一步亲和纯化制备基因工程人源抗HBs单克隆抗体Fab片段
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胡栋平；韩焕兴；尤长宣；罗荣城；毛庆民
抗体|单克隆|亲和层析|病毒性肝炎|乙型|肝炎抗体
参见附件(82kb)。
胡栋平；韩焕兴；尤长宣；罗荣城；毛庆民
关键词：抗体；单克隆；亲和层析；病毒性肝炎；乙型；肝炎抗体
摘要：目的:探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法:应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体(Anti-Fab)与链球菌蛋白G亲和胶(GammaBind)交联制备亲和层析柱,用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗HBs单克隆Fab片段。经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取IgG组分,木瓜酶处理后分离、纯化出Fab,免疫绵羊制备高效价抗血清。用GammaBind一步纯化出抗血清中的IgG组分,再将该IgG经交联剂与GammaBind交联后制成亲和胶。人源抗HBs阳性菌培养上清与亲和胶共育后装柱,PBS洗去非特异结合蛋白,再用5mol/L氯化锂洗脱特异Fab。结果:聚丙烯酰胺电泳纯化产物显示,纯化后的抗体片段在电泳中形成单一区带,达到电泳纯;用酶标抗Fab抗体免疫印迹结果证明,电泳显示的单一区带为Fab蛋白区带;抗原特异Dotblot检测表明,该法制备出的Fab保持了抗原结合活性。结论:本实验建立的一步亲和纯化法具操作简便、纯化快速和高效的特点,是人源性单克隆抗体Fab片段纯化的较佳方法。
胡栋平；韩焕兴；尤长宣；罗荣城；毛庆民
关键词：抗体；单克隆；亲和层析；病毒性肝炎；乙型；肝炎抗体
摘要：目的:探索亲和纯化人源单克隆抗体片段的简便实用方法。方法:应用自制的抗人免疫球蛋白片段抗体(Anti-Fab)与链球菌蛋白G亲和胶(GammaBind)交联制备亲和层析柱,用一步法从工程菌培养上清中纯化人源抗HBs单克隆Fab片段。经依沙吖啶沉淀、离子交换、分子筛纯化人混合血清提取IgG组分,木瓜酶处理后分离、纯化出Fab,免疫绵羊制备高效价抗血清。用GammaBind一步纯化出抗血清中的IgG组分,再将该IgG经交联剂与GammaBind交联后制成亲和胶。人源抗HBs阳性菌培养上清与亲和胶共育后装柱,PBS洗去非特异结合蛋白,再用5mol/L氯化锂洗脱特异Fab。结果:聚丙烯酰胺电泳纯化产物显示,纯化后的抗体片段在电泳中形成单一区带,达到电泳纯;用酶标抗Fab抗体免疫印迹结果证明,电泳显示的单一区带为Fab蛋白区带;抗原特异Dotblot检测表明,该法制备出的Fab保持了抗原结合活性。结论:本实验建立的一步亲和纯化法具操作简便、纯化快速和高效的特点,是人源性单克隆抗体Fab片段纯化的较佳方法。
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