烧伤大鼠胃组织中一氧化氮合酶的变化观察
作者：颜洪 彭曦 汪仕良 王裴
单位：第三军医大学附属西南医院烧伤研究所，重庆 400038
关键词：一氧化氮；一氧化氮合酶；胃；大鼠；烧伤
第三军医大学学报001202
提 要： 目的 研究烧伤后大鼠胃组织中一氧化氮合酶(NOS)的变化及与一氧化氮(NO)的关系。方法 采用30%TBSAⅢ度烧伤大鼠模型，分别检测了胃组织中NO含量及原生型NOS(cNOS)和诱导型NOS(iNOS)的活性，并分析了NO的变化规律及其与两型NOS之间的关系。结果 烧伤后胃组织中iNOS活性大幅上升，与NO的变化趋势一致，二者呈显著正相关(r=0.94, P<0.01),而cNOS活性呈下降趋势，与NO相关不显著(r=-0.53, P>0.05)。结论 烧伤后胃组织中NO的变化主要受iNOS活性影响，iNOS活性上升，cNOS活性下降可能与烧伤后胃肠道病理变化密切相关。
, 百拇医药
中图法分类号： R345.44;R644.02 文献标识码： A
文章编号：1000-5404(2000)12-1126-03
Alterations of nitric oxide synthase in gastric tissues of burned rats
YAN Hong, PENG Xi, WANG Shi-liang, Wang Pei
(Institute of Burns Research, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China)
Abstract： Objective To study the changes of nitric oxide synthase (NOS) after burns and its relationship with nitric oxide (NO) in stomach of rats. Methods Wistar rats with 30% TBSA full thickness burns were used as models, the activity of inducible NOS (iNOS) and constitute NOS (cNOS) as well as the content of NO in gastric tissues were detected. Results The iNOS activity and the content of NO were increased significantly after burn injury, and there was a positive correlation between them (r=0.94, P<0.01). On the other hand, the cNOS activity was decreased remarkedly, it has no correlation with the NO (r=-0.53, P>0.05). Conclusion The changes of NO in gastric tissues is mainly affected by iNOS activity. The changes of activity of iNOS and cNOS are related with some pathological changes in stomach after burns.
, 百拇医药
Key words： nitric oxide; nitric oxide synthase; stomach; rat; burn
严重烧伤可引起胃肠道运动紊乱，血液循环障碍，胃肠粘膜上皮坏死脱落等病理变化[1]。有人认为某些神经递质的变化是导致上述病理过程的重要因素[2]。近年来研究表明一氧化氮(Nitric oxide, NO)是胃肠道中非肾上腺素能非胆碱能(Nonadrenergic noncholinergic, NANC)神经的抑制性递质，广泛参与胃肠生理功能。关于烧伤后肠道NO的变化规律特别是与胃组织中不同类型的一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)之间的关系尚未见报道。为此，本实验以烧伤大鼠为模型，动态观察了胃组织中NO含量及原生型NOS(Constitute NOS,cNOS)和诱导型NOS(Inducible NOS,iNOS)的变化规律，分析了它们之间的相互关系，并对其病理生理学意义进行初步讨论。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 动物分组及致伤
健康成年Wistar大鼠80只，雌雄不拘，体重(220±30)g，随机分为正常对照及伤后1、3、6、12、24、48、72 h共8组，每组8只,除正常对照组外,其余各组均按本所建立的方法致成背部30%TBSAⅢ度烧伤[3]。
1.2 NO的测定
采用深圳晶美公司提供的NO试剂盒测定胃组织中NO的浓度，具体操作严格按说明书进行。
1.3 NOS活性测定
于各时相点活杀大鼠，迅速取胃并沿胃大弯剪开，用预冷的0.01 mol/LPBS(pH 7.4)冲洗干净，在胃窦处取一块组织约200 mg(每只大鼠取材部位尽量一致)，滤纸吸干精确称量后加入3ml NOS提取液，内含50 mmol/LHepes，0.1 g/LPMSF，0.5 mmol/LEDTA，1mmol/LDTT，320mmol/L蔗糖，0.1 g/L亮肽素，0.1 g/L胰蛋白酶抑制剂，0.02 g/L抑肽酶。冰浴匀浆，4℃，100 000×g，离心30 min，收集上清液即为NOS提取物，置-30 ℃保存，1周内测试。
, 百拇医药
取NOS提取液0.6 ml加入反应液约2.4 ml，包括0.6 ml(1 mmol/L)CaCl2，0.6 ml(5 mmol/L)MgCl2，0.6 ml(250 mmol/L)L-缬氨酸，0.6 ml(0.2 mol/L)PBS，10 μl(480 μmol/L)HbO2，10 μl(30 mmol/L)NADPH。37℃水浴10 min，加入10 μl(30 mmol/L)L-精氨酸，立即计时，每30 s测量1次，采用双波长λ 401-421 nm，共测量3 min。按Douglas[4]的方法计算总NOS活性，在反应液中除去CaCl2，并加入10 μl(6 mmol/L)EGTA，使依赖Ca2+的cNOS失活，可测得iNOS的活性，用总NOS减去iNOS即为cNOS活性。
1.4 统计学处理
按华西医科大学PEMS程序作统计学处理，结果以
±s表示，做t检验和相关分析。
, http://www.100md.com
2 结果
烧伤早期胃组织中NO含量上升，与NOS总活性上升趋势一致，烧伤后胃组织中iNOS活性大幅上升，而cNOS活性呈下降趋势，见表1；烧伤后胃组织中NO含量同iNOS活性呈显著正相关(r=0.94,P<0.01)，而与cNOS相关不显著(r=-0.53, P>0.05)。
表1 烧伤后大鼠胃组织中NO及NOS活性的变化(±s)
Fig 1 Change of NO and NOS in gastric tissues of
burned rats(±s) Group
, http://www.100md.com
n
NO
(ωB/μg.g-1)
cNOS
(nmol.min-1.g-1)
iNOS
(nmol.min-1.g-1)
Total NOS
(nmol.min-1.g-1)
, 百拇医药
Control
8
30.47±3.32
3.32±0.42
0.46±0.16
3.51±0.55
PB 1 h
8
24.21±3.69
2.26±0.38*
0.72±0.17
3.12±0.51
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PB 3 h
8
37.98±3.58*
1.37±0.46* *
3.67±0.49* *
5.11±0.67*
PB 6 h
8
45.43±6.32* *
1.14±0.21* *
, 百拇医药
4.52±1.02* *
5.28±1.12*
PB 12 h
8
47.96±7.32* *
1.38±0.23* *
6.13±1.14* *
7.34±1.06* *
PB 24 h
8
, http://www.100md.com
40.32±3.41*
2.01±0.23* *
3.76±0.65* *
5.87±0.63* *
PB 48 h
8
38.83±4.53*
2.64±0.53
3.52±0.51* *
6.34±0.84* *
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PB 72 h
8
38.48±4.27*
2.75±0.43
3.79±0.64* *
6.66±0.98* *
PB：Post burn; *:P<0.05, * *: P<0.01 vs control
3 讨论
文献报道NOS分为两类3型同功酶，包括脑型(Ⅰ型)和内皮细胞型(Ⅲ型)同功酶，它们属于cNOS，另一种为iNOS，主要来源于巨噬细胞(Ⅱ型)。它们之间在区域分布、生化特点及生理功能方面均存在较大差异[5]。cNOS主要分布于神经细胞和血管内皮细胞中，由它催化生成的NO主要起神经递质和第二信使的作用；iNOS主要分布于巨噬细胞、内皮细胞等处,催化生成的NO具有细胞毒作用，参与介导免疫反应。由此推测烧伤后胃肠道血液灌流不良，运动功能紊乱及粘膜受损可能与烧伤后胃肠道NO含量增加及不同类型的NOS活性异常有关。为此，本实验着重观察了胃组织中iNOS和cNOS活性的变化规律及其与NO含量的关系。结果显示烧伤后胃组织中iNOS和cNOS的变化规律相反，iNOS呈上升趋势，与NO的变化规律一致，二者呈显著正相关(r=0.94,P<0.01)，而cNOS&127;则呈下降趋势,与NO相关不显著(r=-0.53,P>0.05)。提示烧伤后胃组织中NO含量的变化主要受iNOS活性的影响。
, 百拇医药
由于NO半衰期短，仅在局部发挥生物学效应，故NOS的分布与NO的生理功能密切相关。目前已知，cNOS广泛分布于消化道壁内神经丛中，其产物NO是消化道中NANC神经的抑制性递质，可引起胃肠道血管扩张和平滑肌松弛[6]。Niclos等[7]采用组织化学染色发现NOS阳性神经穿行于胃肠道平滑肌之间，其中肌间神经丛中NOS阳性神经元密度最高，粘膜下层和小血管周围也有较密集的NOS阳性神经元。烧伤刺激引起肾上腺素能神经兴奋，使NANC神经受到抑制，导致主要分布于NANC神经中的cNOS活性下降，由其催化产生的NO也随之下降，引起平滑肌过度收缩，可能是导致胃肠道血液灌流不良和运动功能障碍的重要原因。由于cNOS的活性调节主要由神经系统支配，故伤后1 h就发现cNOS活性低于伤前水平，伤后6 h达最低值。此后，随着NANC神经受抑状态的逐步解除，cNOS活性于伤后48 h接近伤前水平。生理状况下胃组织中iNOS活性极低，只有在内毒素及γ-干扰素、IL-1、IL-6和TNF等多种细胞因子的作用下，iNOS才被激活表达酶活力。iNOS的诱生涉及基因转录、蛋白质合成等过程，并要形成二聚体才具生物活性，因此，诱导时间较长，但一经诱导合成，酶活性持续时间长[8]。本实验发现伤后3 h胃组织中iNOS活性明显高于伤前(P<0.01)，12 h达峰值，至72 h仍显著高于伤前。实验表明，烧伤后大鼠体内内毒素、IL-1、IL-6及TNF明显高于伤前，并持续很长时间[9]。在其不断刺激下iNOS活性始终处于很高水平，由于iNOS活性变化幅度远大于cNOS因此大鼠胃组织中NO含量也明显高于伤前，二者呈显著正相关。我们推测iNOS的过度表达可能与烧伤后胃肠道受损有关,因为高浓度的NO具有较强的细胞毒性。Laszlo等[10]在研究内毒素介导的肠道血管损伤中发现应用iNOS专一抑制剂氮G-单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)可明显减轻肠道损伤。上述结果均提示，烧伤后胃肠道的一系列病理改变与iNOS活性持续升高、cNOS活性下降密切相关，利用iNOS专一抑制剂降低iNOS活性和有效刺激NANC神经使cNOS活性保持正常水平,可能有利于减轻烧伤后胃肠道受损程度。
, http://www.100md.com
作者简介：颜 洪(1971-)，男，四川省成都市人，硕士，主治医师，主 要从事烧伤营养代谢方面的研究。电话：(023)68754148-8046
参考文献：
[1] Izzo A A, Mascolo N, Capasso F, et al. Nitric oxide as a modulator of intestinal water and electrolyte transport[J]. Dig Dis Sci，1998，43(8):16 05-16 20.
[2] Gonzalez-Bosc L V, Capani F, Lopez-Costa J J, et al. Atrial natriuretic peptide effect on NADPH-diaphorase in rat intestinal tract[J]. Peptides，1999， 20(5): 615-621.
, 百拇医药
[3] 朱佩芳.烧伤动物实验方法[A].见: 黎 鳌，杨宗城 主编.烧伤治疗学[M].第2版,北京:人民卫生出版社,1995.654-657.
[4] Douglas J, Wikthlin S L, Joseph J, et al. Gastrointestinal transit during endotoxemia: the role of nitric oxide[J]. J Surg Res,1996，60(2):307-312.
[5] Klemm K, Moody F G. Regional intestinal blood flow and nitric oxide synthase inhibition during sepsis in the rat[J]. Ann Surg，1998，227(1): 126-133.
[6] Yugai Y, Price K J, Bersimbayev R I, et al. Effect of lipolysaccharide on nitric oxide synthase activity in muscle layers of the rat small and large intestine[J]. Biochem Soc Trans. 1997，25(3): 395-403.
, 百拇医药
[7] Nichols K, Krantis A, Staines W. Histochemical localization of nitric oxide-synthesizing neurons and vascular sites in the guinea pig intestine[J]. Neurosci, 1992，50(4):791-802.
[8] Spain D A, Fruchterman T M, Matheson P J, et al. Complement activation mediates intestinal injury after resuscitation from hemorrhagic shock[J]. J Trauma，1999，46(2): 224-233.
[9] Tilton R G, Chang K C, LeJeune W S, et al. Role for nitric oxide in the hyperpermeability and hemodynamic changes induced by intravenous VEGF[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci，1999，40(3): 689-696.
[10] Laszlo F, Whittle B J, Moncada S. Time-dependent enhancement or inhibition of endotoxin-induced vascular injury in rat intestine by nitric oxide synthase inhibitors[J]. Br J Pharmacol, 1994，111(4):1 309-1 315.
收稿日期：2000-06-08；修回日期：2000-09-24, 百拇医药
单位：第三军医大学附属西南医院烧伤研究所，重庆 400038
关键词：一氧化氮；一氧化氮合酶；胃；大鼠；烧伤
第三军医大学学报001202
提 要： 目的 研究烧伤后大鼠胃组织中一氧化氮合酶(NOS)的变化及与一氧化氮(NO)的关系。方法 采用30%TBSAⅢ度烧伤大鼠模型，分别检测了胃组织中NO含量及原生型NOS(cNOS)和诱导型NOS(iNOS)的活性，并分析了NO的变化规律及其与两型NOS之间的关系。结果 烧伤后胃组织中iNOS活性大幅上升，与NO的变化趋势一致，二者呈显著正相关(r=0.94, P<0.01),而cNOS活性呈下降趋势，与NO相关不显著(r=-0.53, P>0.05)。结论 烧伤后胃组织中NO的变化主要受iNOS活性影响，iNOS活性上升，cNOS活性下降可能与烧伤后胃肠道病理变化密切相关。
, 百拇医药
中图法分类号： R345.44;R644.02 文献标识码： A
文章编号：1000-5404(2000)12-1126-03
Alterations of nitric oxide synthase in gastric tissues of burned rats
YAN Hong, PENG Xi, WANG Shi-liang, Wang Pei
(Institute of Burns Research, Southwest Hospital, Third Military Medical University, Chongqing 400038, China)
Abstract： Objective To study the changes of nitric oxide synthase (NOS) after burns and its relationship with nitric oxide (NO) in stomach of rats. Methods Wistar rats with 30% TBSA full thickness burns were used as models, the activity of inducible NOS (iNOS) and constitute NOS (cNOS) as well as the content of NO in gastric tissues were detected. Results The iNOS activity and the content of NO were increased significantly after burn injury, and there was a positive correlation between them (r=0.94, P<0.01). On the other hand, the cNOS activity was decreased remarkedly, it has no correlation with the NO (r=-0.53, P>0.05). Conclusion The changes of NO in gastric tissues is mainly affected by iNOS activity. The changes of activity of iNOS and cNOS are related with some pathological changes in stomach after burns.
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Key words： nitric oxide; nitric oxide synthase; stomach; rat; burn
严重烧伤可引起胃肠道运动紊乱，血液循环障碍，胃肠粘膜上皮坏死脱落等病理变化[1]。有人认为某些神经递质的变化是导致上述病理过程的重要因素[2]。近年来研究表明一氧化氮(Nitric oxide, NO)是胃肠道中非肾上腺素能非胆碱能(Nonadrenergic noncholinergic, NANC)神经的抑制性递质，广泛参与胃肠生理功能。关于烧伤后肠道NO的变化规律特别是与胃组织中不同类型的一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)之间的关系尚未见报道。为此，本实验以烧伤大鼠为模型，动态观察了胃组织中NO含量及原生型NOS(Constitute NOS,cNOS)和诱导型NOS(Inducible NOS,iNOS)的变化规律，分析了它们之间的相互关系，并对其病理生理学意义进行初步讨论。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 动物分组及致伤
健康成年Wistar大鼠80只，雌雄不拘，体重(220±30)g，随机分为正常对照及伤后1、3、6、12、24、48、72 h共8组，每组8只,除正常对照组外,其余各组均按本所建立的方法致成背部30%TBSAⅢ度烧伤[3]。
1.2 NO的测定
采用深圳晶美公司提供的NO试剂盒测定胃组织中NO的浓度，具体操作严格按说明书进行。
1.3 NOS活性测定
于各时相点活杀大鼠，迅速取胃并沿胃大弯剪开，用预冷的0.01 mol/LPBS(pH 7.4)冲洗干净，在胃窦处取一块组织约200 mg(每只大鼠取材部位尽量一致)，滤纸吸干精确称量后加入3ml NOS提取液，内含50 mmol/LHepes，0.1 g/LPMSF，0.5 mmol/LEDTA，1mmol/LDTT，320mmol/L蔗糖，0.1 g/L亮肽素，0.1 g/L胰蛋白酶抑制剂，0.02 g/L抑肽酶。冰浴匀浆，4℃，100 000×g，离心30 min，收集上清液即为NOS提取物，置-30 ℃保存，1周内测试。
, 百拇医药
取NOS提取液0.6 ml加入反应液约2.4 ml，包括0.6 ml(1 mmol/L)CaCl2，0.6 ml(5 mmol/L)MgCl2，0.6 ml(250 mmol/L)L-缬氨酸，0.6 ml(0.2 mol/L)PBS，10 μl(480 μmol/L)HbO2，10 μl(30 mmol/L)NADPH。37℃水浴10 min，加入10 μl(30 mmol/L)L-精氨酸，立即计时，每30 s测量1次，采用双波长λ 401-421 nm，共测量3 min。按Douglas[4]的方法计算总NOS活性，在反应液中除去CaCl2，并加入10 μl(6 mmol/L)EGTA，使依赖Ca2+的cNOS失活，可测得iNOS的活性，用总NOS减去iNOS即为cNOS活性。
1.4 统计学处理
按华西医科大学PEMS程序作统计学处理，结果以
±s表示，做t检验和相关分析。, http://www.100md.com
2 结果
烧伤早期胃组织中NO含量上升，与NOS总活性上升趋势一致，烧伤后胃组织中iNOS活性大幅上升，而cNOS活性呈下降趋势，见表1；烧伤后胃组织中NO含量同iNOS活性呈显著正相关(r=0.94,P<0.01)，而与cNOS相关不显著(r=-0.53, P>0.05)。
表1 烧伤后大鼠胃组织中NO及NOS活性的变化(
±s)Fig 1 Change of NO and NOS in gastric tissues of
burned rats(
±s) Group, http://www.100md.com
n
NO
(ωB/μg.g-1)
cNOS
(nmol.min-1.g-1)
iNOS
(nmol.min-1.g-1)
Total NOS
(nmol.min-1.g-1)
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Control
8
30.47±3.32
3.32±0.42
0.46±0.16
3.51±0.55
PB 1 h
8
24.21±3.69
2.26±0.38*
0.72±0.17
3.12±0.51
, http://www.100md.com
PB 3 h
8
37.98±3.58*
1.37±0.46* *
3.67±0.49* *
5.11±0.67*
PB 6 h
8
45.43±6.32* *
1.14±0.21* *
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4.52±1.02* *
5.28±1.12*
PB 12 h
8
47.96±7.32* *
1.38±0.23* *
6.13±1.14* *
7.34±1.06* *
PB 24 h
8
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40.32±3.41*
2.01±0.23* *
3.76±0.65* *
5.87±0.63* *
PB 48 h
8
38.83±4.53*
2.64±0.53
3.52±0.51* *
6.34±0.84* *
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PB 72 h
8
38.48±4.27*
2.75±0.43
3.79±0.64* *
6.66±0.98* *
PB：Post burn; *:P<0.05, * *: P<0.01 vs control
3 讨论
文献报道NOS分为两类3型同功酶，包括脑型(Ⅰ型)和内皮细胞型(Ⅲ型)同功酶，它们属于cNOS，另一种为iNOS，主要来源于巨噬细胞(Ⅱ型)。它们之间在区域分布、生化特点及生理功能方面均存在较大差异[5]。cNOS主要分布于神经细胞和血管内皮细胞中，由它催化生成的NO主要起神经递质和第二信使的作用；iNOS主要分布于巨噬细胞、内皮细胞等处,催化生成的NO具有细胞毒作用，参与介导免疫反应。由此推测烧伤后胃肠道血液灌流不良，运动功能紊乱及粘膜受损可能与烧伤后胃肠道NO含量增加及不同类型的NOS活性异常有关。为此，本实验着重观察了胃组织中iNOS和cNOS活性的变化规律及其与NO含量的关系。结果显示烧伤后胃组织中iNOS和cNOS的变化规律相反，iNOS呈上升趋势，与NO的变化规律一致，二者呈显著正相关(r=0.94,P<0.01)，而cNOS&127;则呈下降趋势,与NO相关不显著(r=-0.53,P>0.05)。提示烧伤后胃组织中NO含量的变化主要受iNOS活性的影响。
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由于NO半衰期短，仅在局部发挥生物学效应，故NOS的分布与NO的生理功能密切相关。目前已知，cNOS广泛分布于消化道壁内神经丛中，其产物NO是消化道中NANC神经的抑制性递质，可引起胃肠道血管扩张和平滑肌松弛[6]。Niclos等[7]采用组织化学染色发现NOS阳性神经穿行于胃肠道平滑肌之间，其中肌间神经丛中NOS阳性神经元密度最高，粘膜下层和小血管周围也有较密集的NOS阳性神经元。烧伤刺激引起肾上腺素能神经兴奋，使NANC神经受到抑制，导致主要分布于NANC神经中的cNOS活性下降，由其催化产生的NO也随之下降，引起平滑肌过度收缩，可能是导致胃肠道血液灌流不良和运动功能障碍的重要原因。由于cNOS的活性调节主要由神经系统支配，故伤后1 h就发现cNOS活性低于伤前水平，伤后6 h达最低值。此后，随着NANC神经受抑状态的逐步解除，cNOS活性于伤后48 h接近伤前水平。生理状况下胃组织中iNOS活性极低，只有在内毒素及γ-干扰素、IL-1、IL-6和TNF等多种细胞因子的作用下，iNOS才被激活表达酶活力。iNOS的诱生涉及基因转录、蛋白质合成等过程，并要形成二聚体才具生物活性，因此，诱导时间较长，但一经诱导合成，酶活性持续时间长[8]。本实验发现伤后3 h胃组织中iNOS活性明显高于伤前(P<0.01)，12 h达峰值，至72 h仍显著高于伤前。实验表明，烧伤后大鼠体内内毒素、IL-1、IL-6及TNF明显高于伤前，并持续很长时间[9]。在其不断刺激下iNOS活性始终处于很高水平，由于iNOS活性变化幅度远大于cNOS因此大鼠胃组织中NO含量也明显高于伤前，二者呈显著正相关。我们推测iNOS的过度表达可能与烧伤后胃肠道受损有关,因为高浓度的NO具有较强的细胞毒性。Laszlo等[10]在研究内毒素介导的肠道血管损伤中发现应用iNOS专一抑制剂氮G-单甲基-L-精氨酸(L-NMMA)可明显减轻肠道损伤。上述结果均提示，烧伤后胃肠道的一系列病理改变与iNOS活性持续升高、cNOS活性下降密切相关，利用iNOS专一抑制剂降低iNOS活性和有效刺激NANC神经使cNOS活性保持正常水平,可能有利于减轻烧伤后胃肠道受损程度。
, http://www.100md.com
作者简介：颜 洪(1971-)，男，四川省成都市人，硕士，主治医师，主 要从事烧伤营养代谢方面的研究。电话：(023)68754148-8046
参考文献：
[1] Izzo A A, Mascolo N, Capasso F, et al. Nitric oxide as a modulator of intestinal water and electrolyte transport[J]. Dig Dis Sci，1998，43(8):16 05-16 20.
[2] Gonzalez-Bosc L V, Capani F, Lopez-Costa J J, et al. Atrial natriuretic peptide effect on NADPH-diaphorase in rat intestinal tract[J]. Peptides，1999， 20(5): 615-621.
, 百拇医药
[3] 朱佩芳.烧伤动物实验方法[A].见: 黎 鳌，杨宗城 主编.烧伤治疗学[M].第2版,北京:人民卫生出版社,1995.654-657.
[4] Douglas J, Wikthlin S L, Joseph J, et al. Gastrointestinal transit during endotoxemia: the role of nitric oxide[J]. J Surg Res,1996，60(2):307-312.
[5] Klemm K, Moody F G. Regional intestinal blood flow and nitric oxide synthase inhibition during sepsis in the rat[J]. Ann Surg，1998，227(1): 126-133.
[6] Yugai Y, Price K J, Bersimbayev R I, et al. Effect of lipolysaccharide on nitric oxide synthase activity in muscle layers of the rat small and large intestine[J]. Biochem Soc Trans. 1997，25(3): 395-403.
, 百拇医药
[7] Nichols K, Krantis A, Staines W. Histochemical localization of nitric oxide-synthesizing neurons and vascular sites in the guinea pig intestine[J]. Neurosci, 1992，50(4):791-802.
[8] Spain D A, Fruchterman T M, Matheson P J, et al. Complement activation mediates intestinal injury after resuscitation from hemorrhagic shock[J]. J Trauma，1999，46(2): 224-233.
[9] Tilton R G, Chang K C, LeJeune W S, et al. Role for nitric oxide in the hyperpermeability and hemodynamic changes induced by intravenous VEGF[J]. Invest Ophthalmol Vis Sci，1999，40(3): 689-696.
[10] Laszlo F, Whittle B J, Moncada S. Time-dependent enhancement or inhibition of endotoxin-induced vascular injury in rat intestine by nitric oxide synthase inhibitors[J]. Br J Pharmacol, 1994，111(4):1 309-1 315.
收稿日期：2000-06-08；修回日期：2000-09-24, 百拇医药