肾细胞癌血清转化生长因子-β1水平及其意义
作者：郭宏骞 孙则禹 薛兆英 辛殿旗 张志文
单位：郭宏骞(南京大学医学院附属鼓楼医院210008)；孙则禹(南京大学医学院附属鼓楼医院210008)；薛兆英(北京大学泌尿外科研究所)；辛殿旗(北京大学泌尿外科研究所)；张志文(北京大学泌尿外科研究所)
关键词：肾细胞癌；转化生长因子-β1；血清浓度
江苏医药001204 【摘要】 目的 探讨血清转化生长因子-β1(TGF-β1)对肾细胞癌侵袭性的作用 。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对17例肾细胞癌患 者根治术前后血清TGF-β1浓度和17例行体外冲击波碎石患者，17例前列腺增生 患 者及17例正常人血清TGF-β1浓度进行测定。结果 所有肾细胞 癌根治术前患者血清TGF-β1水平明显高于正常对照组(P<0.001)，根 治术后患者TGF-β1浓度明显下降(P< 0.01)。结论 血清TGF-β1浓度有可能成为一种判断肾细胞 癌预后的瘤标。
, http://www.100md.com
The importance of serum transforming gro wth factor-β1 level in patients with renal cell carcinoma
GUO Hongqian，SUN Zeyu， XLE Zaoying，et al.
(The Affiliated Drum Tower Hospital of Medical College Nanjing Uni versity，Nanjing 210008)
【Abstract】 Objective To detect the role of transforming growt h factor-β1(TGF-β1) on aggressiveness of renal carcinoma cell.Methods Serum TGF-β1 was detected by means of enzyme-linked immunosorbent ass ay (ELISA) in 17 cases of renal cell carcin oma(RCC) before and after radical nephre ctomy，17 cases of BPH，17 cases of ESWL a nd 17 cases of normal subjects as health y controls.Results In all cases o f RCC the levels of TGF-β1 were signifi cant higher than those of healthy contro ls(P<0.001).After the operation，serum TGF-β1 was dramatically decreased(P<0 . 01).Conclusion Serum TGF-β1 is a pos sible tumor-prognostic marker in RCC.
, 百拇医药
【Key words】 Renal cell carcinom a TGF-β1 Serum level
肾细胞癌是肾脏最常见的恶性肿瘤，在对其研究中，一个重要 方面是寻找特异性的肿瘤标志 物对转移和复发进行判断。传统的指标如：肿瘤体积、分期及分级已不能满足对肾细胞癌个 体病人预后的判断。因而，我们在寻找新瘤标方面进行探索。
对象和方法
一、对象 1998年2月～1998年10月本科住院患者，17例术前诊断为 肾细胞癌，术后 病理证实。，其中男13例，女4例，年龄32～77岁，平均年龄58.2岁。 肿瘤分期(Robson)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各为2、9、4、2例；肿瘤分级G1、G 2、G3各为3、10、4例。同时收集17例行体外冲击波碎石患者及17例前列腺增 生患者。
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肾细胞癌患者根治术前1天、术后7天及术后4周取静脉血，肾结石患者行体外冲击波碎石 后第1天取血，前列腺增生患者入院时取血。17例健康人血清标本作正常对照。
二、试剂来源和方法 血清转化生长因子-β1(TGF-β1)ELISA试剂盒购 于美国R＆D公司，步骤按说明书进行。
三、统计学处理 实验数据以
±s表示，采用SPSS软件包中的秩和及两两比较q检验进行统计学分析。
结果
肾细胞癌组术前1天血清TGF-β1浓度39.2±11.4ng/ml，范围25. 2～ 77.0ng/ml，健康组平均值为5.6±2.0ng/ml，范围3.6～9.9 ng/ml。肾细胞癌组明显高于健康组，差异有极显著性(P<0.001)。
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肾结石组碎石后血清TGF-β1浓度18.9±9.0ng/ml，范围9.2～33 .7ng/ml，前列腺增生组血清TGF-β1浓度7.9±2.8ng/ml，范围 4.3～16.4ng/ml，两者均高于正常组，差异均有显著性(P<0.01) 。肾细胞癌组血清TGF-β1浓度亦明显高于肾结石碎石组和前列腺组，差异均有显著 性(P<0.01)，见图1。
肾细胞癌组术后7天和4周，血清TGF-β1浓度分别为9.66±3.21ng /m l和9.50±3.04ng/ml，与术前比较明显降低，差异均有显著性(P<0 .01)，?但术后7天和4周血清TGF-β1间浓度差异无统计学意义(P>0 .05)。肾细胞癌Robson分期，Ⅰ～Ⅳ期的肾肿瘤TGF-β1平均水平分别为38.5、?38.8、40.4和39.4ng/ml，分 级G1～G3TGF-β1平均水平分别为38.5、39.7和37.1ng/m l 。健康组平均值为5.6±2.0ng/ml，范围3.6～9.9ng/ml，差异无 统计学意义。
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图1 肾细胞癌组、健康组、肾结石碎石组及前 列腺增生组血清TGF-β1水平
RCC：肾细胞癌组 CON：对照组
ESWL：体外冲击波碎石组 BPH：前列腺增生组
讨论
应用ELISA方法检测肾细胞癌和健康人血清TGF-β1浓度，发现肾细胞癌组 明显高于 健康组(P<0.001)，亦明显高于肾结石组和前列腺增生组(P<0.01 )。 肾细胞癌患者行根治术后，血清TGF-β1浓度显著下降(P<0.01)，提示 肾细胞癌 患者血清TGF-β1可能大部分来源于肾组织。这表明肾细胞癌患者血清TGF-β 1浓度升高有较高的特异性。
研究表明肾小管上皮细胞和来源于肾小管上皮细胞肾细胞癌细胞均可分泌TGF-β1 [ 1]，并表达其Ⅰ型和Ⅱ型受体。这表明肾小管上皮细胞和肾细胞癌细胞存在TGF-β 1 的自分泌通路。TGF-β1是一超大家族生长因子一员，通过与多种蛋白和特异性膜受 体相互作用刺激细胞生长，并对细胞分化产生双重影响。Lawrenece等[2] 证实：移行细胞 ，特别是人血小板可分泌高分子量TGF-β1前体复合物，它可以在酸化和碱化的条件 下被激活，并且可能通过一个未知的机制刺激邻近组织和血小板释放TGF-β1。肾细 胞癌 不受抑制的持续生长，必然会侵犯正常组织并损害正常细胞，启动炎症反应，被吸引到损伤 组织区域血小板和T淋巴细胞释放TGF-β1，可导致局部TGF-β1升高。此外 ，肿瘤细胞因Ⅱ型受体丢失，对TGF-β1不敏感，周围组织产生更多的TGF-β 1以试图抑制肿瘤的生长，最终导致血清TGF-β1升高[3]。
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应用ELISA方法检测血清TGF-β1浓度的可行性已被学者证实[4]。国 外学者报告，结直肠癌病人的血清TGF-β1浓度和癌组织TGF-β mRNA水平 与肿瘤的Duke分期明显相关，Reinhold等[5]认为TGF-β1的 表 达影响结直肠癌的浸润深度。国内学者报告，胃癌患者的血清TGF-β1浓度和癌组织 mRNA水平与胃癌的生长方式和淋巴结转移相关[6]。本实验结果表明肾细胞癌 病人血清TGF-β1均升高，它 同样反映了肾细胞癌组TGF-β1基因过度表达。现已证实肿瘤产生的TGF-β1 可对 免疫系统产生影响，它可调节淋巴细胞的活性，影响其分化并产生细胞因子和免疫蛋白 [7，8]。此外，TGF-β1还对局部免疫产生影响，它可能阻断淋巴细胞的自然 杀伤作用和T淋巴的细胞毒性作用，还可以吸引单核细胞并刺激其产生其它细胞因子，抑制 宿主的免疫功能，促进肿瘤转移[9，10]。
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血清TGF-β1浓度升高，反映了肾细胞癌组织基因过度表达和肾肿瘤细胞大量分泌T GF -β1，对肿瘤细胞的生长、浸润和转移有利。由于正常组织也可检测到TGF-β1 ，我们无法确定肾细胞癌患者血清TGF-β1仅由肿瘤组织所释放。如果肾细胞癌患者 血清TG F-β1浓度主要取决于肿瘤细胞，那么它与肿瘤相关。然而，在本实验中肾细胞癌的不 分期 分级浓度间差异无统计学意义。TGF-β1能否成为有价值的瘤标，有待进一步随访和 更深入的实验。
参考文献
1.Phlillips AO，Steadman R，Willi ams JD.El evated D-glucose concentration modulates TGF-beta1 synthesis by human cultured r enal proximal tubular cells：The permissi ve role of platelet-derived growth facto r.Am J Pathol，1995，147：362-367.
, 百拇医药
2.Lawrence DA.Transfoming growth fa ctor- β：An overview.Kidney Int，1995，47：19-29.
3.Cervenka A，Bevec D，Majdic O.TGF-β 1 is a potent inducer of human effector T cel ls.J Immunol，1994，153：4367-4369.
4.Barnard JA，Lyons RM，Moses HM.The cell biology of transforming growth factor be ta.Biochem Biophys Acta，1990，79：1032-103 6.
5.Reinhold D，Bank U，Buhling F，et al .Tran sfoming growth factor-β1 inhibits DNA s y nthesis of PWM-stimulated PBMC via suppr ession of IL-2 and IL-6 production.Cytok ine，1994，6：382-387.
, 百拇医药
6.Reinhold D，Bank U，Buhling F，et al .Tran sfoming growth factor-β1 inhibits inter l eukin-10 mRNA expression and production in pokeweed mitogen-stimulated periphera l blood mononuclear cell and T cells.J I nterferon Cytokine Res，1995，15∶685-689.
7.Danielpour D.Improved sandwich en zyme- linked immunosorbent assays for transfom ing growth factor beta-1.J Immunol Metho ds，1993，158：17-23.
8.Wunderlich H，Steiner U，Junker U.S erum transforming growth factor-β1 in patien t s with renal cell carcinoma.J Urol，1997， 157：1602-1603.
9.许洪卫，王元和，谭龙益.胃癌侵袭性及根治手术对病人血清转化生长因子 β1浓度的影响.中华实验外科杂志，1998，15：320-321.
10.Beck J，Rondot P，Jullien P.TGF-β-like actiity produced during regression of ex acerbations in multiple sclerosis.Acta N eurol Scand，1991，84：452-456.
(收稿：2000-06-20 修回：2000-07-20), 百拇医药
单位：郭宏骞(南京大学医学院附属鼓楼医院210008)；孙则禹(南京大学医学院附属鼓楼医院210008)；薛兆英(北京大学泌尿外科研究所)；辛殿旗(北京大学泌尿外科研究所)；张志文(北京大学泌尿外科研究所)
关键词：肾细胞癌；转化生长因子-β1；血清浓度
江苏医药001204 【摘要】 目的 探讨血清转化生长因子-β1(TGF-β1)对肾细胞癌侵袭性的作用 。方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对17例肾细胞癌患 者根治术前后血清TGF-β1浓度和17例行体外冲击波碎石患者，17例前列腺增生 患 者及17例正常人血清TGF-β1浓度进行测定。结果 所有肾细胞 癌根治术前患者血清TGF-β1水平明显高于正常对照组(P<0.001)，根 治术后患者TGF-β1浓度明显下降(P< 0.01)。结论 血清TGF-β1浓度有可能成为一种判断肾细胞 癌预后的瘤标。
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The importance of serum transforming gro wth factor-β1 level in patients with renal cell carcinoma
GUO Hongqian，SUN Zeyu， XLE Zaoying，et al.
(The Affiliated Drum Tower Hospital of Medical College Nanjing Uni versity，Nanjing 210008)
【Abstract】 Objective To detect the role of transforming growt h factor-β1(TGF-β1) on aggressiveness of renal carcinoma cell.Methods Serum TGF-β1 was detected by means of enzyme-linked immunosorbent ass ay (ELISA) in 17 cases of renal cell carcin oma(RCC) before and after radical nephre ctomy，17 cases of BPH，17 cases of ESWL a nd 17 cases of normal subjects as health y controls.Results In all cases o f RCC the levels of TGF-β1 were signifi cant higher than those of healthy contro ls(P<0.001).After the operation，serum TGF-β1 was dramatically decreased(P<0 . 01).Conclusion Serum TGF-β1 is a pos sible tumor-prognostic marker in RCC.
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【Key words】 Renal cell carcinom a TGF-β1 Serum level
肾细胞癌是肾脏最常见的恶性肿瘤，在对其研究中，一个重要 方面是寻找特异性的肿瘤标志 物对转移和复发进行判断。传统的指标如：肿瘤体积、分期及分级已不能满足对肾细胞癌个 体病人预后的判断。因而，我们在寻找新瘤标方面进行探索。
对象和方法
一、对象 1998年2月～1998年10月本科住院患者，17例术前诊断为 肾细胞癌，术后 病理证实。，其中男13例，女4例，年龄32～77岁，平均年龄58.2岁。 肿瘤分期(Robson)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各为2、9、4、2例；肿瘤分级G1、G 2、G3各为3、10、4例。同时收集17例行体外冲击波碎石患者及17例前列腺增 生患者。
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肾细胞癌患者根治术前1天、术后7天及术后4周取静脉血，肾结石患者行体外冲击波碎石 后第1天取血，前列腺增生患者入院时取血。17例健康人血清标本作正常对照。
二、试剂来源和方法 血清转化生长因子-β1(TGF-β1)ELISA试剂盒购 于美国R＆D公司，步骤按说明书进行。
三、统计学处理 实验数据以
±s表示，采用SPSS软件包中的秩和及两两比较q检验进行统计学分析。结果
肾细胞癌组术前1天血清TGF-β1浓度39.2±11.4ng/ml，范围25. 2～ 77.0ng/ml，健康组平均值为5.6±2.0ng/ml，范围3.6～9.9 ng/ml。肾细胞癌组明显高于健康组，差异有极显著性(P<0.001)。
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肾结石组碎石后血清TGF-β1浓度18.9±9.0ng/ml，范围9.2～33 .7ng/ml，前列腺增生组血清TGF-β1浓度7.9±2.8ng/ml，范围 4.3～16.4ng/ml，两者均高于正常组，差异均有显著性(P<0.01) 。肾细胞癌组血清TGF-β1浓度亦明显高于肾结石碎石组和前列腺组，差异均有显著 性(P<0.01)，见图1。
肾细胞癌组术后7天和4周，血清TGF-β1浓度分别为9.66±3.21ng /m l和9.50±3.04ng/ml，与术前比较明显降低，差异均有显著性(P<0 .01)，?但术后7天和4周血清TGF-β1间浓度差异无统计学意义(P>0 .05)。肾细胞癌Robson分期，Ⅰ～Ⅳ期的肾肿瘤TGF-β1平均水平分别为38.5、?38.8、40.4和39.4ng/ml，分 级G1～G3TGF-β1平均水平分别为38.5、39.7和37.1ng/m l 。健康组平均值为5.6±2.0ng/ml，范围3.6～9.9ng/ml，差异无 统计学意义。
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图1 肾细胞癌组、健康组、肾结石碎石组及前 列腺增生组血清TGF-β1水平
RCC：肾细胞癌组 CON：对照组
ESWL：体外冲击波碎石组 BPH：前列腺增生组
讨论
应用ELISA方法检测肾细胞癌和健康人血清TGF-β1浓度，发现肾细胞癌组 明显高于 健康组(P<0.001)，亦明显高于肾结石组和前列腺增生组(P<0.01 )。 肾细胞癌患者行根治术后，血清TGF-β1浓度显著下降(P<0.01)，提示 肾细胞癌 患者血清TGF-β1可能大部分来源于肾组织。这表明肾细胞癌患者血清TGF-β 1浓度升高有较高的特异性。
研究表明肾小管上皮细胞和来源于肾小管上皮细胞肾细胞癌细胞均可分泌TGF-β1 [ 1]，并表达其Ⅰ型和Ⅱ型受体。这表明肾小管上皮细胞和肾细胞癌细胞存在TGF-β 1 的自分泌通路。TGF-β1是一超大家族生长因子一员，通过与多种蛋白和特异性膜受 体相互作用刺激细胞生长，并对细胞分化产生双重影响。Lawrenece等[2] 证实：移行细胞 ，特别是人血小板可分泌高分子量TGF-β1前体复合物，它可以在酸化和碱化的条件 下被激活，并且可能通过一个未知的机制刺激邻近组织和血小板释放TGF-β1。肾细 胞癌 不受抑制的持续生长，必然会侵犯正常组织并损害正常细胞，启动炎症反应，被吸引到损伤 组织区域血小板和T淋巴细胞释放TGF-β1，可导致局部TGF-β1升高。此外 ，肿瘤细胞因Ⅱ型受体丢失，对TGF-β1不敏感，周围组织产生更多的TGF-β 1以试图抑制肿瘤的生长，最终导致血清TGF-β1升高[3]。
, http://www.100md.com
应用ELISA方法检测血清TGF-β1浓度的可行性已被学者证实[4]。国 外学者报告，结直肠癌病人的血清TGF-β1浓度和癌组织TGF-β mRNA水平 与肿瘤的Duke分期明显相关，Reinhold等[5]认为TGF-β1的 表 达影响结直肠癌的浸润深度。国内学者报告，胃癌患者的血清TGF-β1浓度和癌组织 mRNA水平与胃癌的生长方式和淋巴结转移相关[6]。本实验结果表明肾细胞癌 病人血清TGF-β1均升高，它 同样反映了肾细胞癌组TGF-β1基因过度表达。现已证实肿瘤产生的TGF-β1 可对 免疫系统产生影响，它可调节淋巴细胞的活性，影响其分化并产生细胞因子和免疫蛋白 [7，8]。此外，TGF-β1还对局部免疫产生影响，它可能阻断淋巴细胞的自然 杀伤作用和T淋巴的细胞毒性作用，还可以吸引单核细胞并刺激其产生其它细胞因子，抑制 宿主的免疫功能，促进肿瘤转移[9，10]。
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血清TGF-β1浓度升高，反映了肾细胞癌组织基因过度表达和肾肿瘤细胞大量分泌T GF -β1，对肿瘤细胞的生长、浸润和转移有利。由于正常组织也可检测到TGF-β1 ，我们无法确定肾细胞癌患者血清TGF-β1仅由肿瘤组织所释放。如果肾细胞癌患者 血清TG F-β1浓度主要取决于肿瘤细胞，那么它与肿瘤相关。然而，在本实验中肾细胞癌的不 分期 分级浓度间差异无统计学意义。TGF-β1能否成为有价值的瘤标，有待进一步随访和 更深入的实验。
参考文献
1.Phlillips AO，Steadman R，Willi ams JD.El evated D-glucose concentration modulates TGF-beta1 synthesis by human cultured r enal proximal tubular cells：The permissi ve role of platelet-derived growth facto r.Am J Pathol，1995，147：362-367.
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2.Lawrence DA.Transfoming growth fa ctor- β：An overview.Kidney Int，1995，47：19-29.
3.Cervenka A，Bevec D，Majdic O.TGF-β 1 is a potent inducer of human effector T cel ls.J Immunol，1994，153：4367-4369.
4.Barnard JA，Lyons RM，Moses HM.The cell biology of transforming growth factor be ta.Biochem Biophys Acta，1990，79：1032-103 6.
5.Reinhold D，Bank U，Buhling F，et al .Tran sfoming growth factor-β1 inhibits DNA s y nthesis of PWM-stimulated PBMC via suppr ession of IL-2 and IL-6 production.Cytok ine，1994，6：382-387.
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6.Reinhold D，Bank U，Buhling F，et al .Tran sfoming growth factor-β1 inhibits inter l eukin-10 mRNA expression and production in pokeweed mitogen-stimulated periphera l blood mononuclear cell and T cells.J I nterferon Cytokine Res，1995，15∶685-689.
7.Danielpour D.Improved sandwich en zyme- linked immunosorbent assays for transfom ing growth factor beta-1.J Immunol Metho ds，1993，158：17-23.
8.Wunderlich H，Steiner U，Junker U.S erum transforming growth factor-β1 in patien t s with renal cell carcinoma.J Urol，1997， 157：1602-1603.
9.许洪卫，王元和，谭龙益.胃癌侵袭性及根治手术对病人血清转化生长因子 β1浓度的影响.中华实验外科杂志，1998，15：320-321.
10.Beck J，Rondot P，Jullien P.TGF-β-like actiity produced during regression of ex acerbations in multiple sclerosis.Acta N eurol Scand，1991，84：452-456.
(收稿：2000-06-20 修回：2000-07-20), 百拇医药
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