柯萨奇B3病毒结构和非结构蛋白DNA疫苗诱导小鼠产生免疫应答的研究
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上海第二医科大学微生物学教研室美国宾夕法尼亚大学 王灵枢；刘晶星；朱莉；陆德源
参见附件(53kb)。
上海第二医科大学微生物学教研室美国宾夕法尼亚大学 王灵枢；刘晶星；朱莉；陆德源
关键词：柯萨奇病毒B3；DNA疫苗
摘要：目的 制备4种柯萨奇B3病毒(CVB3)结构和非结构蛋白重组质粒DNA疫苗,并探讨其诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。方法 用基因重组技术构建4种CVB3结构和非结构蛋白重组质粒,将各重组质粒体外转染真核细胞,用Westernbkot检测表达产物;于BALB/c小鼠后腿胫骨前肌注射免疫,于0、4、8周共免疫3次,100μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。结果 4种重组质粒酶切出相应大小的片段,经测序证实为CVB3序列,Westernbkot证实能够在体外真核细胞中表达。pcDNA3/VP2、pcDNA3/VP1、pcDNA3/2A和pcDNA3/3D均可诱导小鼠产生相应的特异性抗体、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和淋巴细胞增殖反应、迟发型超敏反应(DTH),并对致死量的CVB3m、CVB5和CVB2攻击具有保护作用,表现为病毒攻击后第3天血中病毒滴度降低,第10天心肌病理变化比对照组明显减轻,且小鼠生存率显著提高。其中以pcDNA/VP1和pcDNA3/3D组保护作用最明显。结论 CVB3结构蛋白VP1和非结构蛋白3D质粒DNA有可能用作CVBDNA疫苗的候选基因,值得进一步深入研究。
上海第二医科大学微生物学教研室美国宾夕法尼亚大学 王灵枢；刘晶星；朱莉；陆德源
关键词：柯萨奇病毒B3；DNA疫苗
摘要：目的 制备4种柯萨奇B3病毒(CVB3)结构和非结构蛋白重组质粒DNA疫苗,并探讨其诱导机体产生体液和细胞免疫应答的效果。方法 用基因重组技术构建4种CVB3结构和非结构蛋白重组质粒,将各重组质粒体外转染真核细胞,用Westernbkot检测表达产物;于BALB/c小鼠后腿胫骨前肌注射免疫,于0、4、8周共免疫3次,100μg/次。免疫后不同时间检测体液和细胞免疫应答指标。结果 4种重组质粒酶切出相应大小的片段,经测序证实为CVB3序列,Westernbkot证实能够在体外真核细胞中表达。pcDNA3/VP2、pcDNA3/VP1、pcDNA3/2A和pcDNA3/3D均可诱导小鼠产生相应的特异性抗体、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和淋巴细胞增殖反应、迟发型超敏反应(DTH),并对致死量的CVB3m、CVB5和CVB2攻击具有保护作用,表现为病毒攻击后第3天血中病毒滴度降低,第10天心肌病理变化比对照组明显减轻,且小鼠生存率显著提高。其中以pcDNA/VP1和pcDNA3/3D组保护作用最明显。结论 CVB3结构蛋白VP1和非结构蛋白3D质粒DNA有可能用作CVBDNA疫苗的候选基因,值得进一步深入研究。
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