中药关木通中总马兜铃酸的含量测定
作者：尚明英 李军 胡波 杨珊 李长龄 郑俊华
单位：北京大学药学院 100083
关键词：关木通；马兜铃酸；分光光度法
中草药001210
摘 要 目的：测定关木通中总马兜铃酸的含量，保证临床用药安全有 效。方法：紫外分光光度法，检测波长为310 nm。结果：20 批关木通样品中总马兜铃酸含 量为0.63%～2.84%。结论：各地所用商品关木通中总马兜铃酸含量差异较大，且与药材性 状具一定关系。
Determination of Total Aristolochic Acid in the Stem of Aristolochia manshuriensis
Shang Mingying Li Jun Hu Bo Yang Shan Li Changling and Zheng Junhua
, 百拇医药
(College of Pharmacy, Beijing University Beijing 100083)
Abstract To determine the content of total aristolochic acid in the stem of Aristolochia manshuriensis Kom. for the purpose to ensure clinical safety and therapeutic efficacy. 20 samples of the stems of A. manshuriensis bought from the market were analyzed by ultrav i olet spectrophotometry and detected at a wave length of 310 nm. Their total ari s tolochic acid contents varied from 0.63%～2.84%. Commercial samples of A . manshuriensis used in different localities varied markedly in their t o tal aristolochic acid contents, and seemed to be closely related with the morpho logy of crude drugs.
, 百拇医药
Key words Aristolochia manshuriensis Kom. total aristolochic acid spectrophotometry
关木通为常用中药，具有清心火、利小便、通经下乳等功效[1]。马兜铃酸类成分 为关木通中的一类特征性成分，具有抗肿瘤及增强吞噬细胞活性等作用[2]，认为 该类成分为关木通的主要有效成分，但随着研究的深入，发现高剂量的马兜铃酸可致肾毒性 [3]。关木通中马兜铃酸Ⅰ的含量测定方法有分光光度法和HPLC法[4，5] ，而总酸的含量测定未见报道，因该类成分具有相似的化学结构和药理活性，为保证临床用 药安全有效，我们用紫外分光光度法对全国各地收集到的商品关木通中的总马兜铃酸的含量 进行了测定。
1 仪器与试药
UV-260 型紫外分光光度计(日本岛津)；754型分光光度计(上海分析仪器总厂)；马兜铃酸 Ⅰ为作者自关木通中提取、分离并鉴定；所用试剂均为分析纯。
, 百拇医药
中药样品：关木通20 件，经作者鉴定为马兜铃科植物东北马兜铃Aristolochia ma ndshuriensis Kom. 的干燥藤茎。见表1。
2 方法与结果
表1 商品关木通中总马兜铃酸的含量(%) 编号
来源
含量
编号
来源
含量
1
福建福州
1.59
, http://www.100md.com
11
甘肃兰州
0.74
2
吉林长春
2.84
12
山东莱芜
0.92
3
吉林长春
1.51
13
, 百拇医药
江苏连云港
1.36
4
新疆石河子
2.46
14
湖北宜昌
0.87
5
新疆乌鲁木齐
1.48
15
河南焦作
, 百拇医药
1.50
6
辽宁大石桥
1.04
16
山东蒙阴
0.63
7
河南滑县
1.19
17
北京海淀
0.64
, 百拇医药
8
江苏扬州
1.04
18
山西天镇
2.47
9
浙江诸暨
1.18
19
北京海淀
1.61
10
, 百拇医药
河南临颖
1.63
20
江西樟树
1.00
2.1 线性关系考察：精密称取马兜铃酸Ⅰ对照品，加甲醇溶解，配成 对照品溶液，浓度分 别为：0.004 6，0.009 2，0.013 8，0.018 4，0.023 0 mg/mL ，分 别于310 nm处测吸光度，回归方程为C=0.030 1A-5.065 9×10-4 ，r=0.999 8。
2.2 稳定性试验：取同一浓度的马兜铃酸Ⅰ对照品溶液，每隔一定时间测定一次，结果表 明其至少在24 h内稳定。
2.3 提取方法的选择：①精密称取关木通粗粉适量，加5%氨水50 mL，称重，冷渍过夜， 称重并补充至原重量，取续滤液10 mL，加6 mol/L盐酸至pH=2，乙醚萃取4 次，合并醚层， 用20 mL水洗至中性，回收乙醚，加甲醇溶解并稀释至25 mL，取1 mL加甲醇稀释至10 mL， 供分析用。
, 百拇医药
②精密称取关木通粗粉适量，加10%含甲酸的丙酮50 mL，置沙氏提取器中提取至提取液近无 色 ，回收溶媒，残渣用0.5%氢氧化钠15 mL溶解并转移至分液漏斗中(pH=10)，用乙醚萃取2 次 ，每次15 mL，萃取后的碱液用3.6%硫酸溶液调pH=2，乙醚萃取4 次，合并醚层，回收乙醚 ，加甲醇溶解并稀释至25 mL，取1 mL加甲醇稀释至10 mL，供分析用。
③精密称取关木通粗粉适量，加甲醇50 mL，超声提取30 min，提取液供分析用。
④精密称取关木通粗粉适量，加甲醇50 mL，置索氏提取器中提取至近无色，提取液供分析 用。
根据以上4 种供试液的紫外光谱和对照品马兜铃酸Ⅰ比较，结果表明以①法提取效果最好。
表2 不同提取方法的比较 提取方法
, 百拇医药
①
②
③
④
总酸含量(%)
2.86
1.90
2.75
2.96
2.4 回收率试验：精密称取同一样品8 份，其中6 份加入一定量的马兜铃酸Ⅰ对照品，按 ①法制备供试品溶液，测定吸光度计算回收率。结果加样回收率为98.5%，RSD=2.04%(n=6)。
2.5 样品测定：精密称取关木通粗粉适量，按①法制备供试品溶液，测定吸光度并计算含 量，结果见表1。
, http://www.100md.com
3 讨论
3.1 关木通中含有木兰碱，干扰马兜铃酸类成分的测定，我们采用经酸、碱处理、有机溶 媒萃取纯化，以消除木兰碱的干扰，结果表明以氨水提取，酸化后用乙醚萃取效果最好。
3.2 不同来源的关木通中总马兜铃酸的含量差异较大，其中样品2 未去栓皮，总酸含量较 高。故我们认为栓皮中马兜酸类成分的含量较高；样品16中含量最低，结合药材的外观质量 ，发现该样品可能因为在采收加工或贮运过程中生霉，药材变黑，致使总酸含量降低。
3.3 文献报道，大鼠口服马兜铃酸的LD50平均为193.7 mg/kg；药典规定关木通的 用量为3～6 g，按6 g计算，治疗指数大于10 为安全可靠，马兜铃酸的含量不得高于4.85% 。故只要合理控制关木通的用量，均不至于引起马兜铃酸中毒。
Address： Shang Mingying, College of Pharmacy, Beijing University , Beijing
, 百拇医药
国家“九.五”攻关项目 No.96-903-02-02
参 考 文 献
1，中华人民共和国药典.一部.1995：124
2，丁林生，楼风昌.中草药，1983，14：424
3，Mengs U, Stotzem C D. Med Sci Res, 1992,20:203
4，Patt P. Arzneimittel Forsch, 1965,15:90
5，谭生建，杨国芬，梁玉琴，等.中国中药杂志，1993，18(3)：169
(2000-01-07收稿), http://www.100md.com
单位：北京大学药学院 100083
关键词：关木通；马兜铃酸；分光光度法
中草药001210
摘 要 目的：测定关木通中总马兜铃酸的含量，保证临床用药安全有 效。方法：紫外分光光度法，检测波长为310 nm。结果：20 批关木通样品中总马兜铃酸含 量为0.63%～2.84%。结论：各地所用商品关木通中总马兜铃酸含量差异较大，且与药材性 状具一定关系。
Determination of Total Aristolochic Acid in the Stem of Aristolochia manshuriensis
Shang Mingying Li Jun Hu Bo Yang Shan Li Changling and Zheng Junhua
, 百拇医药
(College of Pharmacy, Beijing University Beijing 100083)
Abstract To determine the content of total aristolochic acid in the stem of Aristolochia manshuriensis Kom. for the purpose to ensure clinical safety and therapeutic efficacy. 20 samples of the stems of A. manshuriensis bought from the market were analyzed by ultrav i olet spectrophotometry and detected at a wave length of 310 nm. Their total ari s tolochic acid contents varied from 0.63%～2.84%. Commercial samples of A . manshuriensis used in different localities varied markedly in their t o tal aristolochic acid contents, and seemed to be closely related with the morpho logy of crude drugs.
, 百拇医药
Key words Aristolochia manshuriensis Kom. total aristolochic acid spectrophotometry
关木通为常用中药，具有清心火、利小便、通经下乳等功效[1]。马兜铃酸类成分 为关木通中的一类特征性成分，具有抗肿瘤及增强吞噬细胞活性等作用[2]，认为 该类成分为关木通的主要有效成分，但随着研究的深入，发现高剂量的马兜铃酸可致肾毒性 [3]。关木通中马兜铃酸Ⅰ的含量测定方法有分光光度法和HPLC法[4，5] ，而总酸的含量测定未见报道，因该类成分具有相似的化学结构和药理活性，为保证临床用 药安全有效，我们用紫外分光光度法对全国各地收集到的商品关木通中的总马兜铃酸的含量 进行了测定。
1 仪器与试药
UV-260 型紫外分光光度计(日本岛津)；754型分光光度计(上海分析仪器总厂)；马兜铃酸 Ⅰ为作者自关木通中提取、分离并鉴定；所用试剂均为分析纯。
, 百拇医药
中药样品：关木通20 件，经作者鉴定为马兜铃科植物东北马兜铃Aristolochia ma ndshuriensis Kom. 的干燥藤茎。见表1。
2 方法与结果
表1 商品关木通中总马兜铃酸的含量(%) 编号
来源
含量
编号
来源
含量
1
福建福州
1.59
, http://www.100md.com
11
甘肃兰州
0.74
2
吉林长春
2.84
12
山东莱芜
0.92
3
吉林长春
1.51
13
, 百拇医药
江苏连云港
1.36
4
新疆石河子
2.46
14
湖北宜昌
0.87
5
新疆乌鲁木齐
1.48
15
河南焦作
, 百拇医药
1.50
6
辽宁大石桥
1.04
16
山东蒙阴
0.63
7
河南滑县
1.19
17
北京海淀
0.64
, 百拇医药
8
江苏扬州
1.04
18
山西天镇
2.47
9
浙江诸暨
1.18
19
北京海淀
1.61
10
, 百拇医药
河南临颖
1.63
20
江西樟树
1.00
2.1 线性关系考察：精密称取马兜铃酸Ⅰ对照品，加甲醇溶解，配成 对照品溶液，浓度分 别为：0.004 6，0.009 2，0.013 8，0.018 4，0.023 0 mg/mL ，分 别于310 nm处测吸光度，回归方程为C=0.030 1A-5.065 9×10-4 ，r=0.999 8。
2.2 稳定性试验：取同一浓度的马兜铃酸Ⅰ对照品溶液，每隔一定时间测定一次，结果表 明其至少在24 h内稳定。
2.3 提取方法的选择：①精密称取关木通粗粉适量，加5%氨水50 mL，称重，冷渍过夜， 称重并补充至原重量，取续滤液10 mL，加6 mol/L盐酸至pH=2，乙醚萃取4 次，合并醚层， 用20 mL水洗至中性，回收乙醚，加甲醇溶解并稀释至25 mL，取1 mL加甲醇稀释至10 mL， 供分析用。
, 百拇医药
②精密称取关木通粗粉适量，加10%含甲酸的丙酮50 mL，置沙氏提取器中提取至提取液近无 色 ，回收溶媒，残渣用0.5%氢氧化钠15 mL溶解并转移至分液漏斗中(pH=10)，用乙醚萃取2 次 ，每次15 mL，萃取后的碱液用3.6%硫酸溶液调pH=2，乙醚萃取4 次，合并醚层，回收乙醚 ，加甲醇溶解并稀释至25 mL，取1 mL加甲醇稀释至10 mL，供分析用。
③精密称取关木通粗粉适量，加甲醇50 mL，超声提取30 min，提取液供分析用。
④精密称取关木通粗粉适量，加甲醇50 mL，置索氏提取器中提取至近无色，提取液供分析 用。
根据以上4 种供试液的紫外光谱和对照品马兜铃酸Ⅰ比较，结果表明以①法提取效果最好。
表2 不同提取方法的比较 提取方法
, 百拇医药
①
②
③
④
总酸含量(%)
2.86
1.90
2.75
2.96
2.4 回收率试验：精密称取同一样品8 份，其中6 份加入一定量的马兜铃酸Ⅰ对照品，按 ①法制备供试品溶液，测定吸光度计算回收率。结果加样回收率为98.5%，RSD=2.04%(n=6)。
2.5 样品测定：精密称取关木通粗粉适量，按①法制备供试品溶液，测定吸光度并计算含 量，结果见表1。
, http://www.100md.com
3 讨论
3.1 关木通中含有木兰碱，干扰马兜铃酸类成分的测定，我们采用经酸、碱处理、有机溶 媒萃取纯化，以消除木兰碱的干扰，结果表明以氨水提取，酸化后用乙醚萃取效果最好。
3.2 不同来源的关木通中总马兜铃酸的含量差异较大，其中样品2 未去栓皮，总酸含量较 高。故我们认为栓皮中马兜酸类成分的含量较高；样品16中含量最低，结合药材的外观质量 ，发现该样品可能因为在采收加工或贮运过程中生霉，药材变黑，致使总酸含量降低。
3.3 文献报道，大鼠口服马兜铃酸的LD50平均为193.7 mg/kg；药典规定关木通的 用量为3～6 g，按6 g计算，治疗指数大于10 为安全可靠，马兜铃酸的含量不得高于4.85% 。故只要合理控制关木通的用量，均不至于引起马兜铃酸中毒。
Address： Shang Mingying, College of Pharmacy, Beijing University , Beijing
, 百拇医药
国家“九.五”攻关项目 No.96-903-02-02
参 考 文 献
1，中华人民共和国药典.一部.1995：124
2，丁林生，楼风昌.中草药，1983，14：424
3，Mengs U, Stotzem C D. Med Sci Res, 1992,20:203
4，Patt P. Arzneimittel Forsch, 1965,15:90
5，谭生建，杨国芬，梁玉琴，等.中国中药杂志，1993，18(3)：169
(2000-01-07收稿), http://www.100md.com
参见：首页 > 中医药 > 中药专业 > 中草药汇编 > 中药大典 > 果实类 > 马兜铃