hBDNF基因原核表达重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达
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华西医科大学附一院外科实验室；成都610041 刘智敏；陈俊杰；林佳；王若菡；游乐然；东云华
hBDNF|基因克隆|SDS-PAGE|原核表达|Western杂交
参见附件(149kb)。
华西医科大学附一院外科实验室；成都610041 刘智敏；陈俊杰；林佳；王若菡；游乐然；东云华
关键词：hBDNF；基因克隆；SDS-PAGE；原核表达；Western杂交
摘要：我们按照 h BDNF基因全长编码序列设计合成引物 ,从人基因组 DNA中扩增出 76 0 bp的片段 ,反向插入到 p GEM- 3Zf(+ )载体上 ,获得 p GEMBF18克隆 ,限制性酶分析和 DNA序列测定均证实该克隆插入片段为h BDNF基因全长编码序列。从 p GEMBF18克隆中获取 h BDNF全长编码片段 ,与原核表达载体 p GEX- 5 T连接 ,构建了 p5 TBF34原核表达重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌 JM10 9,经 IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE特异区带分子量为 43k Da,此重组蛋白占菌体可溶性蛋白总量的 7.5 3% ,Western杂交证实该特异区带具 h BDNF抗原活性。
华西医科大学附一院外科实验室；成都610041 刘智敏；陈俊杰；林佳；王若菡；游乐然；东云华
关键词：hBDNF；基因克隆；SDS-PAGE；原核表达；Western杂交
摘要：我们按照 h BDNF基因全长编码序列设计合成引物 ,从人基因组 DNA中扩增出 76 0 bp的片段 ,反向插入到 p GEM- 3Zf(+ )载体上 ,获得 p GEMBF18克隆 ,限制性酶分析和 DNA序列测定均证实该克隆插入片段为h BDNF基因全长编码序列。从 p GEMBF18克隆中获取 h BDNF全长编码片段 ,与原核表达载体 p GEX- 5 T连接 ,构建了 p5 TBF34原核表达重组质粒。重组质粒转化大肠杆菌 JM10 9,经 IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE特异区带分子量为 43k Da,此重组蛋白占菌体可溶性蛋白总量的 7.5 3% ,Western杂交证实该特异区带具 h BDNF抗原活性。
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