so may affect t he deposition of fibrin within the pleur al cavity and favor fibrogenesis.
, 百拇医药
【Key words】 Pleura Mesothelial cells Cytokines Plasminogen activator in hibitor-1
目前针对腹膜间皮细胞的研究在方法和观点上趋于成熟，已证 实前炎症细胞因子脂多糖(L PS)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可诱导腹膜 间 皮细胞合成PAI-1[1～3]，鉴于胸膜和腹膜在组织学上均系间皮细胞，起源 于中胚 层体腔膜，所以具有借鉴意义，为此我们分离培养了人胸膜间皮细胞(HPMC)，并对细 胞因子诱导HPMC释放PAI-1效应进行研究。
材料和方法
一、研究对象
胸膜腔积液标本取自我院呼吸科住院以及门诊14例胸膜腔积液患 者，经HPMC细胞纯度鉴定有6例胸膜腔积液标本达到实验要求。
, 百拇医药
二、主要试剂
DMEM/F12细胞培养液(Hyclone公司)；转铁蛋白(Sig ma公司)；新生牛血清(杭州四季清生物研究所)；胰蛋白酶(Sigma公司)；重组 人细胞因子IL-1β、TNF-α(Promega公司)；抗细胞角蛋白、抗波形蛋白 、抗第Ⅷ因子相关抗原和抗CD45抗原的鼠抗人单克隆抗体(DAKO公司)；ABC kit(DAKO公司)；PAI-1活性测定试剂盒(上海医科大学分子学遗传室)。[ JP〗
三、方法
1.HPMC的分离和体外培养：在无菌条件下经胸穿分别抽取胸膜腔积液200～300m l，分离HPMC后加入DMEM/F12培养液(内含青霉素100KU/L，转铁蛋白 0.5mg/L，胰岛素10U/L，15%新生牛血清等)，以1×104/ml细胞 浓度接种于培养瓶内，置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。
, 百拇医药
2.HPMC细胞纯度的鉴定：(1)细胞学形态观察：使用盖片细胞培养技术将第二代HP MC进行苏木素-伊红(HE)染色后于光镜下观察。(2)细胞表面标志鉴定：以卵白素 -生物素-过氧化物酶复合法(ABC)分别用抗细胞角蛋白、抗第Ⅷ因子相关抗原和抗C D45抗原的鼠抗人单克隆抗体做免疫细胞化学染色。(3)细胞超微结构观察：透射电 子显微镜观察时先取足量HPMC细胞悬液，离心后戊二醛固定，经醋酸铀染色、丙酮梯度 脱水、包埋后超薄切片，上支持膜电镜观察；扫描电子显微镜时先用盖片培养技术将HPM C分别经戊二醛和四氧化锇固定、丙酮/醋酸异戊脂脱水、临界点干燥、喷金后电镜观察 。
3.PAI-1活性检测：将第二代培养的HPMC用胰蛋白酶消化，用不含新生牛血清的D MEM/F12将第三代HPMC调成浓度为2×105/ml细胞悬液，在96孔细胞 培 养板中每孔加100μl，同时分别加入细胞因子IL-1β或TNF-α，使其终浓度分 别为A组0.02μg/L、B组0.2μg/L、C组2.0μg/L、D组20.0μ g/L，并设空白对照组，孵育24小时后吸取上清，参照张欣平等[4]的方法使用PAI-1活性测定试剂盒检测其中PAI-1活性。
, 百拇医药
四、统计学处理
实验数据以
±s表示，采用多组资料方差分析(ANOVA)F检验， 若有组间差异进行两样本均数间q检验(Newman-Keuls法)，P<0 .05时有统计显著差异。
结果
一、HPMC纯度鉴定
在相差显微镜下可见贴壁生长的HPMC为单层扁平细胞，呈多边 形；HPMC经HE染色后为胞浆薄染成淡粉红色、中央为一深蓝色扁圆形核；HPMC经 免疫细胞化学染色后为抗细胞角蛋白和抗波形蛋白阳性，抗第Ⅷ因子相关抗原和抗CD45 抗原阴性；在透射电子显微镜下可见HPMC细胞表面有微绒毛，细胞内有丰富的细胞浆囊 泡以及分化成熟的内质网、线粒体；在扫描电子显微镜下可见HPMC表面大量微绒毛密集 排列成丛状。
, 百拇医药
二、HPMC经不同浓度细胞因子诱导培养24小时后培养液中PAI-1活性变化
采用 直线回归法得出标准曲线方程为Y＝0.899-0.145X，r＝-0.996。 实验 结果显示：①细胞因子浓度为0.20μg/L组、2.0μg/L组与20.0μg/ L组均可使HPMC释放PAI-1显著增加，而0.02μg/L组没有这一显著效应(F＝0.11，P>0.05)；②q检验显示IL-1β和TNF-α对 HPMC的诱 导效应之间没有显著性差异(见表1，表2)。
表1 HPMC经不同浓度细胞因子诱导24h后培养液中PAI- 1活性变化(U/ml，±s)△*
0.02μg/L组
0.20μg/L组
, 百拇医药
2.0μg/L组
20.0μg/L组
对照
IL-1β
TNF-α
对照
IL-1β
TNF-α
对照
IL-1β
TNF-α
对照
IL-1β
, 百拇医药
TNF-α
PAI-1
活性
1.91
±0.76
2.01
±0.62
2.37
±0.92
2.33
±1.18
3.55
±0.42
, http://www.100md.com
3.92
±0.56
2.56
±0.44
9.07
±2.46
11.36
±0.6 1
2.60
±0.27
10.62
±1.35
10.85
, 百拇医药
±0.63
F值
0.11
6.57
56.50
178.65
P值
P>0.05
P<0.01
P <0.01
P<0.01
注：△每组为6例标本的第三代HPMC实验数据；*PAI-1活性 单位U/ml即在25℃，20min内抑制1.0国际单位t-PA活性的量表2 各组间均数q检验值
, 百拇医药
0.2μg/L组
2.0μg/L组
20.0μg/L组
IL-1β
TNF-α
IL-1β
TNF-α
IL-1β
TNF-α
对照
3.76*
4.91**
, http://www.100md.com
10.72**
14.49**
22.81**
23.47**
IL-1β
1.14
3.77
0.65
注：*P<0.05 **P<0.01讨论
不少全身性或肺部疾病会波及胸膜，如肺结核、细菌性肺炎、石棉肺、风湿性关节 炎、部分恶性肿瘤等，导致胸膜发生炎症反应和病理损伤，HPMC作为胸膜的主要细胞群体势必受到影响。国外晚近研究表明HPMC其作用不仅 仅 是超滤胸膜腔积液和作为分子转运的屏障，而且主动参与胸膜腔的抗感染和免疫应答反应[5]。对胸膜纤维化机制进行研究的临床意义主要在两个方面：(1)首先是在感 染 性胸膜炎，如肺炎旁渗出液(PPE)、脓胸、结核性胸膜炎等，在使用有效抗生素和充分 引流后仍不能完全避免胸膜的粘连、纤维化和胸膜增厚，重者可能形成纤维胸，导致肺膨胀 受限、呼吸功能减退。此外，在结核性胸膜炎的治疗方案上，目前国外已有学者否定在化疗 基础上 加用糖皮质类固醇激素防治胸膜粘连、纤维化的传统观点[6]，所以在感染性胸膜 炎如何 进一步防治胸膜粘连、纤维化可能面临寻求新的突破口。(2)对恶性胸膜腔积液(MPE )、反复自发性气胸施行的胸膜粘连术，是一种人为形成的胸膜粘连、纤维化，却有积极的 临床意义，如遏止MPE无限增加或气胸反复发生、减轻MPE的呼吸压迫症状和避免蛋白 大量丢失。虽然胸膜粘连术已积累大量临床经验，但对其治疗机制上的认识仍不统一。总之 ，亟待对胸膜纤维化机制进行深入研究，有助于临床治疗按病情需要选择抑制或促进胸膜纤 维化进程。
, http://www.100md.com
PAI是组织型纤溶酶原激活物(t-PA)与尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)的特 异性快速抑制剂。t-PA与u-PA主要生理功能是催化纤溶酶原转变为纤溶酶，后者可 水解血栓或渗出于组织内的纤维蛋白(原)。PAI-1是血浆和组织中主要的PAI，作 用远强于PAI-2，在纤溶系统中起着关键作用，以此调控着纤维蛋白在胸膜腔和腹膜腔 的沉积。在渗出性胸膜腔积液中PAI-1含量是血浆中的80～4000倍，PAI-1 可能来自毛细血管炎性渗出或胸膜腔内细胞的合成[7]。采用免疫细胞化学技术与 分子杂 交技术已证实PAI-1分布于成纤维细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞，Ide ll等[8]采用Northern Blot印迹法观察到体外培养的HPMC能 合成PAI- 1和PAI-2，这一过程可被放线菌素与环乙酰胺所阻断，作者认为鉴于HPMC能大量 合成和释放PAI-1，可能是胸膜腔积液中高水平PAI-1的主要来源。
HPMC对胸膜腔积液纤溶/促凝平衡的调控作用日益受到关注，改变了一些临床观念，如 过去认为损伤胸膜是取得良好胸膜粘连术疗效的先决条件，所以临床采用机械性摩擦胸膜或 胸膜部分切除术的办法，确实有一定的效果。而晚近认为在胸膜粘连术中虽然一些炎症细胞 (如嗜中性粒细胞、单核巨噬细胞、成纤维细胞)作用必不可少，但是纤维过程级联反应 的主要启动者是HPMC，越来越多的证据显示HPMC调控着胸膜腔积液纤溶/促凝水平 ，这意味着为获得最佳粘连术效果粘连剂应尽可能分布至最大面积的HPMC膜表面，如果 膜表面被肿瘤细胞、纤维蛋白所遮盖，或者处于低糖、低pH等环境，胸膜粘连术疗效将显 著降低[9]。
, 百拇医药
在本实验中我们观察到前炎症细胞因子TNF-α的诱导作用，而且观察和比较IL-1β 和TNF-α的诱导作用，与Tietze等[5]对腹膜间皮细胞类似研究的结果 基本一致。总之，对细胞因子诱导HPMC释放PAI-1进行深入研究有助于进一步 揭示胸膜 纤维化机制。
参考文献
1.Rougier JP，Guia S，Hagege J，et al.P AI-1 secretion and matrix deposition in huma n peritoneal mesothelial cell cultures：t ranscriptional regulation by IL-1β.Kidn ey Int.1998，54：87-98.
2.陈香美，董柯，傅博.不同浓度葡萄糖对大鼠间皮细胞增殖及细胞外基质产生的影响. 解放军医学杂志，1996；21：112-114.
, 百拇医药
3.Tietze L，Elbrecht A，Schauerte C，et al. Modulation of pro- and antifibrinolytic p roperties of human peritoneal mesothelia l cells by TGF-β1，IL-1β and TNF-α.Thromb Haemost，1998，79：362-370.
4.张欣平，郝勤，宋后燕，等.PAI-1 cDNA表达质粒的构建及其哺乳动物细胞 中的表达.上海医科大学学报，1996，23：176-180.
5.Antony VB，Hott JW，Kunkel SL，et al.Pleu ral mesothelial cell expression of MCP-1 and IL-8.Am J Respir Cell Mol Biol，1995 ，12：581-588.
, 百拇医药 6.Wyser C，Bernard W.Using corticosteroid s to treat tuberculous pleurisy.Chest，19 97，112：291-292.
7.Idell S，Girard W，Koenig KB，et al.A bnor moalities of pathways of fibrin turnover of the human pleural space.Am Rev Respi r Dis，1991，144：187-194.
8.Idell S，Zwieb C，Kumar A，et al.Pathways of fibrin turnover of human pleural mes othelial cell in vitro.Am J Respir Cell Mol Biol，1992，7：414-426.
9.Rodriguez PF，Antony VB.Pleurodesis：Sta te of the art.Eur Respir J，1997，10：1648- 1654.
(收稿：2000-05-08 修回：2000-07-07), 百拇医药
单位：南京医科大学第一附属医院呼吸内科210029
关键词：胸膜；间皮细胞；细胞因子；Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂
江苏医药001206 【摘要】 目的 研究前炎症细胞因子对人胸膜间皮细胞(HPMC)释放纤溶酶原激活物 抑制剂(PAI-1)的诱导效应。方法 渗出性胸膜腔积液的6份原代 HPMC置于DMEM/F12培养液中体外孵育，观察前炎症细胞因子白细胞介素-1β (IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对HPMC纤溶活动的影响。对分离的 HPMC纯度进行光镜下细胞学形态、电镜下超微结构和免疫组化染色的鉴定，加入IL- 1β或TNF-α诱导培养第三代HPMC 24小时后对HPMC培养液中PAI-1活 性 采用底物显色法进行测定。结果 与对照组相比，下列三种浓度水平的I L-1β或TNF-α诱导培养24 小时后均能显著增加HPMC培养液中的PAI-1活性，即0.2μg/L(IL-1β ：q＝3.76，P<0.05；TNF-α：q＝4.91，P<0. 01)，2.0μg/L(IL-1β：q＝10.72，P<0.01；TNF -α：q＝14.49，P<0.01) and 20μg/L(IL-1β： q＝22.81，P<0.01；TNF-α：q＝23.47，P<0.0 1)，而IL-1β和TNF-α对HPMC的诱导效应之间没有显著性差异。 结论 前炎症细胞因子在体内可能调节着HPMC释放PAI-1，由此影响着纤 维蛋白在胸膜腔内的沉积而向纤维化发展。
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Proinflammatory cytokine-induced release of plasminogen activator inhibitor-1 by human pleural mesothelial cells
MIN Rui，LI Shuyun，WANG Hong，et al.
(Departme nt of Pulmonology，The First Affiliated H ospital of Nanjing Medical University，Na njing 210029)
【Abstract】 Objective To investigate effects of two proinflamm atory cytokines on the production of pla sminogen activator inhibitor-1(PAI-1) by human pleural mesothelial cells(HPMC).[ WTHZ〗Methods Six primary cultures of H PMC isolated from patients with exudativ e pleural effusions were incubated in DM EM/F12 medium to examine the effect of i nterleukin-1β(IL-1β) or tumor necrosis f actor-α(TNF-α) on the fibrinolytic prope rties of HPMC in vitro.The purity of the cell population was assessed by morphol ogic，ultrastuctural and immunohistochemi cal characteristics.PAI-1 activity in th e conditioned media of third passage HPM C was detected using chromogenic substra te method.Results Compared with controls，PAI-1 activity in the cond itioned media of HPMC was significantly increased by stimulation with IL-1β or T NF-α for 24 hours at the level of 0.2μg/ L(IL-1β：q＝3.76，P<0.05；TNF-α：q＝4.91 ，P<0.0 1)，2.0μg/L(IL-1β：q＝10.72，P<0.01；TNF- α：q＝ 14.49，P<0.01) and 20μg/L(IL-1β：q＝22. 81，P< 0.01；TNF-α：q＝23.47，P<0.01)，but there wa s no significant difference between resp onses to IL-1β and TNF-α.Conclusion The results suggest that proinflamm atory cytokines mediate the release of P AI-1 by HPMC in vivo，and so may affect t he deposition of fibrin within the pleur al cavity and favor fibrogenesis.
, 百拇医药
【Key words】 Pleura Mesothelial cells Cytokines Plasminogen activator in hibitor-1
目前针对腹膜间皮细胞的研究在方法和观点上趋于成熟，已证 实前炎症细胞因子脂多糖(L PS)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)可诱导腹膜 间 皮细胞合成PAI-1[1～3]，鉴于胸膜和腹膜在组织学上均系间皮细胞，起源 于中胚 层体腔膜，所以具有借鉴意义，为此我们分离培养了人胸膜间皮细胞(HPMC)，并对细 胞因子诱导HPMC释放PAI-1效应进行研究。
材料和方法
一、研究对象
胸膜腔积液标本取自我院呼吸科住院以及门诊14例胸膜腔积液患 者，经HPMC细胞纯度鉴定有6例胸膜腔积液标本达到实验要求。
, 百拇医药
二、主要试剂
DMEM/F12细胞培养液(Hyclone公司)；转铁蛋白(Sig ma公司)；新生牛血清(杭州四季清生物研究所)；胰蛋白酶(Sigma公司)；重组 人细胞因子IL-1β、TNF-α(Promega公司)；抗细胞角蛋白、抗波形蛋白 、抗第Ⅷ因子相关抗原和抗CD45抗原的鼠抗人单克隆抗体(DAKO公司)；ABC kit(DAKO公司)；PAI-1活性测定试剂盒(上海医科大学分子学遗传室)。[ JP〗
三、方法
1.HPMC的分离和体外培养：在无菌条件下经胸穿分别抽取胸膜腔积液200～300m l，分离HPMC后加入DMEM/F12培养液(内含青霉素100KU/L，转铁蛋白 0.5mg/L，胰岛素10U/L，15%新生牛血清等)，以1×104/ml细胞 浓度接种于培养瓶内，置于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。
, 百拇医药
2.HPMC细胞纯度的鉴定：(1)细胞学形态观察：使用盖片细胞培养技术将第二代HP MC进行苏木素-伊红(HE)染色后于光镜下观察。(2)细胞表面标志鉴定：以卵白素 -生物素-过氧化物酶复合法(ABC)分别用抗细胞角蛋白、抗第Ⅷ因子相关抗原和抗C D45抗原的鼠抗人单克隆抗体做免疫细胞化学染色。(3)细胞超微结构观察：透射电 子显微镜观察时先取足量HPMC细胞悬液，离心后戊二醛固定，经醋酸铀染色、丙酮梯度 脱水、包埋后超薄切片，上支持膜电镜观察；扫描电子显微镜时先用盖片培养技术将HPM C分别经戊二醛和四氧化锇固定、丙酮/醋酸异戊脂脱水、临界点干燥、喷金后电镜观察 。
3.PAI-1活性检测：将第二代培养的HPMC用胰蛋白酶消化，用不含新生牛血清的D MEM/F12将第三代HPMC调成浓度为2×105/ml细胞悬液，在96孔细胞 培 养板中每孔加100μl，同时分别加入细胞因子IL-1β或TNF-α，使其终浓度分 别为A组0.02μg/L、B组0.2μg/L、C组2.0μg/L、D组20.0μ g/L，并设空白对照组，孵育24小时后吸取上清，参照张欣平等[4]的方法使用PAI-1活性测定试剂盒检测其中PAI-1活性。
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四、统计学处理
实验数据以
±s表示，采用多组资料方差分析(ANOVA)F检验， 若有组间差异进行两样本均数间q检验(Newman-Keuls法)，P<0 .05时有统计显著差异。结果
一、HPMC纯度鉴定
在相差显微镜下可见贴壁生长的HPMC为单层扁平细胞，呈多边 形；HPMC经HE染色后为胞浆薄染成淡粉红色、中央为一深蓝色扁圆形核；HPMC经 免疫细胞化学染色后为抗细胞角蛋白和抗波形蛋白阳性，抗第Ⅷ因子相关抗原和抗CD45 抗原阴性；在透射电子显微镜下可见HPMC细胞表面有微绒毛，细胞内有丰富的细胞浆囊 泡以及分化成熟的内质网、线粒体；在扫描电子显微镜下可见HPMC表面大量微绒毛密集 排列成丛状。
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二、HPMC经不同浓度细胞因子诱导培养24小时后培养液中PAI-1活性变化
采用 直线回归法得出标准曲线方程为Y＝0.899-0.145X，r＝-0.996。 实验 结果显示：①细胞因子浓度为0.20μg/L组、2.0μg/L组与20.0μg/ L组均可使HPMC释放PAI-1显著增加，而0.02μg/L组没有这一显著效应(F＝0.11，P>0.05)；②q检验显示IL-1β和TNF-α对 HPMC的诱 导效应之间没有显著性差异(见表1，表2)。
表1 HPMC经不同浓度细胞因子诱导24h后培养液中PAI- 1活性变化(U/ml，
±s)△*0.02μg/L组
0.20μg/L组
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2.0μg/L组
20.0μg/L组
对照
IL-1β
TNF-α
对照
IL-1β
TNF-α
对照
IL-1β
TNF-α
对照
IL-1β
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TNF-α
PAI-1
活性
1.91
±0.76
2.01
±0.62
2.37
±0.92
2.33
±1.18
3.55
±0.42
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3.92
±0.56
2.56
±0.44
9.07
±2.46
11.36
±0.6 1
2.60
±0.27
10.62
±1.35
10.85
, 百拇医药
±0.63
F值
0.11
6.57
56.50
178.65
P值
P>0.05
P<0.01
P <0.01
P<0.01
注：△每组为6例标本的第三代HPMC实验数据；*PAI-1活性 单位U/ml即在25℃，20min内抑制1.0国际单位t-PA活性的量表2 各组间均数q检验值
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0.2μg/L组
2.0μg/L组
20.0μg/L组
IL-1β
TNF-α
IL-1β
TNF-α
IL-1β
TNF-α
对照
3.76*
4.91**
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10.72**
14.49**
22.81**
23.47**
IL-1β
1.14
3.77
0.65
注：*P<0.05 **P<0.01讨论
不少全身性或肺部疾病会波及胸膜，如肺结核、细菌性肺炎、石棉肺、风湿性关节 炎、部分恶性肿瘤等，导致胸膜发生炎症反应和病理损伤，HPMC作为胸膜的主要细胞群体势必受到影响。国外晚近研究表明HPMC其作用不仅 仅 是超滤胸膜腔积液和作为分子转运的屏障，而且主动参与胸膜腔的抗感染和免疫应答反应[5]。对胸膜纤维化机制进行研究的临床意义主要在两个方面：(1)首先是在感 染 性胸膜炎，如肺炎旁渗出液(PPE)、脓胸、结核性胸膜炎等，在使用有效抗生素和充分 引流后仍不能完全避免胸膜的粘连、纤维化和胸膜增厚，重者可能形成纤维胸，导致肺膨胀 受限、呼吸功能减退。此外，在结核性胸膜炎的治疗方案上，目前国外已有学者否定在化疗 基础上 加用糖皮质类固醇激素防治胸膜粘连、纤维化的传统观点[6]，所以在感染性胸膜 炎如何 进一步防治胸膜粘连、纤维化可能面临寻求新的突破口。(2)对恶性胸膜腔积液(MPE )、反复自发性气胸施行的胸膜粘连术，是一种人为形成的胸膜粘连、纤维化，却有积极的 临床意义，如遏止MPE无限增加或气胸反复发生、减轻MPE的呼吸压迫症状和避免蛋白 大量丢失。虽然胸膜粘连术已积累大量临床经验，但对其治疗机制上的认识仍不统一。总之 ，亟待对胸膜纤维化机制进行深入研究，有助于临床治疗按病情需要选择抑制或促进胸膜纤 维化进程。
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PAI是组织型纤溶酶原激活物(t-PA)与尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)的特 异性快速抑制剂。t-PA与u-PA主要生理功能是催化纤溶酶原转变为纤溶酶，后者可 水解血栓或渗出于组织内的纤维蛋白(原)。PAI-1是血浆和组织中主要的PAI，作 用远强于PAI-2，在纤溶系统中起着关键作用，以此调控着纤维蛋白在胸膜腔和腹膜腔 的沉积。在渗出性胸膜腔积液中PAI-1含量是血浆中的80～4000倍，PAI-1 可能来自毛细血管炎性渗出或胸膜腔内细胞的合成[7]。采用免疫细胞化学技术与 分子杂 交技术已证实PAI-1分布于成纤维细胞、嗜中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞，Ide ll等[8]采用Northern Blot印迹法观察到体外培养的HPMC能 合成PAI- 1和PAI-2，这一过程可被放线菌素与环乙酰胺所阻断，作者认为鉴于HPMC能大量 合成和释放PAI-1，可能是胸膜腔积液中高水平PAI-1的主要来源。
HPMC对胸膜腔积液纤溶/促凝平衡的调控作用日益受到关注，改变了一些临床观念，如 过去认为损伤胸膜是取得良好胸膜粘连术疗效的先决条件，所以临床采用机械性摩擦胸膜或 胸膜部分切除术的办法，确实有一定的效果。而晚近认为在胸膜粘连术中虽然一些炎症细胞 (如嗜中性粒细胞、单核巨噬细胞、成纤维细胞)作用必不可少，但是纤维过程级联反应 的主要启动者是HPMC，越来越多的证据显示HPMC调控着胸膜腔积液纤溶/促凝水平 ，这意味着为获得最佳粘连术效果粘连剂应尽可能分布至最大面积的HPMC膜表面，如果 膜表面被肿瘤细胞、纤维蛋白所遮盖，或者处于低糖、低pH等环境，胸膜粘连术疗效将显 著降低[9]。
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在本实验中我们观察到前炎症细胞因子TNF-α的诱导作用，而且观察和比较IL-1β 和TNF-α的诱导作用，与Tietze等[5]对腹膜间皮细胞类似研究的结果 基本一致。总之，对细胞因子诱导HPMC释放PAI-1进行深入研究有助于进一步 揭示胸膜 纤维化机制。
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(收稿：2000-05-08 修回：2000-07-07), 百拇医药