植物一内生真菌次生代谢产物的研究(Ⅰ)
作者：于能江 郭顺星
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研 究所 北京 100094
关键词：
中草药001208
我们从野生兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl. 的根中分得数 百种植物内生真菌，其中一种经培养鉴定为头孢霉属Cephalosporium Cos t. 真菌，发现它对植物有促生作用，进一步的药理初筛还显示具有心血管方面的活性。为 了阐明其生物及生理活性的物质基础，我们对其次生代谢产物进行了较系统的研究。
该内生真菌经液体摇瓶发酵后，经过滤分成发酵液和菌丝体两部分。发酵液丁醇萃取部分经 柱层析分得5 个单体化合物，经光谱(EI-MS，1H、13CNMR，IR)分析 和 物理方法鉴定为正丁基-β-D-吡喃果糖苷(n-butyl -β-D-fructopyranoside, Ⅰ)，琥珀酸(butanedioic acid, Ⅱ)，尿 嘧啶(uracil, Ⅲ)，meso-赤醇(mest-erythritol, Ⅳ)，甘露醇(D-ma nnitol, Ⅴ)，其中Ⅰ首次在真菌中发现。
, 百拇医药
1 仪器和材料
X-4型显微熔点仪(温度计未校正)，Pekin-Elmer 983 G型红外光谱测定仪(KBr 压片)， A EI MS-50型质谱仪，Bruck ARX 400 型核磁共振光谱仪(TMS内标)。层析用硅胶(100～200 目)由青岛海洋化工厂出品。
菌种由野生兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl. 的根中分离得 到；经培养鉴定为头孢霉属(Cephalosporium Cost.)的真菌(有性时代尚 未发现)。
2 发酵培养
采用平皿转摇瓶液体培养的方法。培养基：麦麸30 g，葡萄糖20 g，KH2PO4 0.75 g， M gSO4 1.5 g，加水至1 000 mL；温度：25 ℃；转速120 r/min；共得发酵液约500 L，浓缩成约5 L。
, 百拇医药
3 提取和分离
于发酵浓缩液中加入95%乙醇醇沉，放置，取上清液(乙醇浓度大于80%)，残渣用适量水分 散后，如前处理。反复4 次，合并上清液，浓缩后分配在水中，依次用石油醚、二氯甲烷、 乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇萃取部分110 g用粗孔硅胶1.5 kg湿法装柱，以氯仿至氯仿 -甲醇(1∶1)梯度洗脱，每份500 mL，共收120 流分。第22～28流分合并，丙酮重结晶得Ⅱ 200 mg，第44～47流分合并，甲醇重结晶得Ⅰ260 mg，第66～82、98～104流分合并，甲醇 -水重结晶得Ⅳ3.1 g、Ⅴ180 mg。第29～42流分粗品10 g用硅胶柱层析(200 g)，氯仿- 甲醇(95∶5至9∶1)梯度洗脱，合并39～42流分，甲醇洗得粉末Ⅲ21 mg。
4 结构鉴定
化合物Ⅰ：C10H20O6，无色针状结晶，mp 152 ℃～154 ℃，易溶于甲醇和 水，Molish反应阳性。IRνKBrmaxcm-1：3 425～3 420(OH)， 2 954，2 875，1 374(CH3)，2 930，2 870，1 447(CH2)， 1 372，1 334，1 260，1 191，1 120，1 056，1 016，952 ，908，860，772。EI-MS m/z(%)：205(65)，163(8)，149(65)，145(8)，133(15)，127(6 )，115(8)，103(47)，85(45)，77(73)，73(82)，71(31)，69(21)，60(76)，57(100)，49( 17)，45(37)，43(97)，41(78)，31(82)。1HNMR(D2O)δ：0.90(3H，m，CH3)， 1. 36(2H，m，CH2-9)，1.55(2H，m，CH2-8)，3.51(2H，m，CH2-7)，3.71(1H，d d， Ha-6)，3.84(1H，dd，Hb-6)，3.78(2H，s，H-1)，3.91(2H，br.s，H-4，5)，3. 98(1H ，br.s，H-3)。13CNMR δ：60.9(C-1)，100.1(C-2)，67.9(C-3，)68.8(C-4)，69.3(C-5)，60.9(C-6)，60.5(C-7)，31.0(C-8)，18.5(C-9)， 12.8(C-10)。以 上数据与文献报道的正丁基-β-D-吡喃果糖苷相符合[1]。
, http://www.100md.com
化合物Ⅱ：无色针晶，mp 185 ℃～187 ℃，易溶于甲醇和水。IR，EIMS，1H、 13CNMR数据与文献[2]报道的琥珀酸相符合。
化合物Ⅲ：淡黄色粉末，mp>320 ℃，溶于吡啶和DMSO。EIMS，1HNMR与文献[3 ]报道的尿嘧啶相符合。
化合物Ⅳ：无色块状结晶，mp 119 ℃～121 ℃，微溶于甲醇，易溶于水。IR，1H、 13CNMR数据与文献[4]报道的meso-赤醇相符合。
化合物Ⅴ：无色针晶，mp 166 ℃～168 ℃，与甘露醇标准品测混合熔点不下降，IR数据与 文献[5]报道的甘露醇相符合。
, 百拇医药 于能江 1997年毕业于同济医科大学，获理学学士学位。现为中国医学科学院中国 协和医科大学药用植物研究所博士研究生。
参 考 文 献
1，宋治中，贾忠建.中草药，1990，21(12)：4
2，国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册，北京：人民卫生出 版社，1986：1003
3，赵余庆，袁昌鲁.中国中药杂志，1991，16(7)：421
4，Ritchie R G, Cyr Natsuko, Rorsch Brian, et al. Can J Chen, 1975,53:1424
5，国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册，北京：人民卫生出 版社，1986：697
(1999-10-27收稿), 百拇医药
单位：中国医学科学院 中国协和医科大学 药用植物研 究所 北京 100094
关键词：
中草药001208
我们从野生兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl. 的根中分得数 百种植物内生真菌，其中一种经培养鉴定为头孢霉属Cephalosporium Cos t. 真菌，发现它对植物有促生作用，进一步的药理初筛还显示具有心血管方面的活性。为 了阐明其生物及生理活性的物质基础，我们对其次生代谢产物进行了较系统的研究。
该内生真菌经液体摇瓶发酵后，经过滤分成发酵液和菌丝体两部分。发酵液丁醇萃取部分经 柱层析分得5 个单体化合物，经光谱(EI-MS，1H、13CNMR，IR)分析 和 物理方法鉴定为正丁基-β-D-吡喃果糖苷(n-butyl -β-D-fructopyranoside, Ⅰ)，琥珀酸(butanedioic acid, Ⅱ)，尿 嘧啶(uracil, Ⅲ)，meso-赤醇(mest-erythritol, Ⅳ)，甘露醇(D-ma nnitol, Ⅴ)，其中Ⅰ首次在真菌中发现。
, 百拇医药
1 仪器和材料
X-4型显微熔点仪(温度计未校正)，Pekin-Elmer 983 G型红外光谱测定仪(KBr 压片)， A EI MS-50型质谱仪，Bruck ARX 400 型核磁共振光谱仪(TMS内标)。层析用硅胶(100～200 目)由青岛海洋化工厂出品。
菌种由野生兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl. 的根中分离得 到；经培养鉴定为头孢霉属(Cephalosporium Cost.)的真菌(有性时代尚 未发现)。
2 发酵培养
采用平皿转摇瓶液体培养的方法。培养基：麦麸30 g，葡萄糖20 g，KH2PO4 0.75 g， M gSO4 1.5 g，加水至1 000 mL；温度：25 ℃；转速120 r/min；共得发酵液约500 L，浓缩成约5 L。
, 百拇医药
3 提取和分离
于发酵浓缩液中加入95%乙醇醇沉，放置，取上清液(乙醇浓度大于80%)，残渣用适量水分 散后，如前处理。反复4 次，合并上清液，浓缩后分配在水中，依次用石油醚、二氯甲烷、 乙酸乙酯、正丁醇萃取。正丁醇萃取部分110 g用粗孔硅胶1.5 kg湿法装柱，以氯仿至氯仿 -甲醇(1∶1)梯度洗脱，每份500 mL，共收120 流分。第22～28流分合并，丙酮重结晶得Ⅱ 200 mg，第44～47流分合并，甲醇重结晶得Ⅰ260 mg，第66～82、98～104流分合并，甲醇 -水重结晶得Ⅳ3.1 g、Ⅴ180 mg。第29～42流分粗品10 g用硅胶柱层析(200 g)，氯仿- 甲醇(95∶5至9∶1)梯度洗脱，合并39～42流分，甲醇洗得粉末Ⅲ21 mg。
4 结构鉴定
化合物Ⅰ：C10H20O6，无色针状结晶，mp 152 ℃～154 ℃，易溶于甲醇和 水，Molish反应阳性。IRνKBrmaxcm-1：3 425～3 420(OH)， 2 954，2 875，1 374(CH3)，2 930，2 870，1 447(CH2)， 1 372，1 334，1 260，1 191，1 120，1 056，1 016，952 ，908，860，772。EI-MS m/z(%)：205(65)，163(8)，149(65)，145(8)，133(15)，127(6 )，115(8)，103(47)，85(45)，77(73)，73(82)，71(31)，69(21)，60(76)，57(100)，49( 17)，45(37)，43(97)，41(78)，31(82)。1HNMR(D2O)δ：0.90(3H，m，CH3)， 1. 36(2H，m，CH2-9)，1.55(2H，m，CH2-8)，3.51(2H，m，CH2-7)，3.71(1H，d d， Ha-6)，3.84(1H，dd，Hb-6)，3.78(2H，s，H-1)，3.91(2H，br.s，H-4，5)，3. 98(1H ，br.s，H-3)。13CNMR δ：60.9(C-1)，100.1(C-2)，67.9(C-3，)68.8(C-4)，69.3(C-5)，60.9(C-6)，60.5(C-7)，31.0(C-8)，18.5(C-9)， 12.8(C-10)。以 上数据与文献报道的正丁基-β-D-吡喃果糖苷相符合[1]。
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化合物Ⅱ：无色针晶，mp 185 ℃～187 ℃，易溶于甲醇和水。IR，EIMS，1H、 13CNMR数据与文献[2]报道的琥珀酸相符合。
化合物Ⅲ：淡黄色粉末，mp>320 ℃，溶于吡啶和DMSO。EIMS，1HNMR与文献[3 ]报道的尿嘧啶相符合。
化合物Ⅳ：无色块状结晶，mp 119 ℃～121 ℃，微溶于甲醇，易溶于水。IR，1H、 13CNMR数据与文献[4]报道的meso-赤醇相符合。
化合物Ⅴ：无色针晶，mp 166 ℃～168 ℃，与甘露醇标准品测混合熔点不下降，IR数据与 文献[5]报道的甘露醇相符合。
, 百拇医药 于能江 1997年毕业于同济医科大学，获理学学士学位。现为中国医学科学院中国 协和医科大学药用植物研究所博士研究生。
参 考 文 献
1，宋治中，贾忠建.中草药，1990，21(12)：4
2，国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册，北京：人民卫生出 版社，1986：1003
3，赵余庆，袁昌鲁.中国中药杂志，1991，16(7)：421
4，Ritchie R G, Cyr Natsuko, Rorsch Brian, et al. Can J Chen, 1975,53:1424
5，国家医药管理局中草药情报中心站编.植物药有效成分手册，北京：人民卫生出 版社，1986：697
(1999-10-27收稿), 百拇医药