肺炎支原体P1蛋白结构基因片段的制备及C末端基因片段克隆的研究

http://www.100md.com 中国医科大学基础医学院病原生物学教研室；(沈阳；110001)；中国人民解放军202医院 王桂珍；董占双；刘忠顺

    参见附件(41kb)。

     中国医科大学基础医学院病原生物学教研室；(沈阳；110001)；中国人民解放军202医院 王桂珍；董占双；刘忠顺；李保强

    关键词：肺炎支原体；P1蛋白基因；基因克隆

    摘要：目的 制备肺炎支原体P1蛋白结构基因,并在大肠杆菌中克隆肺炎支原体P1蛋白C末端基因片段,为P1蛋白基因片段的扩增、表达及探讨C末端基因片段功能打基础。方法 PCR扩增方法获取P1结构基因。扩增产物用P1蛋白基因特异引物扩增鉴定。用SakⅠ和EcoRⅠ双酶酶切消化方法制备P1蛋白C末端基因片段,并与pUC19DNA连接,转入大肠杆菌JM109菌株。用X-gak平板及质粒图谱分析方法筛选重组克隆株,再用限制性核酸内切酶酶切图谱分析鉴定。结果 经PCR扩增MPDNA获得一条5.0kbDNA片段,用P1基因区特异引物扩增鉴定获得阳性结果。重组质粒限制性内切酶指纹图谱显示出两条带,一条为pUC19载体DNA带,另一条是1kb的插入片段。结论 获得肺炎支原体P1蛋白结构基因及含P1蛋白C末端DNA片段的重组克隆株。

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