人重组钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

http://www.100md.com 北京大学基础医学院免疫学系；北京100083 狄春辉；施群；张颖妹；赵辰；钟英成；黄大无；马大龙

大肠杆菌|钙磷脂结合蛋白V,代谢|脱噬作用

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     北京大学基础医学院免疫学系；北京100083 狄春辉；施群；张颖妹；赵辰；钟英成；黄大无；马大龙

    关键词：大肠杆菌；钙磷脂结合蛋白V/代谢；脱噬作用

    摘要：目的:为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法:利用RT PCR技术从人外周血单核细胞系U937cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)cDNA,并克隆到大肠杆菌表达载体中,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2AnnexinⅤ融合蛋白。表达产物经凝血酶消化,可除去MS2细菌蛋白,再经离子交换层析纯化,可得成熟的AnnexinⅤ纯品,FITC标记后的AnnexinⅤ可用于细胞凋亡的检测。结果:在大肠杆菌表达的人重组AnnexinⅤ占菌体蛋白的56%,经纯化获得99%纯度的非融合型AnnexinⅤ,FITC标记的An nexinⅤ能有效地检测凋亡细胞。结论:成功地建立了批量获取AnnexinⅤ的技术路线,为推广高效检测凋亡技术提供了基础。

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