自体肿瘤细胞疫苗辅助治疗结直肠癌的临床观察
辽宁省肿瘤研究所(辽宁沈阳110042)；辽宁省肿瘤医院 梁伟；孙铁民；李春玲；金雨；王辉
关键词：肛肠病；大肠癌；肿瘤细胞疫苗；生存率
摘要：为观察自体肿瘤细胞疫苗对术后Ⅰ～Ⅳ期结直肠癌患者的治疗效果，将患者分为对照组(单纯手术切除组)257例，疫苗组(手术加疫苗)310例。疫苗组的患者5,6,7年生存率分别 66.51%，60.52%，56.50%；对照组分别是45.57%，44.76%，43.42%。平均生存期，疫苗组为5.13年，中位生存期7年以上；对照组为4.15年，中位生存期4.46年，两组有显著性差异。疫苗组患者注射疫苗后的皮肤迟发性超敏反应(DTH)，硬结范围超过5mm的患者，5年生存率达80%，硬结范围小于5mm的患者仅为30%。结果表明，自体肿瘤细胞疫苗可延长患者生存时间，提高生存质量。
结直肠癌是一种分化程度较高的消化道恶性肿瘤，其手术切除率高，但在国内5年生存率却一直维持在50%以下水平，表明通过手术加放、化疗的方法治疗结直肠癌，难以进一步提高其生存率。应用自体肿瘤细胞疫苗(瘤苗)作为肿瘤术后治疗手段以提高生存率，在国内仅有小样本观察报道。国我肯长期观察报道的为美国东部协作组22所医院对Ⅱ、Ⅲ其结直肠癌患者应用瘤苗的观察，该文报道了患者注射疫苗后DTH阳性组5年生存率83%，阴性组仅30%。本文报道了我所研制的自体肿瘤细胞疫苗应用于结直肠癌Ⅰ～Ⅳ期310例术后患者与单纯手术组257例对照，随访7年，比较其生存率、中痊生存期、平均生存期，为自体肿瘤细胞疫苗的临床应用提供理论依据。
, 百拇医药
1、材料和方法
1.1临床资料 我院1993～1995年收治的567例结直肠癌患者，分成两组，随访年，其中术后应用自体肿瘤细胞疫苗组310例，男204例，女106例；年龄19～79岁，平均55.8岁。该组患者Miles术式136例，结肠术式98例，前切术式74例，局切术式2例。单纯手术组(对照组)257例，男155例，女102例；年龄18～77岁，平均55.1岁。该组患者Miles术式120例，结肠术式78例，前切术式59例。观察了20例肠癌术后瘤苗患者的DTH情况，其中男10例，女10例，该组病例为Ⅱ～Ⅲ期结肠癌术后患者，年龄35～65岁，平均52.7岁。随访结果见表1及表2，TNF分期见表3。
表1 1993～2000年结直肠癌患者术后应用瘤苗组生存情况随访结果
年份
例数
, 百拇医药
生存年数
0
1
2
3
4
5
6
7
1993～2000
50
50
50
44
, 百拇医药
39
35
31
31
29
1994～2000
133
133
125
104
94
90
85
, http://www.100md.com
75
0
1995～2000
127
126
126
116
106
98
93
0
0
合计
, 百拇医药 310
310
301
264
239
223
209
106
29
表2 1993～2000年结直肠癌患者单纯手术组生存情况随访结果
年份
例数
生存年数
, 百拇医药
0
1
2
3
4
5
6
7
1993～2000
73
73
71
60
54
, 百拇医药
41
35
34
33
1994～2000
94
94
85
68
56
47
43
43
, 百拇医药 0
1995～2000
90
90
84
69
57
50
47
0
0
合计
257
257
, http://www.100md.com
240
197
167
138
125
77
33
表3 结直肠癌患者术后应用瘤苗组与单纯手术组TNF分期组成情况
治疗方法
例数
TNF分期(%)
Ⅰ
Ⅱ
, http://www.100md.com
Ⅲ
Ⅳ
手术+瘤苗组
310
46(14.8)
121(39.0)
80(25.8)
63(20.3)
单纯手术组
257
55(21.4)
94(36.6)
, 百拇医药 66(25.7)
42(16.3)
合计
567
101
215
146
105
1.2材料及试剂 患者术后的癌组织标本(φ≥1cm)，榄香烯乳注射液(大连金港制药厂)，丝裂霉素C，25%戊二醛(E Merk)，RPMI1640完全培养基。
1.3方法 患者术后的无菌癌组织标本放于无菌容器内，在2h内送到实验室。按本室常规制备肿瘤细胞悬液后，加入丝裂霉素C1mg/ml，榄香烯0.3mg/ml，置37℃培养箱内0.5h，加热(42℃)30min，离心洗涤细胞悬液后，以0.0625%戊二醛固定10min，洗去固定液，制成无菌自体肿瘤细胞悬液(≥107/ml)。
, http://www.100md.com
1.4免疫程序
1.4.1首次免疫：患者术后1周开始第1次免疫注射，每周注射1次，共4次。
1.4.2强化免疫：首次免疫治疗后间隔1～2个月后，进行强化免疫。
1.4.3注射方法：选择上肢前臂或肩三角区皮肤，3点注射，每点相距3～5cm，皮内1点约0.2ml，皮下2点，每点约0.4ml。
1.5DTH试验 该项试验在结直肠癌术后患者应用瘤苗前和应用瘤苗2周以后进行，以蒸馏水作对照，72h后观察局部皮肤反应情况，判定情况：(一)红肿范围<5mm，(+)红肿硬结范围>5mm，(++)红肿硬结范围6～10mm。
1.6统计学分析 采用SPSS统计软件，两组间平均数采用t检验，生存率采用寿命表法和Logrank检验，中位生存期采用图解法和线性内插法，平均生存期采用乘积限估计法。
, 百拇医药
2、结果
2.1两组逐年生存率比较 见表4。
表4 结直肠癌患者术后瘤苗组与对照组逐年生存率比较
治疗方法
例数
逐年生存率*(%，x±s)
0
1
2
3
4
5
, 百拇医药
6
7
瘤苗组
310
97.05±0.97
84.35±2.10
76.42±3.32
71.12±3.43
66.51±3.84
60.52±4.57
60.52±4.57
56.50±6.52
, 百拇医药
对照组
257
93.16±1.60
74.83±2.51
62.50±2.06
50.58±1.99
45.57±1.32
44.76±0.81
44.76±0.81
43.42±4.32
*两组间数据采用寿命表法X2检验P<0.005
, 百拇医药
2.2两组中位生存期、平均生存期比较 寿命表法统计瘤苗组7年生存率为56.50%，中位生存期在50%左右，因此图解法计算中位生存期大于7年，对照组经线性内插法计算中位生存期4.46年，瘤苗组平均生存期(5.13±0.60)年，对照组为(4.15±0.60)年，见表5。
表5 结直肠癌患者术后瘤苗组与对照组生存期比较
治疗方法
例数
中位生存期(年)
平均生存期(年)
瘤苗组
310
>7*
, 百拇医药
5.13±0.60*
对照组
257
4.46
4.15±0.60
*寿命表法统计的7年生存率为56.60%，大于50%，因此采用图解法算出的中位生存期大于7年，**P<0.01
2.3疫苗反应情况与生存率关系 见表6。瘤苗组患者进行皮肤迟发性超敏反应试验(DTH)阳性率达90%以上，瘤苗对患者主动免疫绝大部分成功。
表6 结直肠患者术后瘤苗组DTH阳性组与阴性组5年生存率、生存年限比较
DTH(硬结直径)
, http://www.100md.com
例数
5年生存例数
生存率*(%)
生存时间(年)
阳性组(≥5mm)
10
8
80*
4.7±0.67±
阴性组(<5mm)
10
3
30
, http://www.100md.com
3.5±1.80
3、讨论
结直肠癌多为腺癌，在国内虽然术后有很大一部分患者应用放疗和化疗，但5年生存率一直持续在50%以下。我们随访567例结直肠癌患者，其中单纯手术组257例，5年生存率为45.57%，说明手术加放、化疗难以再提高患者的生存率。我们采用本所研制的自体肿瘤细胞疫苗对结直肠癌术后患者进行主动特异性免疫，随访年，术后应用疫苗患者的5，6，7年生存率分别为66.51%，60.52%，56.50%。而单纯手术加放疗或化疗患者的5，6，7年生存率分别为45.57%，44.76%，43.42%，两者相比生存率提高了20.94，15.76，13.08个百分点。提高幅度分别达46.0%，35.2%，30.1%，说明自体瘤苗确能大幅度提高结直肠癌患者的长期生存率。中位生存期提高的更为明显，瘤苗组为7年以上，耐 单纯手术组为4.46年，提高2.5年以上，提高幅度达57%。瘤苗组平均生存期为5.13，而单纯手术组为4.15年，平均提高1年。
, 百拇医药
我们对结直肠癌术后患者在应用瘤苗前和应用瘤苗后2周，进行DTH试验，以蒸馏水作对照，应用瘤苗前DTH反应均为阴性，应用瘤苗2周以上患者DTH反应90%以上为阳性。其中阳性组5年生存率为80%，而阴性组为30%，二者差异显著。说明自体瘤苗对结直肠癌术后患者进行主动特异性免疫，确能使大部分患者产生迟发性超敏反应，致敏成功。5年生存率的显著提高，证明是由于注射瘤苗后提高了患者机体抗肿瘤免疫功能。
国内外者制备瘤苗时采用加入病毒性或细菌性佐剂如NDV(新城鸡瘟病毒)或BCG(卡介苗)等，这些佐剂本身有非特异性免疫作用。为了便于分析自体肿瘤细胞修饰抗原的免疫作用，我们制备的自体瘤苗未加入病毒性或细菌性佐剂，该瘤苗应用后产生的临床效果为自体肿瘤细胞疫苗本身效果。
我们用国内外少见的大样本长期临床观察资料，证明了自体肿瘤细胞疫苗对结直肠癌患者进行主动特异性免疫的显著疗效。, http://www.100md.com
关键词：肛肠病；大肠癌；肿瘤细胞疫苗；生存率
摘要：为观察自体肿瘤细胞疫苗对术后Ⅰ～Ⅳ期结直肠癌患者的治疗效果，将患者分为对照组(单纯手术切除组)257例，疫苗组(手术加疫苗)310例。疫苗组的患者5,6,7年生存率分别 66.51%，60.52%，56.50%；对照组分别是45.57%，44.76%，43.42%。平均生存期，疫苗组为5.13年，中位生存期7年以上；对照组为4.15年，中位生存期4.46年，两组有显著性差异。疫苗组患者注射疫苗后的皮肤迟发性超敏反应(DTH)，硬结范围超过5mm的患者，5年生存率达80%，硬结范围小于5mm的患者仅为30%。结果表明，自体肿瘤细胞疫苗可延长患者生存时间，提高生存质量。
结直肠癌是一种分化程度较高的消化道恶性肿瘤，其手术切除率高，但在国内5年生存率却一直维持在50%以下水平，表明通过手术加放、化疗的方法治疗结直肠癌，难以进一步提高其生存率。应用自体肿瘤细胞疫苗(瘤苗)作为肿瘤术后治疗手段以提高生存率，在国内仅有小样本观察报道。国我肯长期观察报道的为美国东部协作组22所医院对Ⅱ、Ⅲ其结直肠癌患者应用瘤苗的观察，该文报道了患者注射疫苗后DTH阳性组5年生存率83%，阴性组仅30%。本文报道了我所研制的自体肿瘤细胞疫苗应用于结直肠癌Ⅰ～Ⅳ期310例术后患者与单纯手术组257例对照，随访7年，比较其生存率、中痊生存期、平均生存期，为自体肿瘤细胞疫苗的临床应用提供理论依据。
, 百拇医药
1、材料和方法
1.1临床资料 我院1993～1995年收治的567例结直肠癌患者，分成两组，随访年，其中术后应用自体肿瘤细胞疫苗组310例，男204例，女106例；年龄19～79岁，平均55.8岁。该组患者Miles术式136例，结肠术式98例，前切术式74例，局切术式2例。单纯手术组(对照组)257例，男155例，女102例；年龄18～77岁，平均55.1岁。该组患者Miles术式120例，结肠术式78例，前切术式59例。观察了20例肠癌术后瘤苗患者的DTH情况，其中男10例，女10例，该组病例为Ⅱ～Ⅲ期结肠癌术后患者，年龄35～65岁，平均52.7岁。随访结果见表1及表2，TNF分期见表3。
表1 1993～2000年结直肠癌患者术后应用瘤苗组生存情况随访结果
年份
例数
, 百拇医药
生存年数
0
1
2
3
4
5
6
7
1993～2000
50
50
50
44
, 百拇医药
39
35
31
31
29
1994～2000
133
133
125
104
94
90
85
, http://www.100md.com
75
0
1995～2000
127
126
126
116
106
98
93
0
0
合计
, 百拇医药 310
310
301
264
239
223
209
106
29
表2 1993～2000年结直肠癌患者单纯手术组生存情况随访结果
年份
例数
生存年数
, 百拇医药
0
1
2
3
4
5
6
7
1993～2000
73
73
71
60
54
, 百拇医药
41
35
34
33
1994～2000
94
94
85
68
56
47
43
43
, 百拇医药 0
1995～2000
90
90
84
69
57
50
47
0
0
合计
257
257
, http://www.100md.com
240
197
167
138
125
77
33
表3 结直肠癌患者术后应用瘤苗组与单纯手术组TNF分期组成情况
治疗方法
例数
TNF分期(%)
Ⅰ
Ⅱ
, http://www.100md.com
Ⅲ
Ⅳ
手术+瘤苗组
310
46(14.8)
121(39.0)
80(25.8)
63(20.3)
单纯手术组
257
55(21.4)
94(36.6)
, 百拇医药 66(25.7)
42(16.3)
合计
567
101
215
146
105
1.2材料及试剂 患者术后的癌组织标本(φ≥1cm)，榄香烯乳注射液(大连金港制药厂)，丝裂霉素C，25%戊二醛(E Merk)，RPMI1640完全培养基。
1.3方法 患者术后的无菌癌组织标本放于无菌容器内，在2h内送到实验室。按本室常规制备肿瘤细胞悬液后，加入丝裂霉素C1mg/ml，榄香烯0.3mg/ml，置37℃培养箱内0.5h，加热(42℃)30min，离心洗涤细胞悬液后，以0.0625%戊二醛固定10min，洗去固定液，制成无菌自体肿瘤细胞悬液(≥107/ml)。
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1.4免疫程序
1.4.1首次免疫：患者术后1周开始第1次免疫注射，每周注射1次，共4次。
1.4.2强化免疫：首次免疫治疗后间隔1～2个月后，进行强化免疫。
1.4.3注射方法：选择上肢前臂或肩三角区皮肤，3点注射，每点相距3～5cm，皮内1点约0.2ml，皮下2点，每点约0.4ml。
1.5DTH试验 该项试验在结直肠癌术后患者应用瘤苗前和应用瘤苗2周以后进行，以蒸馏水作对照，72h后观察局部皮肤反应情况，判定情况：(一)红肿范围<5mm，(+)红肿硬结范围>5mm，(++)红肿硬结范围6～10mm。
1.6统计学分析 采用SPSS统计软件，两组间平均数采用t检验，生存率采用寿命表法和Logrank检验，中位生存期采用图解法和线性内插法，平均生存期采用乘积限估计法。
, 百拇医药
2、结果
2.1两组逐年生存率比较 见表4。
表4 结直肠癌患者术后瘤苗组与对照组逐年生存率比较
治疗方法
例数
逐年生存率*(%，x±s)
0
1
2
3
4
5
, 百拇医药
6
7
瘤苗组
310
97.05±0.97
84.35±2.10
76.42±3.32
71.12±3.43
66.51±3.84
60.52±4.57
60.52±4.57
56.50±6.52
, 百拇医药
对照组
257
93.16±1.60
74.83±2.51
62.50±2.06
50.58±1.99
45.57±1.32
44.76±0.81
44.76±0.81
43.42±4.32
*两组间数据采用寿命表法X2检验P<0.005
, 百拇医药
2.2两组中位生存期、平均生存期比较 寿命表法统计瘤苗组7年生存率为56.50%，中位生存期在50%左右，因此图解法计算中位生存期大于7年，对照组经线性内插法计算中位生存期4.46年，瘤苗组平均生存期(5.13±0.60)年，对照组为(4.15±0.60)年，见表5。
表5 结直肠癌患者术后瘤苗组与对照组生存期比较
治疗方法
例数
中位生存期(年)
平均生存期(年)
瘤苗组
310
>7*
, 百拇医药
5.13±0.60*
对照组
257
4.46
4.15±0.60
*寿命表法统计的7年生存率为56.60%，大于50%，因此采用图解法算出的中位生存期大于7年，**P<0.01
2.3疫苗反应情况与生存率关系 见表6。瘤苗组患者进行皮肤迟发性超敏反应试验(DTH)阳性率达90%以上，瘤苗对患者主动免疫绝大部分成功。
表6 结直肠患者术后瘤苗组DTH阳性组与阴性组5年生存率、生存年限比较
DTH(硬结直径)
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例数
5年生存例数
生存率*(%)
生存时间(年)
阳性组(≥5mm)
10
8
80*
4.7±0.67±
阴性组(<5mm)
10
3
30
, http://www.100md.com
3.5±1.80
3、讨论
结直肠癌多为腺癌，在国内虽然术后有很大一部分患者应用放疗和化疗，但5年生存率一直持续在50%以下。我们随访567例结直肠癌患者，其中单纯手术组257例，5年生存率为45.57%，说明手术加放、化疗难以再提高患者的生存率。我们采用本所研制的自体肿瘤细胞疫苗对结直肠癌术后患者进行主动特异性免疫，随访年，术后应用疫苗患者的5，6，7年生存率分别为66.51%，60.52%，56.50%。而单纯手术加放疗或化疗患者的5，6，7年生存率分别为45.57%，44.76%，43.42%，两者相比生存率提高了20.94，15.76，13.08个百分点。提高幅度分别达46.0%，35.2%，30.1%，说明自体瘤苗确能大幅度提高结直肠癌患者的长期生存率。中位生存期提高的更为明显，瘤苗组为7年以上，耐 单纯手术组为4.46年，提高2.5年以上，提高幅度达57%。瘤苗组平均生存期为5.13，而单纯手术组为4.15年，平均提高1年。
, 百拇医药
我们对结直肠癌术后患者在应用瘤苗前和应用瘤苗后2周，进行DTH试验，以蒸馏水作对照，应用瘤苗前DTH反应均为阴性，应用瘤苗2周以上患者DTH反应90%以上为阳性。其中阳性组5年生存率为80%，而阴性组为30%，二者差异显著。说明自体瘤苗对结直肠癌术后患者进行主动特异性免疫，确能使大部分患者产生迟发性超敏反应，致敏成功。5年生存率的显著提高，证明是由于注射瘤苗后提高了患者机体抗肿瘤免疫功能。
国内外者制备瘤苗时采用加入病毒性或细菌性佐剂如NDV(新城鸡瘟病毒)或BCG(卡介苗)等，这些佐剂本身有非特异性免疫作用。为了便于分析自体肿瘤细胞修饰抗原的免疫作用，我们制备的自体瘤苗未加入病毒性或细菌性佐剂，该瘤苗应用后产生的临床效果为自体肿瘤细胞疫苗本身效果。
我们用国内外少见的大样本长期临床观察资料，证明了自体肿瘤细胞疫苗对结直肠癌患者进行主动特异性免疫的显著疗效。, http://www.100md.com