恶性疟原虫MSA2编码基因分枝杆菌穿梭质粒的构建及序列测定
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深圳市卫生防疫站；广东省妇幼保健医院 广东深圳518020 吴少庭；高世同；林敏；张仁利；梁驹卿
疟原虫|恶性|裂殖子表面抗原-2编码基因|克隆|序列分析
参见附件(93kb)。
深圳市卫生防疫站；广东省妇幼保健医院 广东深圳518020 吴少庭；高世同；林敏；张仁利；梁驹卿
关键词：疟原虫；恶性；裂殖子表面抗原-2编码基因；克隆；序列分析
摘要：目的 构建恶性疟原虫FCC-1/HN株MSA2编码基因分枝杆菌穿梭质粒重组子pBCG5.6/MSA2,并进行序列测定。 方法 根据恶性疟原虫MSA2编码基因的两侧序列设计引物,采用PCR技术扩增出MSA2编码基因全长片段,经低熔点琼脂糖挖块法回收纯化后,插入分枝杆菌穿梭质粒pBCG5.6/MSA2,并转化大肠杆菌DH5α,快速酚法初筛阳性重组子,阳性克隆以PCR法与限制性酶切分析鉴定后,双脱氧链终止法双向进行序列测定。 结果 从恶性疟原虫基因组中扩增出约820bp的基因片段,所构建pBCG5.6/MSA2重组体阳性克隆经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致,测序结果确证了插入片段的正确性。 结论 成功构建了恶性疟原虫MSA2编码基因分枝杆菌穿梭表达质粒,为恶性疟BCG疫苗的研制奠定了基础。
深圳市卫生防疫站；广东省妇幼保健医院 广东深圳518020 吴少庭；高世同；林敏；张仁利；梁驹卿
关键词：疟原虫；恶性；裂殖子表面抗原-2编码基因；克隆；序列分析
摘要：目的 构建恶性疟原虫FCC-1/HN株MSA2编码基因分枝杆菌穿梭质粒重组子pBCG5.6/MSA2,并进行序列测定。 方法 根据恶性疟原虫MSA2编码基因的两侧序列设计引物,采用PCR技术扩增出MSA2编码基因全长片段,经低熔点琼脂糖挖块法回收纯化后,插入分枝杆菌穿梭质粒pBCG5.6/MSA2,并转化大肠杆菌DH5α,快速酚法初筛阳性重组子,阳性克隆以PCR法与限制性酶切分析鉴定后,双脱氧链终止法双向进行序列测定。 结果 从恶性疟原虫基因组中扩增出约820bp的基因片段,所构建pBCG5.6/MSA2重组体阳性克隆经双酶切和PCR鉴定与预期结果一致,测序结果确证了插入片段的正确性。 结论 成功构建了恶性疟原虫MSA2编码基因分枝杆菌穿梭表达质粒,为恶性疟BCG疫苗的研制奠定了基础。
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