rhGM-CSF在真核细胞中的长期稳定表达及糖基化
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华西医科大学免疫教研室；四川成都610041 戴萍；魏大鹏；章崇杰；蔡美英
重组hGM-CSF|RT-PCR|真核表达|糖基化
参见附件(50kb)。
华西医科大学免疫教研室；四川成都610041 戴萍；魏大鹏；章崇杰；蔡美英
关键词：重组hGM-CSF；RT-PCR；真核表达；糖基化
摘要：通过重组DNA技术 ,经RT -PCR从人外周血淋巴细胞中获得全长cDNA序列 ,连入pcDNA3 .1(+ )中 ,构建了可以在哺乳动物细胞稳定表达的质粒pcDNA -hGM -CSF ,并用脂质体法转入CHO细胞 ,经G4 18筛选 ,建立起长期稳定分泌hGM -CSF的细胞株 ,在三个月的观察中分泌量恒定在 43.49± 8.45 6ng/ml,活性单位达 480IU/ml/ 10 5个细胞 ,Western -blot证实该细胞株分泌的hGM -CSF有 6种分子量 ,主带在 17KD及 35KD左右 ,提示其有不同程度糖基化。
华西医科大学免疫教研室；四川成都610041 戴萍；魏大鹏；章崇杰；蔡美英
关键词：重组hGM-CSF；RT-PCR；真核表达；糖基化
摘要：通过重组DNA技术 ,经RT -PCR从人外周血淋巴细胞中获得全长cDNA序列 ,连入pcDNA3 .1(+ )中 ,构建了可以在哺乳动物细胞稳定表达的质粒pcDNA -hGM -CSF ,并用脂质体法转入CHO细胞 ,经G4 18筛选 ,建立起长期稳定分泌hGM -CSF的细胞株 ,在三个月的观察中分泌量恒定在 43.49± 8.45 6ng/ml,活性单位达 480IU/ml/ 10 5个细胞 ,Western -blot证实该细胞株分泌的hGM -CSF有 6种分子量 ,主带在 17KD及 35KD左右 ,提示其有不同程度糖基化。
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