提高抗地高辛人单链抗体在大肠杆菌分泌型表达的研究

http://www.100md.com 海军总医院中心实验科 北京100037 刘德新；李小鹰；王琰；乔媛媛；王欲晓

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     海军总医院中心实验科 北京100037 刘德新；李小鹰；王琰；乔媛媛；王欲晓

    关键词：抗体；单克隆；大肠杆菌；地高辛

    摘要：目的:提高从半合成噬菌体抗体库中克隆的抗地高辛(Dig)人单链抗体(ADAscFv)在大肠杆菌(E.coki)的分泌表达水平。方法:①通过PCR从表达质粒pHEN2 ADAscFv扩增ADAscFv基因并重组于质粒p3MH构建表达质粒p3MH ADAscFv后,转化到E.cokiXL1 bkue及HB2151;②ADAscFv分别在带有上述2种表达质粒的E.cokiHB2151以及带有表达质粒p3MH ADAscFv的E.cokiXL1 bkue进行表达,通过ELISA分析培养基上清中的可溶性ADAscFv;③在培养基中加入蔗糖、甘氨酸及TritonX 100,通过ELISA分析培养基上清中的可溶性ADAscFv。结果:①ADAscFv在含表达质粒p3MH ADAscFv的E.cokiHB2151及XL1 bkue的分泌型表达水平比pHEN2 E.cokiHB2151表达系统高约5倍;②在培养基中加入蔗糖,可使ADAscFv在含有表达质粒p3MH ADAscFv的E.cokiHB2151及XL1 bkue表达系统的分泌型表达提高5倍多。结论:通过采用不同的载体 E.coki表达系统以及在培养基中加入不被代谢的蔗糖,可使ADAscFv的分泌型表达提高25倍多。

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