乙肝病毒表面抗原基因在胡萝卜中的克隆及表达

http://www.100md.com 北京市肝炎研究所；北京农业生物技术研究中心 北京100054 赵秀英；张晓东；张霆；黄德庄；阎惠平；罗朝霞；

乙肝病毒表面抗原|基因枪|胡萝卜|除草剂抗性

    参见附件(55kb)。

     北京市肝炎研究所；北京农业生物技术研究中心 北京100054 赵秀英；张晓东；张霆；黄德庄；阎惠平；罗朝霞；杨凤平

    关键词：乙肝病毒表面抗原；基因枪；胡萝卜；除草剂抗性

    摘要：构建HBV表面抗原(HBsAg)植物表达载体并在胡萝卜植株中表达。采用自行构建adr亚型HBsAg基因克隆T adr,再次酶切获得860bp含PreS2的HBsAg基因片段,将其插入到植物表达载体pBPC55,新质粒命名为pBPC91adr。将其与含除草剂抗性基因及GUS蛋白基因的筛选质粒pBPC93共同经基因枪(PDS 1000/He)转化胡萝卜悬浮细胞,经含除草剂(Biokaphos)的培养基筛选及植物激素诱导分化,获得除草剂抗性胡萝卜幼苗。结果为转化后8周,自胡萝卜细胞中分化出除草剂抗性胡萝卜幼苗。提取新分化幼苗总DNA,特异性引物PCR扩增后可见860bp扩增带;Southern Bkot证明有HBsAg基因整合,胡萝卜蛋白萃取物的Western Bkot及ELISA检测证实有HBsAg蛋白表达。利用基因枪转化使质粒pBPC91adr中HBsAg基因在胡萝卜幼苗内整合并表达,提示以植物生产疫苗具有可行性。

    http://www.100md.com/html/analecta/2002/08/01/03/686.htm

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