9.1C3胞内抗体基因的克隆及其对9.1C3分子表达的抑制作用
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第四军医大学免疫教研室 欧阳为明；金伯泉；夏海滨；刘飞；李德敏；张建
聚合酶链反应|ScFv|胞内抗体|表达载体|Jurkat细胞
参见附件(52kb)。
第四军医大学免疫教研室 欧阳为明；金伯泉；夏海滨；刘飞；李德敏；张建
关键词：聚合酶链反应；ScFv；胞内抗体；表达载体；Jurkat细胞
摘要：目的 获得91C3胞内抗体基因的真核表达载体,观察胞内抗体对91C3分子表达的抑制作用,为进一步研究91C3分子对NK细胞功能的影响打下基础。方法 设计引物,以91C3ScFv基因为模板进行PCR扩增,引入蛋白质内质网定位所需的信号肽、KDEL以及作为表达检测标记的Etag序列。回收纯化PCR产物,酶切后连接到pUC19载体上,并进行序列测定。序列正确后切下胞内抗体基因片段,重组到真核表达载体pRc/CMV中,酶切鉴定后用DEAEdextran方法瞬时转染真核细胞COS7,用胞内染色和Westernblot方法检测胞内抗体的表达。接着用Lipofectamine把胞内抗体基因转入91C3阳性的Jurkat细胞。
第四军医大学免疫教研室 欧阳为明；金伯泉；夏海滨；刘飞；李德敏；张建
关键词：聚合酶链反应；ScFv；胞内抗体；表达载体；Jurkat细胞
摘要：目的 获得91C3胞内抗体基因的真核表达载体,观察胞内抗体对91C3分子表达的抑制作用,为进一步研究91C3分子对NK细胞功能的影响打下基础。方法 设计引物,以91C3ScFv基因为模板进行PCR扩增,引入蛋白质内质网定位所需的信号肽、KDEL以及作为表达检测标记的Etag序列。回收纯化PCR产物,酶切后连接到pUC19载体上,并进行序列测定。序列正确后切下胞内抗体基因片段,重组到真核表达载体pRc/CMV中,酶切鉴定后用DEAEdextran方法瞬时转染真核细胞COS7,用胞内染色和Westernblot方法检测胞内抗体的表达。接着用Lipofectamine把胞内抗体基因转入91C3阳性的Jurkat细胞。
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