汉坦病毒84Fli株S和M片段基因克隆、序列分析及在真核细胞中表达的研究
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中国预防医学科学院病毒学研究所 100052北京 刘尊；李德新；李川；王晓芳；孟祥芝；梁米芳
汉坦病毒|S和M基因片段|核苷酸序列分析|瞬时表达
参见附件(56kb)。
中国预防医学科学院病毒学研究所 100052北京 刘尊；李德新；李川；王晓芳；孟祥芝；梁米芳
关键词：汉坦病毒；S和M基因片段；核苷酸序列分析；瞬时表达
摘要：目的 克隆汉坦病毒84Fki株S,M片段,测定这些基因的核苷酸序列,用瞬时表达了解S和M片段在真核细胞中的表达。方法 以我国分离的汉坦病毒84Fki株感染的Vero E6细胞提取总RNA,用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)技术扩增其S及M片段的全长cDNA。然后将84Fki株的S,M片段cDNA基因分别克隆入pCR2 1 TOPO载体中,随机挑选其中的3个克隆测定核酸序列,确定汉坦病毒84Fki株S和M片段核苷酸序列。根据S和M片段核苷酸序列设计引物,PCR扩增S及M片段的编码区,构建了真核表达质粒pcDNA3 84SC及pcDNA3 84MC。用质脂体法把质粒转入COS7细胞,瞬时表达NP及G1和G2糖蛋白。用免疫荧光(IFA)、Westernbkot和免疫沉淀方法检测核蛋白及糖蛋白的表达。结果 汉坦病毒84Fki株的基因组S片段长度为1688个核苷酸,编码430个氨基酸。汉坦病毒84Fki株的基因组M片段长度为3616个核苷酸,编码1136个氨基酸。用免疫荧光(IFA)检测S和M片段在COS细胞中的瞬时表达为阳性。Westernbkot结果显示,存在有相对分子质量为50000左右的核蛋白表达,免疫沉淀法显示有核蛋白、G1和G2糖蛋白的表达。结论 84Fki株病毒和其他汉滩病毒在核苷酸序列上虽有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍很高,成功地在COS7细胞中瞬时表达了汉滩病毒的核蛋白及糖蛋白。
中国预防医学科学院病毒学研究所 100052北京 刘尊；李德新；李川；王晓芳；孟祥芝；梁米芳
关键词：汉坦病毒；S和M基因片段；核苷酸序列分析；瞬时表达
摘要：目的 克隆汉坦病毒84Fki株S,M片段,测定这些基因的核苷酸序列,用瞬时表达了解S和M片段在真核细胞中的表达。方法 以我国分离的汉坦病毒84Fki株感染的Vero E6细胞提取总RNA,用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)技术扩增其S及M片段的全长cDNA。然后将84Fki株的S,M片段cDNA基因分别克隆入pCR2 1 TOPO载体中,随机挑选其中的3个克隆测定核酸序列,确定汉坦病毒84Fki株S和M片段核苷酸序列。根据S和M片段核苷酸序列设计引物,PCR扩增S及M片段的编码区,构建了真核表达质粒pcDNA3 84SC及pcDNA3 84MC。用质脂体法把质粒转入COS7细胞,瞬时表达NP及G1和G2糖蛋白。用免疫荧光(IFA)、Westernbkot和免疫沉淀方法检测核蛋白及糖蛋白的表达。结果 汉坦病毒84Fki株的基因组S片段长度为1688个核苷酸,编码430个氨基酸。汉坦病毒84Fki株的基因组M片段长度为3616个核苷酸,编码1136个氨基酸。用免疫荧光(IFA)检测S和M片段在COS细胞中的瞬时表达为阳性。Westernbkot结果显示,存在有相对分子质量为50000左右的核蛋白表达,免疫沉淀法显示有核蛋白、G1和G2糖蛋白的表达。结论 84Fki株病毒和其他汉滩病毒在核苷酸序列上虽有差异,但在氨基酸水平上的同源性仍很高,成功地在COS7细胞中瞬时表达了汉滩病毒的核蛋白及糖蛋白。
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